红细胞血型及相关检测.ppt
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红细胞血型及相关检测.ppt
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2022/10/261丁肖华丁肖华1590387171815903871718QQ562796013QQ562796013主要内容uABO血型鉴定血型鉴定uRhD血型鉴定血型鉴定u交叉配血试验交叉配血试验u红细胞抗体筛查及鉴定红细胞抗体筛查及鉴定u血型鉴定和交叉配血自动分析血型鉴定和交叉配血自动分析u吸收放散试验吸收放散试验教学目标掌握掌握ABO和和Rh血型鉴定、交叉配血试验原理、方血型鉴定、交叉配血试验原理、方法和质量控制法和质量控制熟悉红细胞不规则抗体筛查及鉴定方法熟悉红细胞不规则抗体筛查及鉴定方法了解吸收放散试验了解吸收放散试验一、ABO血型鉴定
(一)盐水介质试管法
(一)盐水介质试管法
(二)盐水介质玻片法
(二)盐水介质玻片法(三)微柱凝胶血型定型检测卡法(三)微柱凝胶血型定型检测卡法(四)质量保证:
试管法、玻片法、卡式(四)质量保证:
试管法、玻片法、卡式(五)方法学评价(五)方法学评价(六)临床应用(六)临床应用(七)不一致原因及解决方法(七)不一致原因及解决方法2022/10/265ABO血型鉴定原理血型鉴定原理正向定型:
已知的特异性抗体(标准血清)检查红细胞的未知抗原正向定型:
已知的特异性抗体(标准血清)检查红细胞的未知抗原反向定型:
已知的血型的标准红细胞检查血清中的未知抗体反向定型:
已知的血型的标准红细胞检查血清中的未知抗体A抗原抗原B抗原抗原A和和B抗原抗原无无A和和B抗原抗原抗抗A抗体抗体抗抗B抗体抗体抗抗A、抗、抗B抗体抗体无抗无抗A、抗、抗B抗体抗体2022/10/266ABO血型鉴定结果判断血型鉴定结果判断正向定型(标准血清+被检者红细胞)反向定型(标准红细胞+被检者血清)结果判断抗A抗BA型红细胞B型红细胞O型红细胞+-+-A-+-B+-AB-+-O试管法试管法试管法结果判定试管法结果判定红细胞凝集强度判断标准红细胞凝集强度判断标准瓷板法瓷板法结果判定结果判定凝胶技术的原理凝胶技术的原理反反应应室室外管壁外管壁反反应应室室底底孔孔内内套套管壁管壁凝胶或凝胶或玻璃珠玻璃珠亲亲和和凝凝胶胶试剂或试剂或盐水盐水特殊粘液特殊粘液凝胶技术的原理:
凝胶技术的原理:
AA、反应室:
、反应室:
下端底孔很小,液体在孵育过程中下端底孔很小,液体在孵育过程中不会流入下方微柱中。
不会流入下方微柱中。
BB、试剂或盐水层:
、试剂或盐水层:
红细胞在离心力作用下穿越红细胞在离心力作用下穿越该层,红细胞与反应室中的血清分离并与该层该层,红细胞与反应室中的血清分离并与该层液体中的试剂反应。
液体中的试剂反应。
CC、粘液:
、粘液:
亲和柱中有一层粘液,作用与亲和柱中有一层粘液,作用与“试剂试剂或盐水层或盐水层”相同。
相同。
原理:
凝胶分子筛和亲和效应微柱凝胶柱中填充凝胶(葡聚糖),及相应试微柱凝胶柱中填充凝胶(葡聚糖),及相应试剂(抗体或抗原)。
凝胶分子间的间隙只允许游剂(抗体或抗原)。
凝胶分子间的间隙只允许游离红细胞通过,分子排阻层析原则将发生凝集反离红细胞通过,分子排阻层析原则将发生凝集反应的红细胞阻滞于凝胶之内,而未凝集的游离红应的红细胞阻滞于凝胶之内,而未凝集的游离红细胞则穿过微孔运动到管底,从而判定有无凝集细胞则穿过微孔运动到管底,从而判定有无凝集反应。
反应。
结果判定结果判定新乡医学院第三临床检验教研室微孔板法微孔板法(四)质量保证(四)质量保证试管法试管法标记标记加样量、加样顺序加样量、加样顺序溶血是一种阳性反应溶血是一种阳性反应玻片法玻片法标记标记正定型正定型显微镜阴性确认显微镜阴性确认微柱凝胶血型定型检测卡微柱凝胶血型定型检测卡血清标本应完全取出纤维蛋白,血浆标本建议血清标本应完全取出纤维蛋白,血浆标本建议EDTA-K2或枸橼酸盐康宁或枸橼酸盐康宁先加红细胞悬液,再加血浆或抗体试剂先加红细胞悬液,再加血浆或抗体试剂红细胞悬液和血浆各加红细胞悬液和血浆各加50ul按照说明书操作按照说明书操作(四)质量保证(四)质量保证(五)方法学评价(五)方法学评价试管法试管法:
常用,广泛,较玻片法灵敏,结果准确,反应时间短,:
常用,广泛,较玻片法灵敏,结果准确,反应时间短,结果不能保存,人为因素大结果不能保存,人为因素大玻片法玻片法:
操作简单、无需特殊仪器,适用于血型普查;灵敏度差,:
操作简单、无需特殊仪器,适用于血型普查;灵敏度差,反应时间长,不能用于反定型,结果不能保存,人为因素影响大,反应时间长,不能用于反定型,结果不能保存,人为因素影响大,易发生血液污染易发生血液污染微柱凝胶血型定型检测卡法微柱凝胶血型定型检测卡法:
特异性强、灵敏度高,结果准确,:
特异性强、灵敏度高,结果准确,保持时间长,标本和试剂用量少,操作可以标准化、自动化,减少保持时间长,标本和试剂用量少,操作可以标准化、自动化,减少了医源性污染,但需要专门离心设备和试剂卡,成本较高了医源性污染,但需要专门离心设备和试剂卡,成本较高u输血治疗的首要步骤输血治疗的首要步骤u组织器官移植组织器官移植u新生儿溶血病新生儿溶血病ABO正反定型的临床意义ABO正反定型不符分析基本程序u首先重复试验首先重复试验u重新采集献血者与受血者血液标本重新采集献血者与受血者血液标本u查询受血者既往病史及输血史和用药史等查询受血者既往病史及输血史和用药史等u多次洗涤标本红细胞多次洗涤标本红细胞u应用抗应用抗-AB-AB、抗、抗-A-A11、抗、抗-H-H检测红细胞检测红细胞错加试剂或标本错加试剂或标本技术和技术和操作操作受血者受血者红细胞红细胞或血清或血清ABO正反定型不一致的原因试剂失效或污染试剂失效或污染细胞与血清间细胞与血清间比例不适当比例不适当溶血现象未能识溶血现象未能识别别漏加试剂漏加试剂结果记录或判断错结果记录或判断错误误血清异常血清异常红细胞致敏红细胞致敏近期输血近期输血疾病导致抗原疾病导致抗原减弱减弱抗体减弱抗体减弱不规则抗体不规则抗体年龄年龄近期进行大量近期进行大量血浆置换治疗血浆置换治疗RhD定型及其常见问题1.Rh1.Rh定型定型RhDRhD定型,试管法最经典,多使用微柱凝胶卡定型,试管法最经典,多使用微柱凝胶卡2.2.RhD阴性确认阴性确认IgM抗抗-D阴性阴性三个厂家三个厂家IgGIgG抗抗-D进行进行确认确认抗人球蛋白法进行确认抗人球蛋白法进行确认三种三种IgG抗抗-D试剂均为阴性,报试剂均为阴性,报RhD阴性阴性一种或一种以上一种或一种以上IgG抗抗-D试剂为阳性,报弱试剂为阳性,报弱D概念:
检测受血者和供血者血液中是否含有不相概念:
检测受血者和供血者血液中是否含有不相配合的成分,是输血前确保受血者输血安全必不配合的成分,是输血前确保受血者输血安全必不可少的试验可少的试验包括:
主侧配血和次侧配血包括:
主侧配血和次侧配血主侧是受血者血清与供血者红细胞相配的一侧主侧是受血者血清与供血者红细胞相配的一侧次侧是受血者红细胞与供血者血清相配的一侧。
次侧是受血者红细胞与供血者血清相配的一侧。
三、交叉配血试验交叉配血的主次侧交叉配血的主次侧
(一)盐水介质交叉配血试验本质凝集反应,直接凝集试验本质凝集反应,直接凝集试验检测检测IgMIgM类抗体类抗体方法:
试管法方法:
试管法ABOABO同型配血,主侧和次侧均无凝集及溶血,表示同型配血,主侧和次侧均无凝集及溶血,表示无输血禁忌,可以输血无输血禁忌,可以输血盐水介质配血方法患患者者献献血血者者主主侧侧次次侧侧离心离心看结果看结果阳阳性性阴阴性性
(二)抗球蛋白介质交叉配血试验抗人球蛋白试验:
又称抗人球蛋白试验:
又称CoombsCoombs试验,是一种检试验,是一种检查不完全抗体的敏感方法查不完全抗体的敏感方法分类:
直接抗球蛋白试验和间接抗球蛋白试验分类:
直接抗球蛋白试验和间接抗球蛋白试验抗球蛋白试验原理抗球蛋白试验原理CoombsCoombs利用抗球蛋白抗体作为第二抗体,连接与利用抗球蛋白抗体作为第二抗体,连接与红细胞表面抗原结合的特异抗体,使红细胞凝集。
红细胞表面抗原结合的特异抗体,使红细胞凝集。
直接试验:
