生化室操作作业指导书Word格式.docx
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血清总胆红素测定
15
血清直接胆红素测定
16
血清a-淀粉酶测定
17
脑脊液、尿液微量蛋白测定
18
血清钾测定
19
血清磷测定
20
血清胆碱酯酶测定
21
血清碱性磷酸酶测定
22
血清丫-谷氨酰转移酶测定
23
血清乳酸脱氢酶测定
24
25
血清肌酸激酶测定
26
血清肌酸激酶同工酶测定
27
血清二氧化碳结合力测定
28
血清总胆汁酸测定
29
血清B2-微球蛋白测定
30
血清低密度脂蛋白胆固醇测定
31
血清脂蛋白(a)测定
32
血清钠测定
33
34
35
36
1.实验原理
国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法。
ALT
L-丙氨酸+-酮戊二酸丙酮酸+L-谷氨酸
十沁円皿+LDH(乳酸脱氢酶)一「皿+
丙酮酸+NADH+H_.L-乳酸+NAD+H2O
上述偶联反应中,NADH的氧化速率与'
样品中ALT的活力成正比,在340nm处
+.-
NADH呈现特性吸收峰,而NAD则没有。
因此,可在340nm监测吸光度的下降速率(-△A/min),计算出ALT的活性单位。
2.标本:
2.1病人准备:
12小时禁食。
2.2类型:
血清,肝素或EDTA血浆。
3.标本存放:
3天内的活性损失:
2〜8C保存:
<10%;
15〜25C保存:
<17%;
标本稳定性:
-20C保存至少可稳定4周。
4.标本运输:
常温条件下保存运输。
5.标本拒收标准:
标本溶血、细菌污染的标本。
6.实验材料
6.1试剂欧泰克ALT测定试剂盒
6.1.1试剂组成
Tris缓冲液pH7.480mmol/L
L-丙氨酸800mmol/L
LDH(乳酸脱氢酶)>1200U/L
a-酮戊二酸18mmol/L
NADH0.18mmol/L
6.1.2试剂准备:
试剂为即用式。
6.1.3试剂稳定性与贮存:
试剂保存于2〜8C,若无污染,可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4变质指示:
当试剂有看得见的微生物生长,有浊度,或者未开盖的液体有沉淀时,表明试剂已变质,不能继续使用。
6.1.5注意事项:
试剂中含叠氮钠(0.95g/L)为防腐剂。
不可入口!
避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂。
6.2校准品:
使用罗氏公司提供的校准品对自动分析仪进行校准,具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
6.3质控品:
具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
7.仪器:
日立7060生化分析仪
8.操作步骤
8.1项目基本参数:
参见生化检验日立7060生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2仪器操作步骤:
参见生化检验日立7060生化分析仪操作规程.SOP文件
9.检验结果的判断与分析
10.质量控制:
在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析,以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。
质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
11.计算方法:
以罗氏复合校准品ALT校准值校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果,以U/L报告。
12.参考值范围[4]
女性<
31U/L
男性<
41U/L
13.临床意义[1,2]:
丙氨酸氨基转移酶(ALT)旧称谷丙转氨酶(GPT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)旧称谷草转氨酶(GOT)。
它们是氨基转移酶类的典型代表。
氨基转移酶催化氨基从氨基酸转移给-酮酸的反应。
ALT是肝脏的特异性酶,仅在肝胆疾病时显著升高。
