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通常利用蛋白质的理化性质，采取不损伤蛋白质结构和功能的物理方法来纯化蛋白质。

常用的技术有电泳法、层析法、超速离心法等。

一、选择题

【A型题】

1．下列哪种蛋白质为单纯蛋白质

A．肌红蛋白B．细胞色素cC．单加氧酶D．血红蛋白E．血清清蛋白

2．蛋白质的基本组成单位是

A．肽键平面B．核苷酸C．肽D．氨基酸E．碱基

3．一个生物样品的含氮量为5％，它的蛋白质含量为

A．％B．％C．％D．％E．％

4．在生理条件下，下列哪种氨基酸残基的侧链所带的正电荷最多

A．CysB．GluC．LysD．ThrE．Gly

5．含有两个羧基的氨基酸是

A．LysB．AsnC．GlnD．GluE．Cys

6．下列哪种氨基酸为环状亚氨基酸

A．GlyB．ProC．TrpD．TryE．Lys

7．下列哪一物质不属于生物活性肽

A．胰高血糖素B．短杆菌素sC．催产素D．胃泌素E．血红素

8．下列哪种氨基酸为含硫氨基酸

A．TrpB．ThrC．PheD．MetE．Pro

9．下列哪种氨基酸的侧链含有杂环

A．TrpB．ThrC．AsnD．MetE．Ala

10．蛋白质合成后修饰而成的氨基酸是

A．脯氨酸B．胱氨酸C．赖氨酸D．蛋氨酸E．天门冬氨酸

11．下列哪种氨基酸为非编码氨基酸

A．半胱氨酸B．组氨酸C．鸟氨酸D．丝氨酸E．亮氨酸

12．关于构成蛋白质的氨基酸的叙述，下列哪项是正确的

A．除Gly外均为D构型B．除Gly外均为L构型C．只含有α－氨基和α－羧基

D．均有极性侧链E．均能与双缩脲试剂呈紫色反应

13．Glu的pKl为，pK2为，pK3为，其pI为

A．B．C．D．E．

14．以下哪一种氨基酸不具备不对称碳原子

A．甘氨酸B．丝氨酸C．半胱氨酸D．苏氨酸E．丙氨酸

15．天然蛋白质中不存在的氨基酸是

A．丝氨酸B．瓜氨酸C．色氨酸D．异亮氨酸E．羟脯氨酸

16．下列氨基酸中，只含非必需氨基酸的是

A．碱性氨基酸B．含硫氨基酸C．支链氨基酸D．芳香族氨基酸E．酸性氨基酸

17、多肽链中主链骨架的组成是

A．－CNHOCNHOCNHO－B．—NCCNNCCNNCCH－C．－CHNOCHNOCHNO－

D．－CONHCCONHCCONH－E．－CNOHCNOHCNOH－

18．在以下混合蛋白质溶液中，各种蛋白质的pI分别为、、、、，电泳时欲使其都泳向正极，缓冲溶液的pH应该是

A．B．C．D．E．

19．维持蛋白质分子中α－螺旋的化学键是

A．肽键B．疏水键C．氢键D．二硫键E．离子键

20．维持蛋白质分子中β－折叠的化学键是

21．关于α－螺旋的叙述，下列哪项是正确的

A．又称随机卷曲B．柔软但无弹性C．甘氨酸有利于α－螺旋的形成

D．只存在于球状蛋白质中E．螺旋的一圈由个氨基酸组成

22．含有78个氨基酸的α－螺旋的螺旋长度是

23．关于蛋白质等电点的叙述，下列哪项是正确的

A．在等电点处，蛋白质分子所带净电荷为零B．等电点时蛋白质变性沉淀

C．不同蛋白质的等电点不同D．在等电点处，蛋白质的稳定性增加

E．蛋白质的等电点与它所含的碱性氨基酸的数目无关

24．蛋白质在280nm处有最大的光吸收，主要是由下列哪组结构引起的

A．组氨酸的咪唑基和酪氨酸的酚基B．酪氨酸的酚基和色氨酸的吲哚环

C．酪氨酸的酚基和苯丙氨酸的苯环D．色氨酸的吲哚环和苯丙氨酸的苯环

E．苯丙氨酸的苯环和组氨酸的咪唑基