是检查被检红细胞上有无不完全抗体直接试验:
是检查被检红细胞上有无不完全抗体间接试验:
是检查血清中游离的不完全抗体间接试验:
是检查血清中游离的不完全抗体直接直接Coombs试验试验抗人免疫球蛋白自身抗体间接间接Coombs试验试验抗人免疫球蛋白同种异型抗体2不完全抗体可以结合在红细胞表面,但是不能和两个红细胞同时结合(致敏)。
3加入抗人球蛋白1红细胞彼此之间有一定的间距4抗人球蛋白可以同时和两个不完全抗体的FC段结合,从而把红细胞连接在一起抗人球蛋白交叉配血法示意图抗人球蛋白交叉配血法示意图抗球蛋白配血方法患患者者献献血血者者主主侧侧次次侧侧3737水浴水浴30分钟分钟三洗三洗抗球蛋白方法配血方法加加抗抗球球蛋蛋白白离心离心看结果看结果阳阳性性阴阴性性结果判读结果判读直接抗球蛋白试验直接抗球蛋白试验阳性阳性对照管对照管凝集凝集,阴性阴性对照管对照管不凝集不凝集,被检管被检管凝集,判定为阳性凝集,判定为阳性阳性对照阳性对照管凝集,阴性对照管不凝集,管凝集,阴性对照管不凝集,被检管被检管不凝集,需要做阴性确认后判定结果不凝集,需要做阴性确认后判定结果(无凝集(无凝集的被检管中加入的被检管中加入IgG抗抗-D致敏红细胞后离心,致敏红细胞后离心,出现凝集判阴性,否则重新试验出现凝集判阴性,否则重新试验阳性对照管不凝集和(或)阴性对照管凝集,阳性对照管不凝集和(或)阴性对照管凝集,结果不可信不发报告,分析原因重做结果不可信不发报告,分析原因重做间接抗球蛋白试验间接抗球蛋白试验阳性阳性对照管呈现对照管呈现凝集凝集反应,反应,阴性阴性对照管对照管未呈现凝集未呈现凝集反反应,应,被检管呈现凝集反应被检管呈现凝集反应为阳性结果,被检者血清内为阳性结果,被检者血清内含有抗体,如果自身对照无凝集,同种抗体;如果含有抗体,如果自身对照无凝集,同种抗体;如果被被检者结果阴性检者结果阴性,被检者血清中未被查出意外抗体。
,被检者血清中未被查出意外抗体。
阳性对照管不凝集和(或)阴性对照管出现凝集,实阳性对照管不凝集和(或)阴性对照管出现凝集,实验失败。
验失败。
结果判读结果判读抗球蛋白试剂不纯抗球蛋白试剂不纯假阳性假阳性假阴性假阴性红细胞洗涤已凝集红细胞洗涤已凝集红细胞质量红细胞质量不抗凝标本不抗凝标本漏加试剂漏加试剂红细胞、血清红细胞、血清及试剂质量及试剂质量洗涤不充分洗涤不充分操作过程不连操作过程不连续续离心过度离心过度红细胞过多或红细胞过多或过少过少血清浓度过大血清浓度过大孵育时间和温孵育时间和温度不当度不当前带现象前带现象间接抗球蛋白试验间接抗球蛋白试验盐水保存不当盐水保存不当红细胞直抗阳性红细胞直抗阳性2022/10/2637(三)(三)低离子聚凝胺介质交叉配血试验低离子聚凝胺介质交叉配血试验是一种快速、简便、红细胞不完全抗体的方法是一种快速、简便、红细胞不完全抗体的方法多数多数IgGIgG抗体能够被检出,但抗体能够被检出,但IgGIgG抗抗-K-K抗体除外抗体除外汉族至今未发现汉族至今未发现KK抗原阳性,也未检出抗抗原阳性,也未检出抗-K-K抗体抗体2022/10/2638聚凝胺介质试验技术聚凝胺介质试验技术红细胞表面带有大量的负电荷,悬浮在电红细胞表面带有大量的负电荷,悬浮在电解质溶液中,会吸引大量阳离子,红细胞解质溶液中,会吸引大量阳离子,红细胞则被扩散的双层离子云所围绕,形成则被扩散的双层离子云所围绕,形成zeta电电位。
位。
红细胞表面电荷及其相互之间的距离红细胞表面电荷及其相互之间的距离2022/10/2640原理聚凝胺技术聚凝胺技术首先首先利用低离子溶液(利用低离子溶液(LIM)降)降低介质的离子强度,减少红细胞周围的电低介质的离子强度,减少红细胞周围的电子云子云再加入再加入聚凝胺溶液聚凝胺溶液,溶解后产生很多正电,溶解后产生很多正电荷,中和红细胞表面带有的负电荷,红细荷,中和红细胞表面带有的负电荷,红细胞胞zeta电位降低,缩短红细胞距离,产生非电位降低,缩短红细胞距离,产生非特异性聚集特异性聚集最后加入
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- 红细胞 血型 相关 检测