而AST水平的升高和心肌或骨骼肌损伤,以及肝组织损害等都有关。
因此同时进行ALT和AST的检测,可用于鉴别肝损伤和心肌或骨骼肌损伤。
AST/ALT比率用于肝病的鉴别诊断。
比率<
1预示中度的肝损伤;
比率>
1和严重肝病有关,常见慢性肝病。
14.线性范围4〜800U/L
15.超出范围结果处理本法对ALT活力检测的最大△A/min在340、334nm为0.16,在365nm为0.08。
当样品测定值超过上限时,应将样品用9g/L氯化钠溶液作1:
9稀释,重新测定,结果乘以10。
16.病危报警值的处理:
复查后电话通知临床。
1.实验原理:
国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法,酶偶联反应式为:
AST
L-天门冬氨酸+-酮戊二酸P草酰乙酸+L-谷氨酸
卄论皿+MDH苹果酸脱氢酶卄巾皿+
草酰乙酸+NADH+HL-苹果酸+NAD+H2O
在340nm波长下,监测NADH的氧化速率,即吸光度的下降速率与AST活性呈正比。
<8%;
<10%;
标本
稳定性:
-20C保存至少可稳定3个月。
6.1试剂:
欧泰克
AST测定试剂盒
6.1.1试剂组成
Tris缓冲液
pH7.8
80mmol/L
L-天门冬氨酸
240mmol/L
MDH(苹果酸脱氢酶)
>
600U/L
LDH(乳酸脱氢酶)
1200U/L
a-酮戊二酸
12mmol/L
NADH
0.18mmol/L
6.1.2试剂准备:
6.1.3试剂稳定性与贮存
试剂保存于2〜8C,若无污染,可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
避免接触皮
肤及粘膜。
6.2校准品:
使用罗氏公司提供的复合校准品对自动分析仪进行校准,具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
日立7060生化分析仪
8.1项目基本参数:
参见生化检验日立7060生化分析仪项目测定参数.SOP文件
以罗氏复合校准品AST校准值校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果。
37U/L
13.临床意义
丙氨酸氨基转移酶(ALT)旧称谷丙转氨酶(GPT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)旧称谷草转氨酶(GOT)。
氨基转移酶催化氨基从氨基酸转移给-酮酸的反应。
ALT是肝脏的特异性酶,仅在肝胆疾病时显著升高。
而AST水平的升高和心肌或骨骼肌损伤,以及肝组织损害等都有关。
因此同时进行ALT和AST的检测用于鉴别肝损伤和心肌或骨骼肌损伤。
AST/ALT比率可用于肝病的鉴别诊断。
比率<
1预示中度的肝损伤;
1和严重肝病有关,常见慢性肝病。
14.线性范围2-800U/L。
15.超出范围结果处理:
本法对AST活力检测的最大△A/min在340、334nm为0.16,在365nm为0.08。
当样品测定值超过上限时,应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+9稀释,重新测定,结果乘以10。
血清总蛋白测定
1.实验原理
所有蛋白质分子都含有肽键。
在碱性溶液中,肽键与铜离子结合,生成紫蓝色复合物。
紫蓝色复合物在540nm的吸光度与肽键的数量呈正比关系,可以计算蛋白质含量。
这一反应称双缩脲反应,试剂称双缩脲试剂。
OH—
蛋白质+Cu2+>紫红色复合物
2.标本采集
2.1病人准备:
无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
2.2类型:
血清或血浆。
3.标本存放20〜25C保存可稳定6天;
4〜8C保存可稳定4周;
-20C保存至少可稳定1年。
4.标本运输室温条件下运输
5.标本拒收标准:
细菌污染的不能做测定。
6.实验材料:
6.1欧泰克总蛋白测定试剂盒
6.1.1试剂组成
氢氧化钠300mmol/L
酒石酸钾钠50mmol/L
碘化钾20mmol/L
硫酸铜12mmol/L
试剂为即用式。
试剂避光保存于2〜25C,若无污染,可稳定至失效期。
试剂有效期为24个月。
开盖后应避免污染。
当试剂有浊度时,表明有细菌污染,不能继续使用。
试剂中含有氢氧化钠,不可入口!
