气相色谱法在药典中的应用.docx
- 文档编号:2097118
- 上传时间:2022-10-26
- 格式:DOCX
- 页数:55
- 大小:42.16KB
气相色谱法在药典中的应用.docx
《气相色谱法在药典中的应用.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《气相色谱法在药典中的应用.docx(55页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
气相色谱法在药典中的应用
气相色谱法在药典中的应用
摘要:
本文通过介绍气相色谱检验的操作过程,选取《中国药典》中的部分例子说明了气相
色谱法在对药物的鉴别、检查、含量测定中的应用,还介绍了气相色谱法在乙醇量测定法;
甲氧基、乙氧基与羟丙氧基测定法;2-乙基己酸测定法;残留溶剂测定法中的运用以及气相色谱-质谱联用。
关键词:
气相色谱、中国药典、应用
气相色谱法(gaschromatography,GC)是二十世纪五十年代出现的一项重大科学技术成就。
系采用气体为流动相(载气)流经装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。
物质或其衍生物气化后,被载气带入色谱柱进行分离,各组分先后进入检测器,用数据处理系统记录色谱信号。
采用高灵敏选择性检测器,使得它又具有分析灵敏度高、应用范围广等优点。
这是一种新的分离、分析技术,它在工业、农业、国防、建设、科学研究中都得到了广泛应用。
一气相色谱法检验标准操作规程[1]
(一)对仪器的一般要求
所用的仪器为气相色谱仪,由载气源、进样部分、色谱柱、柱温箱、检测器和数据处理系统组成(如图1所示)。
进样部分、色谱柱和检测器的温度均应根据分析要求适当设定。
图1气相色谱仪示意图
1.载气源
气相色谱法的流动相为气体,称为载气,氦、氮和氢可用作载气,可由高压瓶或高纯度
气体发生器提供,经过适当的减压装置,以一定的流速经过进样器和色谱柱;根据供试品的
性质和检测器种类选择载气,除另有规定外,常用载气为氮气。
2.进样部分
进样方式一般可采用溶液直接进样、自动进样或顶空进样。
溶液直接进样采用微量注射器、微量进样阀或有分流装置的气化室进样;采用溶液直接
进样或自动进样时,进样口温度应高于柱温30~50℃;进样量一般不超过数微升;柱径越
细,进样量应越少,采用毛细管柱时,一般应分流以免过载。
顶空进样适用于固体和液体供试品中挥发性组分的分离和测定。
将固态或液态的供试品
制成供试液后,置于密闭小瓶中,在恒温控制的加热室中加热至供试品中挥发性组分在液态
和气态达至平衡后,由进样器自动吸取一定体积的顶空气注入色谱柱中(如图2所示)。
图2顶空进样过程示意图
3.色谱柱
色谱柱为填充柱或毛细管柱。
填充柱的材质为不锈钢或玻璃,
内径为
2~4mm,柱长为
2~
4m,内装吸附剂、高分子多孔小球或涂渍固定液的载体,粒径为
0.18~0.25mm、0.15~
0.18mm、或
0.125
~0.15mm。
常用载体为经酸洗并硅烷化处理的硅藻土或高分子多孔小球,
常用固定液有甲基聚硅氧烷、
聚乙二醇等。
毛细管柱的材质为玻璃或石英,
内壁或载体经涂
渍或交联固定液,内径一般为
0.25mm、0.32mm或
0.53mm,柱长
5~60m,固定液膜厚
0.1~
5.0μm,常用的固定液有甲基聚硅氧烷、不同比例组成的苯基甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等。
新填充柱和毛细管柱在使用前需老化处理,以除去残留溶剂及易流失的物质,色谱柱如
长期未用,使用前应老化处理,使基线稳定。
4.柱温箱
由于柱温箱稳定的波动会影响色谱分析结果的重现性,因此柱温箱精度应在±1℃,且
温度波动小于每小时0.1℃。
温度控制系统分为恒温和程序升温两种。
5.检测器
适合气相色谱法的检测器有火焰离子化检测器
(FID)、热导检测器(
TCD)、氮磷检测器
(NPD)、火焰光度检测器(FPD)、电子捕获检测器(ECD)、质谱检测器(MS)等。
火焰离子化检测器对碳氢化合物响应良好,适合检测大多数的药物;氮磷检测器对含氮、磷元素的化合物灵敏度高;火焰光度检测器对含磷、硫元素的化合物灵敏度高;电子捕获检测器适于含卤素的化合物;质谱检测器还能给出供试品某个成分相应的结构信息,可用于结构确证。
除另有规定外,一般用火焰离子化检测器,用氢气作为燃气,空气作为助燃气。
在使用火焰离子化检测器时,检测器的温度一般应高于柱温,并不得低于150℃,以免水汽凝结,通常
为250~350℃。
6.数据处理系统
可分为记录仪、积分仪以及计算机工作站等。
各品种项下规定的色谱条件,除检测器种类、固定液品种及特殊指定的色谱柱材料不得
改变外,其余如色谱柱内径、长度、载体牌号、粒度、固定液涂布浓度、载气流速、柱温、
进样量、检测器的灵敏度等,均可适当改变,以适应具体品种并符合系统适用性试验的要求。
一般色谱图约于30分钟内记录完毕。
(二)系统适用性试验
色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、重复性和拖尾因子等四个指标。
其
中,分离度和重复性是尤为重要。
除另有规定外,按各品种项下要求对色谱系统进行适用性试验,即用规定的对照品溶液
或系统适用性试验溶液在规定的色谱系统进行试验,必要时,可对色谱系统进行适当调整,
以符合要求。
1.色谱柱的理论板数(n)
用于评价色谱柱的分离效能。
由于不同物质在同一色谱柱上的色谱行为不同,采用理论
板数作为衡量柱效能的指标时,应指明测定物质,一般为待测组分或内标物质的理论板数。