25．下列有关肽的叙述，错误的是

A．肽是两个以上氨基酸借肽键连接而成的化合物B．组成肽的氨基酸分子都不完整

C．多肽与蛋白质分子之间无明确的分界线D．氨基酸一旦生成肽，完全失去其原有的理化性质

E．根据N-末端数目，可得知蛋白质的亚基数

26．蛋白质在电场中移动的方向取决于

A．蛋白质的分子量和它的等电点B．所在溶液的pH值和离子强度

C．蛋白质的等电点和所在溶液的pH值D．蛋白质的分子量和所在溶液的pH值

E．蛋白质的等电点和所在溶液的离子强度

27．关于蛋白质中β－折叠的叙述，下列哪项是正确的

A．β－折叠中氢键与肽链的长轴平行B．氢键只在不同肽链之间形成

C．β－折叠中多肽链几乎完全伸展D．β－折叠又称β－转角

E．甘氨酸及丙氨酸不利于β－折叠的形成

28．蛋白质变性

A．由肽键断裂而引起B．都是不可逆的C．可使其生物活性丧失

D．可增加其溶解度E．以上都不对

29．蛋白质的一级结构是指

A．蛋白质中的无规卷曲B．蛋白质分子的无规卷曲C．蛋白质分子内氨基酸以肽键相连接

D．蛋白质分子内氨基酸的排列顺序E．蛋白质分子内的二硫键

30．维持蛋白质二级结构的主要化学键是

A．氢键B．二硫键C．疏水键D．离子键E．磷酸二酯键

31．蛋白质中次级键不包括

A．疏水键B．二硫键C．离子键D．氢键E．盐键

32．关于蛋白质结构的叙述，下列哪项是正确的

A．多肽链的折叠、盘曲主要靠肽键来维持B．肽单元属于二级结构

C．凡有三级结构的蛋白质均有生物活性D．具有四级结构血红蛋白具有别构效应

E．内部氢键的形成是驱动蛋白质多肽链折叠、盘曲的主要动力

33．对具有四级结构的蛋白质进行分析时

A．只有一个自由的α－羧基和一个自由的α－氨基

B．只有自由的α－羧基，没有自由的α－氨基

C．没有自由的α－羧基，只有自由的α－氨基

D．既没有自由的α－羧基，又没有自由的α－氨基

E．有一个以上的自由α－羧基和自由α－氨基

34．蛋白质变性会出现下列哪种现象

A．易被蛋白酶水解B．无双缩脲反应C．粘度降低D．溶解度增加E．分子量改变

35．关于蛋白质变性的叙述，下列哪项是正确的

A．蛋白质变性并非绝对不可逆B．变性后仍能保留一定的生物活性

C．在280nm处出现增色效应D．变性后蛋白质的疏水基团进入蛋白分子的内部

E．变性后蛋白质变得难以消化

36．蛋白质变性的实质是由于下列哪种键被破坏

A．盐键B．肽键C．氢键D．疏水键E．次级键

37．蛋白质变性是由于

A．肽键断裂，一级结构遭到破坏B．蛋白质中的一些氨基酸残基受到修饰

C．蛋白质分子沉淀D．次级键断裂，天然构象解体

E．多肽链的净电荷等于零

38．关于蛋白质变性的叙述，下列哪项是正确的

A．有机溶剂使蛋白质变性主要是由于妨碍离子的相互作用B．尿素可使蛋白质变性

C．变性是一个非协同过程D．变性是在所加变性剂的很窄浓度范围内突然发生的

E．变性只破坏蛋白质的三、四级结构，二级和一级结构未被破坏

39．下列哪种技术既可以分离蛋白质又可以测定其分子量

A．亲和层析B．超速离心C．透析D．离子交换层析E．醋酸纤维素薄膜电泳

40．下列哪种分离纯化蛋白质的技术是根据溶解度的不同

A．凝胶过滤B．超虑法C．有机溶剂分级法D．离子交换层析E．区带电泳

41．蛋白质对紫外线的最大吸收波长是

A．320nmB．260nmC．280nmD．190nmE．220nm

42．有关血红蛋白（Hb）和肌红蛋白（Mb）的叙述不正确的是

A．都可以和氧结合，但结合曲线不同B．Hb和Mb都含铁