如与皮肤及粘膜接触,请立即用大量水冲洗。
使用试剂时应采取必要的防护。
6.2校准品:
使用罗氏公司提供的复合校准品对自动分析仪进行校准,具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
以罗氏复合校准品总蛋白校准值或标准品标准值校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果,以g/L报告。
12.参考值范围
[g/L]
成人:
60〜83
儿童/青少年
男
女
1〜30天
42〜62
41〜63
1〜6个月
44〜66
47〜67
6个月〜1岁
56〜79
55〜70
1〜18岁
57〜80
13.临床意义:
总蛋白检测对于多种疾病的诊断都有价值。
肝脏蛋白合成缺陷、
肾功能损伤引起蛋白丢失、肠道吸收不良或营养不良时总蛋白浓度下降。
而在慢性炎症疾病、肝硬化和脱水时总蛋白浓度升高。
14.线性范围:
0.5〜120g/L
本法线性上限为120g/L。
如样品测定值超过上限时,应将样品用0.9%氯化钠溶液作1:
1稀释,重新测定,结果乘以2。
16.病危报警值的处理
血清白蛋白测定
在pH值4.2时,白蛋白分子带正电荷,与带负电荷的溴甲酚绿(BCG)生成蓝绿色复合物,在628nm处有吸收峰。
复合物的吸光度与白蛋白浓度成正比与同样处理的白蛋白标准液比较,可求得血清中白蛋白的浓度。
pH4.2
白蛋白+溴甲酚绿绿色化合物
无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
血清、肝素或EDTA血浆。
3.标本存放留取标本后请尽快分离血清/血浆。
在室温条件下(15〜25C)可以稳定一周,在冰箱保存的条件下(2〜8C)稳定一个月,-20C保存至少可以稳定3个月。
5.标本拒收标准:
细菌污染的不能做测定。
6.1上海骏实生物科技公司白蛋白测定试剂盒
琥珀酸盐75mmol/L
溴甲酚绿(BCG)0.15mmol/L
试剂有效期为24个月。
试剂不可冰冻。
开盖后应避免污染。
当试剂有浊度时,表明有细菌污染,不能继续使用。
避免试剂与皮肤及粘膜接触。
参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
日立7060生化分析仪
8.1项目基本参数:
参见生化检验日立7060生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤:
9.检验结果的判断与分析
在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析,以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。
质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
11.计算方法:
以罗氏复合校准品白蛋白校准值或标准品标准值校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果。
12.参考值范围:
34〜55g/L
13.临床意义:
白蛋白是血浆中多种物质重要的结合与运输蛋白,并是维持血浆渗透压的主要组分。
血清白蛋白可用于众多疾病的诊断。
血清白蛋白升高通常由于严重失水、血浆浓缩所致,并非蛋白质绝对量的增加。
临床上,尚未发现单纯白蛋白浓度增高的疾病。
急性血清白蛋白降低多见于急性大量出血或严重烫伤时血浆的丢失。
慢性白蛋白降低主要由于肝脏合成白蛋白功能障碍、腹水形成时白蛋白的丢失和肾脏病时白蛋白从尿中的丢失。
妊娠晚期,由于体内对白蛋白的需要量增加,同时伴有血浆容量增高,血清白蛋白可明显下降,但分娩后可迅速恢复正常。
还有极少数先天性白蛋白缺乏症患者,由于白蛋白合成障碍,血清中几乎没有白蛋白,但患者不出现水肿。
白蛋白的定量测定有助于对肝脏疾病如肝硬化的诊断与监视。
此外,白蛋白量反映了个体的健康与营养状况,因此可用于营养不良的诊断及老年住院患者的预后评估。
14.线性范围:
2〜60g/L
15.超出范围结果处理本法线性上限为60g/L。
