肝功能检查综合性实验报告原版.docx
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肝功能检查综合性实验报告原版
广东医学院实验报告
实验题目
肝功能检查(十一项)
LiverFunctionTests
专业:
医学检验
组别:
13
姓名:
邓秋妹
学号:
07203090283
实验日期:
2010年5月27日—2010年6月10日
实验类型:
综合性
摘要
目的:
检测肝功能检查十一项指标,并对检测结果进行评价。
方法:
改良J-G法测血清总胆红素和结合胆红素。
双缩脲法测定血清总蛋白,溴甲酚绿法测定血清清蛋白。
改良赖氏法测定丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶。
结果:
测得的血清TB为5.244μmol/L,血清Bc为0.912μmol/L。
测得的血清总蛋白为48.98g/L,血清清蛋白为23.79g/L。
测得的血清ALT为33.5卡门氏单位,血清AST为87.99卡门氏单位。
结论:
患者胆红素代谢功能紊乱,蛋白质合成功能障碍,肝实质细胞损害很严重,可初步诊断为肝硬化。
Abstract
Objective:
Testthe11indicatorsofliverfunction,andevaluatetheresults.
Methods:
ThedeterminationofserumTBandBcbymod.JendrassikandGraf’smethod.
ThedeterminationofserumTPbyBiureandAlbbybromocresolgreenmethod.
ThedeterminationofALTandASTbyReitman-Frankelmodifiedmethod.
Results:
TheserumTBis5.244μmol/L,andtheserumBcis0.912μmol/L.
TheserumTPis48.98g/L,andtheserumAlbis23.79g/L.
TheserumALTis33.5Carmen'sunitandtheASTis87.99Carmen'sunit.
Conclusion:
Thepatienthasbilirubinmetabolicdisorders,proteinsynthesisdysfunctionandseverelivercelldamage.Andtheinitialdiagnosisiscirrhosis.
1材料与方法
1.1材料
主要试剂:
血清胆红素测定试剂盒(南京建成科技有限公司);
蛋白定量(双缩脲法)试剂盒(南京建成科技有限公司);
白蛋白(溴甲酚绿法)测定试剂盒(南京建成科技有限公司);
谷丙转氨酶测定试剂盒(南京建成科技有限公司);
谷草转氨酶测定试剂盒(南京建成科技有限公司)。
主要仪器:
UV2100分光光度计,尤尼柯(上海)仪器有限公司;
恒温水浴箱,金坛市富华仪器有限公司;
涡旋振荡器,金坛市富华仪器有限公司。
1.2方法
参照相应试剂盒说明书方法测定下列指标。
1.2.1肝脏排泄功能及黄疸检测
改良J-G法测定总胆红素和结合胆红素,并计算得到未结合胆红素、结合/总胆红素比值。
1.2.2肝脏合成功能检测
双缩脲法测定总蛋白,溴甲酚绿法测定清蛋白,并计算得到球蛋白、清/球比值。
1.2.3肝细胞实质性损伤检测
改良赖氏法测定ALT、AST,并计算得到AST/ALT比值。
2结果
2.1肝脏排泄功能及黄疸检测
原始数据:
改良J-G法测定TB和Bc在波长为600nm处所测得的吸光度值
蒸馏水管TB空白管TB管Bc空白管Bc管
吸光度0.0000.0010.0240.0010.005
计算:
血清总胆红素(μmol/L)=总胆红素的吸光度×228
=(0.024-0.001)×228=5.244μmol/L
血清结合胆红素(μmol/L)=结合胆红素的吸光度×228
=(0.005-0.001)×228=0.912μmol/L
血清非结合胆红素=血清总胆红素-血清结合胆红素=5.244-0.912=4.332μmol/L
Bc与BT得比值=0.912÷5.244≈0.174
2.2肝脏合成功能检测
原始数据:
2.2.1双缩脲法测定总蛋白
双缩脲法测定总蛋白在波长为540nm处所测得的吸光度值
蒸馏水管空白管标准管测定管
吸光度0.0000.0480.1950.168
2.2.2溴甲酚绿法测定清蛋白
溴甲酚绿法测定清蛋白在波长为630nm处所测得的吸光度值
空白管标准管测定管
吸光度0.0000.1740.069
计算:
血清总蛋白(g/L)=(A测定-A空白)/(A标准-A空白)×C标准
=(0.168-0.048)/(0.195-0.048)×60≈48.98g/L
血清清蛋白(g/L)=A测定/A标准×C标准=0.069/0.174×60≈23.79g/L
血清球蛋白(g/L)=血清总蛋白-血清清蛋白=48.98-23.79=25.19g/L
A/G=23.79/25.19≈0.944
2.3肝细胞实质性损伤检测
原始数据:
改良赖氏法测定测定ALT和AST在波长为505nm处所测得的吸光度值
蒸馏水管空白管标准管测定管
ALT吸光度0.0000.1560.2410.206
AST吸光度0.0000.1390.2420.298
计算:
ALT(卡门氏单位)=(A测定-A空白)/(A标准-A空白)×C标准
=(0.206-0.156)/(0.241-0.156)×57≈33.5卡门氏单位
AST(卡门氏单位)=(A测定-A空白)/(A标准-A空白)×C标准
=(0.298-0.139)/(0.242-0.139)×57≈87.99卡门氏单位
AST/ALT=87.99/33.5≈2.63
3讨论
3.1对实验结果的分析及初步诊断[1]
3.1.1肝功能指标的参考值范围:
(1)血清总胆红素:
5.1~19μmol/L
(2)血清结合胆红素:
1.7~6.8μmol/L
(3)成人血清总蛋白:
60~80g/L
(4)A/G=(1.5~2.5):
1
(5)正常成人血清清蛋白:
35~55g/L
(6)正常人血清ALT、AST:
5~25卡门氏单位
3.1.2实验结果的分析
(1)测得的血清总胆红素为5.244μmol/L,在正常参考值内,表示没有黄疸;血清结合胆红素为0.912μmol/L,比正常参考值小,Bc/BT为0.174,小于20%,提示胆红素代谢紊乱,可能是轻度肝炎。
(2)测得的血清总蛋白为48.98g/L,比正常参考值小;血清清蛋白为23.79g/L,也比正常值小,而A/G为0.944,A/G倒置。
提示肝功能受损,蛋白质合成功能障碍。
可能是慢性肝炎或肝硬化。
(3)测得的血清ALT为33.5卡门氏单位,血清AST为87.99卡门氏单位,提示肝实质细胞损害严重。
而AST/ALT为2.63,比值升高,提示有可能是肝硬化或肝癌。
3.1.3实验初步诊断
由于肝功能试验在肝病处理中仍有不少限制性,敏感性不高,没有一种试验可正确评价肝的全部功能,因此根据实验测定的肝功能十一项,综合分析可以初步诊断为肝硬化。
3.2实验过程中出现的情况
3.2.1实验注意事项
(1)胆红素对光敏感,标准液及标本均应尽量避光保存。
(2)胆红素测定中,标本对照管的吸光度一般比较很接近,若遇到标本量很少时候可不做标本对照管,参照其他标本对照管的吸光度。
(3)胆红素大于342μmol/L的标本可减少标本用量,或用0.154mmol/LNaCl溶液稀释血清后重测。