C．都是含辅基的结合蛋白D．都具有四级结构形式E．都属于色蛋白类

43．下列蛋白质通过凝胶过滤层析柱时最先被洗脱的是

A．血清清蛋白（分子量为）B．牛胰岛素（分子量为）

C．马肝过氧化氢酶（分子量为）D．肌红蛋白（分子量为）

E．牛β乳球蛋白（分子量为35KD）

44．分子病主要是哪种结构异常

A．一级结构B．二级结构C．三级结构D．四级结构E．空间结级结构

45．可被胰蛋白酶水解的三肽是

A．Phe－Ala－ArgB．Asp－Met－AlaC．Met－Gln－Pro

D．Pro－Arg－MetE．Phe－Ala－Met

46．Hb在携带O2的过程中，引起构象改变的现象称为

A．变构剂B．协同效应C．变构效应D．变构蛋白E．以上都不是

47．根据哪一类氨基酸的性质，可在280nm波长下，对蛋白质进行定量测定

A．酸性氨基酸B．碱性氨基酸C．含硫氨基酸D．杂环氨基酸E．芳香族氨基酸

48．有活性的肌红蛋白是

A．一级结构B．二级结构C．三级结构D．四级结构E．空间结构

49．维系蛋白质四级结构稳定的主要化学键是

A．盐键B．疏水作用C．氢键D．二硫键E．Vanderwaals力

50．胰岛素分子A链与B链的交联是靠

A．氢键B．二硫键C．盐键D．疏水键E．VanderWaals力

51．蛋白质的空间构象主要取决于

A．肽链氨基酸的序列B．α－螺旋和β－折叠C．肽链中的氨基酸侧链

D．肽链中的肽键E．肽链中的二硫键位置

52．蛋白质溶液的稳定因素是

A．蛋白质溶液的粘度大B．蛋白质分子表面的疏水基团相互排斥

C．蛋白质分子表面带有水化膜D．蛋白质溶液属于真溶液E．以上都不是

53．能使蛋白质沉淀的试剂是

A．浓盐酸B．硫酸铵溶液C．浓氢氧化钠溶液

D．生理盐水E．以上都不是

54．盐析法沉淀蛋白质的原理是

A．中和电荷，破坏水化膜B．盐与蛋白质结合成不溶性蛋白盐

C．降低蛋白质溶液的介电常数D．调节蛋白质溶液的等电点E．以上都不是

55．锌指结构是

A．二级结构B．结构域C．模序D．三级结构E．四级结构

56．蛋白质水化膜破坏时出现

A．构象改变B．亚基聚合C．肽键断裂D．二硫键形成E．蛋白质聚集

57．下列关于蛋白质结构叙述中不正确的是

A．一级结构决定二、三级结构B．二、三级结构决定四级结构

C．α－螺旋为二级结构的一种形式D．三级结构是指蛋白质分子内所有原子的空间排列

E．无规卷曲是在一级结构基础上形成的

58．依据肽键存在，用于蛋白质定量测定的方法是

A．凯氏定氮法B．酚试剂法C．茚三酮反应

D．双缩脲法E．280nm紫外吸收法

【B型题】

1．脯氨酸属于

A．亚氨基酸B．碱性氨基酸C．极性中性氨基酸D．非极性疏水氨基酸E．酸性氨基酸

2．谷胱甘肽

A．是体内的还原型物质B．含有两个特殊的肽键C．其功能基团是巯基

D．为三肽E．是多肽

3．α－螺旋

A．为右手螺旋B．绕中心轴盘旋上升C．螺距为

D．靠肽键维持稳定E．为二级结构

4．空间构象包括

A．β－折叠B．结构域C．亚基D．模序E．α－螺旋

5．分子伴侣

A．可使肽链正确折叠B．可维持蛋白质空间构象

C．在二硫键正确配对中起重要作用D．在亚基聚合时发挥重要作用E．以上都不对

6．蛋白质结构域

A．都有特定的功能B．为折叠的较为紧密的区域C．属于三级结构

D．存在每一种蛋白质中E．属于二级结构

7．谷胱甘肽的功能包括

A．解毒B．是细胞内的重要还原剂C．参与细胞间的信息传递

