光谱法测定动物肝脏中铜含量Word下载.docx
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图1磺基水杨酸结构式
磺基水杨酸在络合物反应中,常伴有颜色的明显变化,因此研究这些络合物的吸收光谱可以测定它们的组成。
测定方法较多,已经在对金属铜含量的测定中得到了较好的推。
本实验采用应用Cu(Ⅱ)-磺基水杨酸络合物的组成用与溶液的pH值有关,Cu(Ⅱ)-磺基水杨酸络合物在pH值4时形成MA型。
分光光度法测定生物材料中铜的含量则有极为现实的意义。
磺基水杨酸HSO3C6H3(OH)COOH中-SO3H中H在水溶液中交易解离:
-COOH中的H在水溶液中交易解离;
-OH的H在水溶液中交易解离;
磺基水杨酸和铜离子配位,形成绿色络合物[5]。
测定动物肝脏中铜含量的方法很多,常用的是光度法和原子吸收分光光度法[6]。
对于含铜量高的肝脏,用磺基水杨酸做显色剂进行光度法测定是一种准确可靠而又简便快速的分析方法。
本文探讨可见分光光度计,在pH值=4时,磺基水杨酸分光光度法测定动物肝脏中的铜含量,进行了条件和方法的对比试验,测定结果比较好。
分光光度法是广泛应用于微量组分测定的一种方法,铜试剂(DDTC)测定铜属经典方法,近年来,对该方法有改进性研究并广泛应用于钢,无机盐,铝合金,水等试样中铜的测定。
络合物体系分光光度法测定微量Cu,方法的灵敏度高,选择性好,结果准确,操作简便[7]。
本文以Cu(Ⅱ)-磺基水杨酸在pH=4时,形成MA型绿色络合物的反应分光光度法测定动物肝脏中铜含量,该方法的最大吸收长波在692nm处,线性范围为0.001~0.009mg.mL-1,对羊肝脏和牛肝脏中的铜含量进行测定,其中硝酸-过氧化氢体系消解方法比较好,其含量分别为63.95ug.g-1和44.74ug.g-1。
从而得到最佳的试验结果。
1.实验部分
1.1仪器和药品
1.1.1实验仪器
T6新世纪-紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);
FA1104电子天平(上海民桥精密仪器有限公司)。
1.1.2实验药品
磺基水杨酸;
氯化铜;
NaOH;
H2SO4;
均为分析;
实验用水为二次蒸馏水。
铜标准溶液:
称取氯化铜晶体2.6g于100mL容量瓶中配置得铜离子浓度为10mg.mL-1的二价铜贮备液,再逐级稀释法配成1mg.mL-1的工作溶液;
1.1.3实验样品
羊肝和牛肝;
从喀什东巴扎购买。
1.2实验方法
在10mL容量瓶中依次加入3mL铜标准溶液,加3mL磺基水杨酸溶液,用氢氧化钠溶液调溶液pH=4.0,其中一支加入适量铜标准溶液或样品试液3mL,另一支为试剂空白,定容到10mL摇均。
然后以水为参比,用1cm的比色皿在692.0nm波长处分别测定试剂空白的吸光度A0和反应体系的吸光度A并计算△A=A0-A。
2.结果与讨论
2.1吸收光谱
取Cu2+按实验方法显色,在不同波长处测其吸光度,绘制出吸收光谱如图2所示。
由图2可知,Cu2+与磺基水杨酸形成的绿色络合物在波长为692.0nm处有强吸收峰,所以本实验所选择的波长为692.0nm。
图2吸收光吸收谱波长与吸光度的关系图
2.2磺基水杨酸用量的影响
取3mL铜标准溶液,改变磺基水杨酸用量在1.0~6.0mL时按实验方法测定,ΔA有一定的变化并出现最强的吸收峰,如图3所示,本实验所选用磺基水杨酸用量为3mL。
图3磺基水杨酸用量对吸光度的影响
2.3pH值的影响
取一组10mL容量瓶,各加入3mL铜标准溶液,用pH计调处系列不同酸度,按实验方法测其吸光度(见图4).结果表明pH为4.0时ΔA有最大值,故本实验选择pH=4.0时,铜离子可与磺基水杨酸形成稳定的绿色络合物。
图4吸光度(A)-pH值曲线
2.4动物肝脏中铜的测定
2.4.1湿法消解的几种酸组合实验
采用先低温烘干样品后,再用不同混酸及氧化剂于电炉上加盖回流消解样品.