(4)双缩脲法测定总蛋白实验中,黄疸血清、严重溶血、葡萄糖、酚酞及溴磺酞钠对本法有明显干扰,故用标本空白管来消除。
但如果标本空白管吸光度太高,可影响测定的准确度。
(5)BCG是一种pH指示剂,变色域为pH3.8(显黄色)~5.4(显蓝绿色),因此控制反应液的pH是本法测定的关键。
3.2.2操作中出现情况
(1)实验操作前没有对各个比色杯进行校正,以致结果有偏差。
(2)测定吸光度值时,波长选择不对。
(3)实验操作过程中,加错样品、试剂或剂量不够,另外没有在规定的时间加入终止液,或及时检测溶液的吸光度值,使测得的结果偏高或偏低。
(4)血清样品混淆,既有兔血清,牛血清,也有人血清,正确的方法是三次实验的血清样品都应该来源于人的静脉血。
(5)实验完成后,没有把加样器调回零。
3.3方法学评价[2]
3.3.1血清总胆红素与结合胆红素的测定[3]
血清胆红素测定时肝胆功能检查中的一项重要检测项目,是对黄疸性疾病进行诊断和鉴别诊断的重要指标,对病程观察有一定意义。
重氮法的改良J-G法作为全国医学检验学会推荐测定胆红素的常规方法,有较高的灵敏度、精密度和较宽的线性,但试剂无法长期稳定,溶血可是胆红素测定值偏低,以叠氮钠作为防腐剂时能破坏偶氮试剂,终止偶氮反应,时重氮反应不完全,甚至不呈色。
改良化学氧化法和钒酸盐氧化法都是采用无机氧化剂氧化胆红素,引起450nm波长吸光度的下降。
由于无机氧化剂的氧化是没有选择性的,因此虽使用了间接胆红素抑制剂,但据报道扔有一部分间接胆红素参与反应,而且血清中众多复杂成分对这个氧化反应发生干扰。
胆红素氧化酶法试剂可以长期稳定,特异性好,干扰少,但因为酶的来源、纯度、稳定性及一个波长测定不同胆红素成分等问题,应用具有局限性。
KHC3法作为一种新方法,样品中的结合胆红素和未结合胆红素在电子转化介质KHC3的作用下生成蓝绿色的显色基团既胆蓝素,在近红外区域700nm处有最大的吸光度,且反应前后吸光度变化与总胆红素的浓度成正比,通过测定700nm处吸光度的增加来计算出总胆红素的浓度。
重氮试剂法:
是血清总胆红素及结合胆红素测定的传统方法和目前仍广泛使用的方法。
有较高的灵敏度、精密度和较宽的线性,微量快速。
但其抗干扰较差,易受溶血、脂血干扰。
我国推荐其中的改良J-G法。
改良J-G法的原理:
血清中的结合胆红素可直接与重氮试剂反应生成偶氮胆红素,而非结合胆红素在促进或表面活性剂帮助下才能形成偶氮胆红素,本法重氮反应Ph6.5,最后加入碱性酒石酸钠使紫色偶氮胆红素(吸收峰530nm)转变成蓝色偶氮胆红素,在600nm波长比色,使检测灵敏度提高。
3.3.2血清总蛋白与清蛋白的测定
(1)血清总蛋白
(1凯氏定氮法:
准确度高、精密度好、标准方法、但操作繁琐
(2酚试剂法:
灵敏度较高、准确度较差
(3双缩脲法:
干扰物质少,且不受温度影响、满足临床生化检验的需要。
为医院常规方法,也是本组推荐使用方法。
本法是临床测定血清总蛋白质首选最方便、最实用的常规方法。
本法重复性好,RCV为4%,CCV为3.9%;线性范围为0~140g/L;本法干扰少,并且大多可以避免;使用单一的稳定试剂,操作简便、快速,既适于手工操作,也便于自动化分析,已被推荐为测定血清总蛋白的参考方法。
双缩脲显色反应仅和蛋白质中肽键数成正比关系,与蛋白质的种类、分子量及氨基酸的组成无明显关系,各种蛋白质的显色程度基本相同。
其原理是肽键与2价铜离子生成紫红色络合物,在540nm处的吸光度与血清蛋白质含量在一定范围内呈正比,与同种方法处理过的蛋白质标准液比较,即求得蛋白质含量。
(2)血清清蛋白
(1色素结合法
指示剂溴甲酚绿法或者溴甲酚紫在酸性(pH4.2)条件下呈黄色,而与白蛋白结合
的BC
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