如样品测定值超过上限时,应将样品用0.9%氯化钠溶液作1:
1稀释,重新测定,结果乘以2。
血清葡萄糖(Glucose)测定
在己糖激酶(HK)催化下,葡萄糖和ATP发生磷酸化反应,生成葡萄糖-6-磷酸(G6P)与ADP。
前者在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)催化下脱氢,生成6-磷酸葡萄糖酸(6PG),同时使NADP还原成NADPH。
NADPH的生成速率与葡萄糖浓度呈正比。
NADPH在波长340nm有吸收峰,可监测吸光度升高速率,计算血清中葡萄糖浓度。
2.标本:
12小时禁食。
血清或血浆(EDTA,肝素或氟化钠),标本最好不要溶血。
迅速分离血清或血浆,减少红细胞糖酵解时葡萄糖的损失。
随机收集尿样。
血清、血浆应在血液采集1小时内,尽早分离。
加入糖分解抑制剂(NaF,KF)后的稳定性:
15〜25C保存可稳定1天,4〜8C保存可稳定7天。
血清
中的葡萄糖,无溶血,无细菌污染,没有添加的防腐剂,在25C下可稳定8个小时,在4C下可稳定72小时。
尿样应保存在2〜8C下并尽快进行分析。
脑脊髓液如果避免蒸发可在2〜8C下稳定至少5天,5天内不检验的标本应在收集后立即储存在-20C的条件下。
4.标本运输:
常温条件下保存运输。
5.标本拒收标准:
细菌污染、超时送检的的标本。
6.试验材料:
6.1欧泰克血糖测定试剂盒,罗氏复合定标液,罗氏质控品I、II。
6.1.1试剂组成:
磷酸缓冲液
,PH7.6
100mmol/L
三磷酸腺苷
(ATP)
4mmol/L
醋酸镁
10mmol/L
+
NAD+
3mmol/L
己糖激酶(
HK)
25KU/L
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)
75KU/L
6.1.2试剂准备:
试剂不可冰冻。
开盖后应避免污染。
避免试剂与皮肤及粘膜接触。
参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
日立7060全自动生化分析仪
8.操作步骤:
参见7060生化分析仪项目测定参数.SOP文件
参见7060生化分析仪操作规程.SOP文件
质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。
以用罗氏复合定标物校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果,以mmol/L报告。
12.参考值范围:
(mmol/L)
血清:
3.9-6.1mmol/L
尿液:
24h尿样<
2.8mmol/day**
脑脊液:
成人:
2.5-4.5mmol/L
儿童:
2.8—4.5mmol/L
13.临床意义:
检测血清或血浆中葡萄糖主要用于糖尿病的诊断和治疗监视,还可用于检出新生儿低血糖症、排除胰岛细胞癌以及评估各种疾病碳水化合物代谢状况。
血清葡萄糖水平可能会异常高(高血糖)或异常低(低血糖)。
葡萄糖测量用于诊断和治疗碳水化合物代谢紊乱,包括糖尿病,新生儿低血糖,自发性低血糖,郎格罕氏岛细胞癌等。
葡糖尿(存在葡萄糖化尿)在健康,怀孕的妇女中很常见。
妊娠葡糖尿的最主要的特征就是每天之间或一天之中有一个显著的变化。
脑脊髓液(CSF)葡萄糖的测定帮助区别病毒性脑膜炎与细菌性脑膜炎;
细菌性脑膜炎和结核性脑膜炎中的葡萄糖值通常很低(不到的40%至50%血清葡萄糖),病毒性脑膜炎中的葡萄糖值通常是正常的。
癌性脑膜炎(肿瘤细胞在脑膜中广泛渗透)也使CSF葡萄糖值在正常值以下。
血清1.00-38.9mmol/L;
尿液、脑脊液1.11-36.08mmol/L。
14.2精密度:
在日立7060生化仪上用质控液来测精密度。
结果反映了该方法的精密度。
当仪器维护,周围环境,干片处理和保存,质控液的复溶以及样品处理等方面发生变化都会影响结果的重复性。
14.3方法学比较:
14.4灵敏度:
本试剂的检测限为1.11mmol/L。
14.5特异性:
14.6病人结果可报告
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