在规定的色谱条件下,注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液,记录色谱图,
量出供试品主成分峰或内标物质峰的保留时间tR(以分钟或长度计,下同,但应取相同单
位)和峰宽(
理论板数。
2.分离度(R)
W)或半高峰宽(
Wh/2
),按
n=16(tR/W)2或n=5.54(t
R/Wh/2)
2计算色谱柱的
用于评价待测组分与相邻共存物或难分离物质之间的分离程度,
是衡量色谱系统效能的
关键指标。
可以通过测定待测物质与已知杂质的分离度,
也可以通过测定待测组分与某一添
加的指标性成分(内标物质或其他难分离物质)
的分离度,或将供试品或对照品用适当的方
法降解,通过测定待测组分与某一降解产物的分离度,对色谱系统进行评价与控制。
无论是定性鉴别还是定量分析,
均要求待测峰与其他峰、内标峰或特定的杂质对照峰之
间有较好的分离度。
除另外有规定外,待测组分与相邻共存物之间的分离度应大于
1.5。
分
离度的计算公式为:
2(tR-tR)
2(t
-t)
R=
2
1
R2
R1
+W
或R=
(W
+W
)
1.70
W
1,h/2
2,h/2
12
式中tR2
为相邻两峰中后一峰的保留时间;
tR1
为相邻两峰中前一峰的保留时间;
W、W及W
、W
分别为此相邻两峰的峰宽及半高峰宽。
(如图
3所示)
1
21,h/2
2,h/2
图
当对测定结果有异议时,色谱柱的理论板数(
结果为准。
3.重复性
3
n)和分离度(
R)均以峰宽(
W)的计算
用于评价连续进样中,色谱系统响应值的重复性能。
采用外标法时,通常取各品种项下的对照品溶液,连续进样5次,除另有规定外,其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于
2.0%;采用内标法时,通常配制相当于80%、100%和120%的对照品溶液,加入规定量的
内标溶液,配成3种不同浓度的溶液,分别至少进样2次,计算平均校正因子。
其相对标准偏差也应不大于2.0%。
4.拖尾因子(T)
用于评价色谱峰的对称性。
为保证分离效果和测量精度,应检查待测峰的拖尾因子是否符合各品种项下的规定。
拖尾因子计算公式为:
W0.05h
T=
式中W0.05h为0.05峰高处的峰宽;
2d1
d1为峰极大至峰前沿之间的距离。
(如图4所示)
图4
除另有规定外,峰高法定量时T应在0.95~1.05之间。
峰面积法测定时,若拖尾严重,将影响峰面积的准确测量。
必要时,应在各品种项下对
拖尾因子作出规定。
(三)测定法
1.内标法
按各品种项下的规定,精密称(量)取对照品和内标物质,分别配成溶液,精密量取各
适量,混合配成校正因子测定用的对照溶液。
取一定量注入仪器,记录色谱图。
测量对照品
和内标物质的峰面积或峰高,按下式计算校正因子:
AS/cS
校正因子(f)=AR/cR
式中AS为内标物质的峰面积或峰高;
AR为对照品的峰面积或峰高;
CS为内标物质的浓度;
CR为对照品的浓度。
再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液,注入仪器,记录色谱图,测量供试品中待
测成分和内标物质的峰面积或峰高,按下式计算含量:
含量(cx)=f?
AX
A'S/c'S
式中AX为供试品(或其杂质)峰面积或峰高;
CX为供试品(或其杂质)的浓度;
A’S为内标物质的峰面积或峰高;
c’S为内标物质的浓度;
f为较正因子。
采用内标法,可避免因样品前处理及进样体积误差对测定结果的影响。
2.外标法
按各品种项下的规定,精密称(量)取对照品和供试品,配制成溶液,分别精密取一定
量,注入仪器,记录色谱图,测量对照品溶液和供试品溶液中待测成分的峰面积(或峰高),
按下式计算含量:
AX
含量(cX)=cR
AR
式中CR为对照品的浓度;
AR为对照品的峰面积或峰高;
AX为供试品(或其杂质)峰面积或峰高。
由于微量注射器不易精确控制进样量,当采用外标法测定供试品中成分或杂质含量时,以定量环或自动进样器进样为好。
3.面积归一法
按各品种项下的规定,配制供试品溶液,取一定量注入仪器,记录色谱图。
测量各峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的总色谱峰面积,计算各峰面积占总峰面积的百分率。
用于杂质检查时,由于峰面积归一化法测定误差大,因此,通常只能用于粗略考察供试品中的杂质含量。
除另有规定外,一般不宜用于微量杂质的检查。
5.标准溶液加入法
精密称(量)取某个杂质或待测成分对照品含量,
配制成适当浓度的对照品溶液,
取一
定量,精密加入到供试品溶液中,根据外标法或内标法测定杂质或主成分含量,
再扣除加入
的对照品溶液含量,即得供试液溶液中某个杂质和主成分含量。
也可按下述公式进行计算,加入对照品溶液前后校正因子应相同,即:
Ais
△c
c
X
X
A
=
c
X
x
则待测组分的浓度cx可通过如下公式进行计算:
△cX
cX=(Ais/AX)-1
式中cX为供试品中组分X的浓度;
AX为供试品中组分X的色谱峰面积;
△cX为所加入的已知浓度的待测组分对照品的浓度;
Ais为加入对照品后组分X的色谱峰面积。
由于气相色谱法的进样量一般仅数微升,为减小进样误差,尤其当采用手工进样时,由于留针时间和
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 色谱 药典 中的 应用
![提示](https://static.bdocx.com/images/bang_tan.gif)