D．参与氨基酸的吸收及向细胞内的转运E．是细胞的重要供氢体

8．血红蛋白

A．由4个亚基组成B．含有血红素C．其亚基间可发生负协同效应

D．与氧结合呈现双曲线性质E．只有三级结构

9．蛋白质一级结构

A．是空间结构的基础B．指氨基酸排列顺序C．并不包括二硫键

D．与功能无关E．主要化学键是肽键

10．蛋白质三级结构

A．存在于每个天然蛋白质分子中B．是指局部肽段空间构象C．包括模序结构

D．属于高级结构E．有的蛋白质只有三级结构

11．下列对蛋白质的呈色反应叙述正确的是

A．茚三酮与α－氨基酸反应释放出CO2和NH3

B．茚三酮反应能测定蛋白质水解产物中的氨基酸浓度

C．茚三酮反应能测定蛋白质中肽键的数量

D．双缩脲反应是检测肽类及蛋白质的方法

E．双缩脲反应是检测蛋白质和氨基酸的共用方法

12．在pH＝时，下列哪些多肽在电泳时向负极移动

A．赖－丙－甘－甘B．赖－甘－丙－谷C．组－甘－丙－谷

D．谷－甘－丙－谷E．天冬酰胺－甘－丙－赖

13．可根据蛋白质的下列哪些性质来分离纯化蛋白质

A．蛋白质分子的大小B．蛋白质的溶解度C．蛋白质分子所携带的电荷

D．蛋白质的吸附性E．对其它分子的生物学亲和力

14．下列哪些方法可用于N－端氨基酸残基的测定

A．二硝基氟苯法B．肼解法C．丹酰氯法D．还原法E．异硫氰酸苯酯法

15．分离、纯化蛋白质常用的技术有

A．盐析B．层析C．电泳D．凝胶过滤法E．超速离心法

二、填空题

1．蛋白质的特征元素是______，它的平均含量为______。

2．组成蛋白质的氨基酸有______种，它们都是______型α－氨基酸，除______外都具有旋光性。

3．蛋白质分子的基本组成单位是______。

蛋白质的基本结构化学键是______。

4．血红蛋白是含有______辅基的蛋白质，其中的______离子可结合1分子O2。

5．血红蛋白的氧解离曲线为______说明第一个亚基与O2结合可______第二个亚基与O2结合，这被称为______效应。

6．蛋白质颗粒表面有许多______可吸引水分子，使颗粒表面形成一层______可防止蛋白质从溶液中______。

7．蛋白质颗粒在电场中移动。

移动的速率主要取决于______和______这种分离蛋白质的方法称为______。

8．用凝胶过滤分离蛋白质，分子量较小的蛋白质在柱中滞留的时间较______因此最先流出凝胶柱的蛋白质，其分子量最______。

9．蛋白质可与某些试剂作用产生颜色反应，可用作蛋白质的______和______分析。

常用的颜色反应有______和______。

10．多肽链的结构是具有______的，因此，在书写时把______末端写在肽链的______边，把______末端写在______边。

11．镰刀形红细胞性贫血患者的红细胞呈______状，易溶血，因其血红蛋白分子中______条______链上第______位氨基酸异常所致，即由正常的______被______取代。

三、名词解释

1．肽键（peptidebond）

2．肽

3．氨基酸残基（residue）

4．蛋白质的沉淀

5．肽单元（peptideunit）

6．亚基（subunit）

7．蛋白质的等电点

8．变性作用

四、简答题

1．为何蛋白质的含氮量能表示蛋白质相对量?

实验中又是如何依此原理计算蛋白质含量的?

2．何谓肽键和肽链及蛋白质的一级结构?

3．什么是蛋白质的二级结构?

它主要有哪几种?

各有何结构特征?