1.硝酸-高氯酸混酸体系的消解.用于燥洁净的150mL三角瓶称取5g左右的羊肝(牛肝)均浆,于烘箱中70℃烘干.加硝酸约10mL,盖上小漏斗在调温电炉上缓慢升温,赶去氮氧化物,消解液呈透明状至近干时,开始滴加高氯酸(约2~4mL),待激烈反应冒出高氯酸白烟后,冷却,当消解液仍不出现颜色时即为分解完成。
将消解液移至25mL容量瓶定容成为待测液。
2.硝酸-硫酸-高氯酸混酸体系消解:
向盛有烘干样品的三角瓶内加硝酸和浓硫酸的混酸(3:
1.v/v)约10mL,在调温电炉上缓慢加热,激烈反应结束,氮氧化物气体消失。
消解液呈褐色时,取下冷却后加高氯酸5mL,在缓慢升温至微沸状态,待瓶内大量冒出白烟后,消解液呈浅亮黄色透明液时,冷却,移至25mL容量瓶内定容成为待测液。
3.硝酸-过氧化氢体系消解:
向盛有烘干样品的三角瓶内加硝酸10mL,再调温电炉上缓慢加热(注意不时地补充硝酸)待消解液透明时,开始继续滴加过氧化氢至消解液呈无色透明后移至25mL容量瓶稀释至刻度.同样,按不同的消解方式制备消解空白液供测定时使用。
2.4.2样品溶液中铜含量的测定:
准确移取羊肝(牛肝)样品溶液3mL于10mL容量瓶内,加3mL磺基水杨酸溶液,用氢氧化钠调溶液至pH=4,,定容到10mL,摇均。
然后用1cm的比色皿在692.0nm波长处分别测定,以消解空白(按实验方法加入与待测样液相同的各种试剂后定容至10mL)作参比,测定其吸光度值。
由工作曲线查出铜的含量,从而计算出羊肝(牛肝)中的实际含铜量。
2.5工作曲线
2.5.1标准曲线
按实验方法,改变铜标准溶液的加入量,当铜标准溶液的浓度在0.001~0.009mg.mL-1范围内时,浓度与
A呈线性关系,线性回归方程:
y=21.425x-0.0069,相关系数R2=0.9956;
表1标准铜溶液的吸光度测定
Cu2+浓度
(mg.mL-1)
0.001
0.002
0.003
0.004
0.005
0.006
0.007
0.008
0.009
吸光度A
0.018
0.030
0.044
0.058
0.080
0.100
0.111
0.130
0.147
A
0.014
0.026
0.040
0.054
0.076
0.096
0.107
0.126
0.143
图5标准曲线
样品的吸光度A值,从标准曲线上查得相应的铜的含量X(ug.mL-1)。
结果如表2所示。
表2样品中铜的测定
样品
吸光度
羊肝脏
牛肝脏
HNO3-HClO4
0.051
0.042
HNO3-H2SO4-HClO4
0.057
0.053
HNO3-H2O2
0.083
0.056
线性方程为:
y=21.425x-0.0069
式中:
y﹍吸光度
x﹍样品中铜的浓度(mg.L-1)
1)羊肝脏:
y=0.083=》x=0.01398(mol.L-1)
m(铜)=0.01398×
0.003×
63.5×
3/25=0.00031973g(ug.5g-1羊肝脏)
m(标准)=0.00031973×
1/5=63.95ug.g-1(1g羊肝脏)
2)牛肝脏:
y=0.056=》x=0.0097861(mol.L-1)
m(铜)=0.0097861×
3/25=0.00022371g(ug.5g-1牛肝脏)
m(标准)=0.00022371×
1/5=44.742ug.g-1(1g牛肝脏)
表3不同消解方式测定样品中铜含量(ug.g-1)
方法
消解方式
磺基水杨酸法
HNO3-HClO4
HNO3-H2SO-HClO4
41.19
52.56
63.95
34.78
42.61
44.74
通过本方法对羊肝脏和牛肝脏中的铜含量进行测定,其中硝酸-过氧化氢体系消解方法比较好,其含量分别为63.95ug.g-1和44.74ug.g-1。
3.结论
本文在pH=4时,Cu(Ⅱ)-磺基水杨酸形成MA型络合物的反应,采用分光光度法测定铜含量的方法进行了初步讨论。
通过本方法进行测定羊肝脏和牛肝脏中的铜含量。
磺基水杨酸分光光度法测定动物肝脏时,用硝酸-硫酸-高氯酸,硝酸-高氯酸,硝酸-过氧化氢等混酸体系等消解等方式。
本实验选择了最佳条件:
磺基水杨酸的用量为3mL,pH值为4,最大吸收长波在692nm处时,线性范围为0.001~0.009mg.mL-1时,线性回归方程:
y=21.425x-0.0069,相关系数R2=0.9956;
其中硝酸-过氧化氢体系消解方法比较好,按照标准曲线进行样品含量的计算测定结果为羊肝脏和牛肝脏中铜含量分别为63.95ug.g-1和44.74ug.g-1。
参考文献
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(1):
62~67
[2]张丽萍,但娟.吸光光度法同时测定茶叶中铜铁[J].理化检验-化学分册,2001,37(7):
329~330
[3]王夔,徐辉碧,唐任寰,等.生命科学中的微量元素[M].北京:
中国计量出版社,1998.148~149
[4]杨慧芬,李明元,沈文.食品卫生理化检验标准手册[M].北京:
中国标准出版社,1997.114~116
[5]严忠,陈龙武,徐惠俭等.物理化学实验[M].北京:
高等教育出版社,2007,12(26):
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[6]虞学俊,李在均.光度法测定食品中微量铜[J].理化检验-化学分册,2005,41(12):
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[7]翟庆洲,范智.我国铜光度分析的进展[J].冶金分析,2003,23(6):
24~28
致谢
首先感谢我的指导老师阿不都卡德尔老师,从开始选题到论文结束,他一直都在细心指导我们的实验,认真修改我们的论文,帮我查阅资料,怎么写论文,每一步都有他辛勤的汗水。
其次是负责领仪器和试剂的各位老师,他们尽职尽责,耐心的帮我们找试剂和仪器,使得我们的实验能顺利进行。
总之,我的论文能顺利完成要感谢每一位帮助过我的老师和同学,真心的谢谢你们无私的奉献和热情的帮助。
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- 光谱 测定 动物 肝脏 含量