4．举例说明蛋白质的四级结构。

5．变性后蛋白质有何变化？

6．组成蛋白质的基本单位是什么？

结构有何特点？

五、论述题

1．举例说明蛋白质的一级结构、空间结构与功能的关系。

2．蛋白质变性作用有哪些实际应用？

3．某氨基酸溶于pH7的水中，所得氨基酸溶液的pH为6，问此氨基酸的pI是大于6、等于6还是小于6？

4．下列蛋白质的混合物在什么pH时电泳，分离效果最好？

（1）血清清蛋白（pI=）和血红蛋白（pI=）；

（2）肌红蛋白（pI=）和胰凝乳蛋白酶原（pI=）；

（3）卵清蛋白（pI=）、血清清蛋白（pI=）和脲酶（pI=）。

参考答案

1．E2．D3．E4．C5．D6．B7．E8．D9．A10．B11．C12．B13．B14．A15．B16．E17．D18．E19．C20．C21．E22．B23．A24．B25．D26．C

27．C28．C29．D30．A31．B32．D33．E34．A35．A36．E37．D38．B39．B

40．C41．C42．D43．C44．A45．D46．C47．E48．C49．B50．B51．A52．C

53．B54．A55．C56．E57．B58．D

【X型题】

1．DA2．ACD3．ABCE4．ABCDE5．AC6．ABC7．ABD8．AB9．ABE10．CDE

11．ABD12．AE13．ABCDE14．ACE15．ABCDE

解析

1．E因为肌红蛋白、细胞色素c和血红蛋白均含铁卟啉，属于色蛋白；

单加氧酶含NADPH及细胞色素P450等辅助因子，故是结合蛋白。

血清清蛋白不含辅助因子，水解产物只含氨基酸。

3．E因为多种蛋白质的平均含氮量约为16％，故可用定氮法来推算样品中蛋白质的大致含量。

每克样品中蛋白质的含量=×

含氮克数／每克样品。

4．C在生理条件下（pH=，Lys残基的侧链带正电荷，Gly、Cys和Thr残基不带电荷，Glu残基侧链带负电荷。

5．D含两个羧基指酸性氨基酸即Glu、Asp。

6．B体内亚氨基酸为Pro，含有吡咯环。

7．E血红素是具有四级结构的蛋白质。

8．D体内含S氨基酸有蛋氨酸、半胱氨酸。

9．A体内含有杂环的氨基酸有：

Trp、Tyr、His、Phe、以及Pro。

10．B2个半胱氨酸通过脱氢可以二硫键相结合，形成胱氨酸。

11．C非编码氨基酸在蛋白质合成时无相应密码子，20种氨基酸均属于编码氨基酸，鸟氨酸不在20种编码氨基酸中。

12．B酸性氨基酸、碱性氨基酸还含有非α－羧基、非α－氨基，因此C不对；

含有肽键的物质才能与双缩脲发生呈色反应，氨基酸不含有肽键，因此E错误。

13．BpI是指氨基酸所携带的静电荷为零时溶液的pH值，酸性氨基酸pI＝pK1+pK2/2；

碱性氨基酸的pI=pK2+pK3/2。

14．A除甘氨酸外组成蛋白质的20种氨基酸均为L－构型即α碳原子都是不对称碳原子。

15．B蛋白质的基本组成单位－氨基酸，共20种。

答案A、C、D是有相应密码的氨基酸，蛋白质分子中还含有20种以外的氨基酸，如羟脯氨酸就是其中的一种，它是蛋白质合成后，由脯氨酸羟化而来。

所以答案A、C、D、E都是天然蛋白质分子中存在的氨基酸。

瓜氨酸不是蛋白质的基本组成单位，它的功能是参与氨基酸的分解代谢。

16．E必需氨基酸有苏氨酸、色氨酸、赖氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸，A．中碱性氨基酸为组氨酸、精氨酸、赖氨酸，B中含硫氨基酸为半胱氨酸、蛋氨酸，C中支链氨基酸有甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸等，D中芳香族氨基酸有苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸，E中谷氨酸天冬氨酸不是必需氨基酸。

17．D出现错误的原因在于对以下内容的理解不够。

1．肽键：

是一个氨基酸的α－COOH与另一相邻氨基酸的a－NH2脱去一分子H2O所形成的键，也称酰胺键。

2．肽：

蛋白质分子中氨基酸与氨基酸之间通过肽键相连所形成的化合物叫肽。

多肽链中主链骨架也即蛋白质的一级结构，主要靠肽键维系。

答案D

－CONHCCONHCCONHCCONH－

记忆方法：

COckHeN

↑↑

公鸡母鸡（利用这两个英文单词记忆主链骨架，黑体大写字母代表主链骨架中的原子）。

18．E

（1）氨基酸和蛋白质是两性电解质：

氨基酸在水溶液中或在晶体状态时都以离子形式存在，即两性离子形式。

所谓两性离子是指在同一氨基酸分子上带有能放出质子的－NH3+正离子和能接受质子的－COOˉ负离子。

因此，氨基酸是两性电解质（图）。

蛋白质的基本组成单位是氨基酸，因此也具有两性解离的性质。

（2）氨基酸和蛋白质的等电点（pI）：

当两性离子氨基酸（或蛋白质）溶解于水时，其正负离子都能解离，但解离程度与溶液的pH有关。

当调节氨基酸（或蛋白质）溶液的pH，使氨基酸（或蛋白质）分子上的

－NH3+和－COOˉ的解离程度完全相同时，即氨基酸（或蛋白质）所带净电荷为零，在电场中即不向阴极移动也不向阳极移动，此时氨基酸（或蛋白质）所处溶液的pH值称为该氨基酸（或蛋白质）的等电点（pI）。

氨基酸的等电点（pI）是由其α－NH2和α－COOH解离常数的负对数pK1和pK2决定的。

若一个氨基酸侧链R基团可以解离，则pKR应予以考虑。

各种蛋白质具有特定的等电点，这与其所含氨基酸的种类和数量及其所处的环境pH有关。

选答案A者是将蛋白质在酸性环境下，即pH＜pI时净带正电荷，在碱性环境中，即pH＞pI时净带负电荷，记忆混淆了；

选答案D者则认为pH值中性即是蛋白质的pI。

在溶液pH时，各种蛋白质的pI均小于溶液pH，解离成负离子，向正极移动。

21．Eα－螺旋是一种有规则的构象，在球状蛋白质和纤维状蛋白质中都有α－螺旋存在。

在α螺旋中，肽链不是充分伸展的。

有一定的伸缩性。

甘氨酸的R基团为H，空间占位小，其α－碳与肽键