生物化学实验《生物化学实验》docWord文件下载.docx
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教学重点及难点:
1、
双缩脲反应的原理。
2、蛋白质、氨基酸与水合茚三酮的显色反应。
教学方法:
采用启发式教学,结合理论,对实验步骤进行分析并给于适当示范。
教学手段(挂图、幻灯、多媒体…等):
采用板书等手段进行教学。
使用的教材及参考资料:
1、生物化学实验指导,自编讲义。
2、基础生物化学实验,高等教育出版社,王秀奇主编,第二版,2003年。
思考题:
1、如果蛋白质水解后双缩脲反应呈阴性时,可以对水解反应程度作出什么样的推论?
2、茚三酮反应的阳性结果为何颜色?
能否用茚三酮反应可靠鉴定蛋白质的存在?
3、考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理是什么?
4、如何正确使用分光光度计?
5、测定蛋白质含量还有哪些方法,测定原理有哪些不同?
本单元教学总结(教学的主要经验、效果、存在的问题、改进措施等)
1、结合理论内容讲述实验内容,效果较好。
2、强调实验基本操作规范,让学生养成良好的实验习惯,具有扎实的实验技能。
实验二蛋白质的性质实验
(2)—蛋白质等电点的测定和沉淀反应
蛋白质的性质实验
(2)——蛋白质等电点的测定和沉淀反应(3学时)
1、了解蛋白质的两性解离性质。
2、学习测定蛋白质等电点的一种方法。
3、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。
4、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
5、了解蛋白质变性与沉淀的关系。
10分钟
Ø
蛋白质的两性解离性质
蛋白质等电点的概念
Ø
测蛋白质溶解度最低时的溶液pH值为其等电点
稳定蛋白质亲水胶体颗粒的因素
蛋白质沉淀反应的类型
2、实验操作讲解:
10分钟
蛋白质的盐析
重金属离子沉淀蛋白质
某些有机酸沉淀蛋白质
有机溶剂沉淀蛋白质
乙醇引起的变性与沉淀
3、总结。
稳定蛋白质亲水胶体颗粒的因素。
2、蛋白质变性与沉淀的关系。
板书,PPT。
1、生物化学实验指导,自编讲义
2、基础生物化学实验,高等教育出版社,王秀奇主编,第二版,2003年
1、稳定蛋白质亲水胶体颗粒的因素有哪些?
3、解释蛋白质两性反应中颜色及沉淀变化的原因。
4、该方法测定蛋白质等电点的原理是什么?
2、强调实验基本操作规范,培养学生对实验现象的观察和实验结果的思考。
实验三牛乳中蛋白质的提取与鉴定
牛乳中蛋白质的提取与鉴定(3学时)
教学目标及基本要求
1、学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。
教学内容提要及时间分配
8分钟
蛋白质在其等电点pH溶液中溶解度降底。
根据这个原理,将牛乳的pH调整至4.8,即酪蛋白的等电点时,酪蛋白即沉淀出来。
用乙醇除去酪蛋白沉淀中不溶于水的脂肪,得到纯的酪蛋白
所得酪蛋白的定性鉴定
2、实验条件及步骤讲解:
7分钟
酪蛋白的制备
酪蛋白的性质鉴定
乳清中可凝固性蛋白质的鉴定
酪蛋白的制备。
1、结合理论实际,深入浅出。
2、实验操作过程给于示教。
教学手段(挂图、幻灯、多媒体⋯⋯等)
使用的教材及参考资料
1、牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。
本单元教学总结(教学的主要经验、效果、存在问题、改进措施等)
1、实验内容结合理论内容进行讲述,效果较好。
2、强调实验基本操作规范,让学生养成良好的实验习惯,具有扎实的实验技能。
实验四氨基酸的分离鉴定——纸层析法
氨基酸的分离鉴定——纸层析法(3学时)
通过氨基酸的分离,学习纸层析法的基本原理及操作方法。
1、实验原理的说明10分钟
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法
层析溶剂由有机溶剂和水组成
物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值(比移)来表示
在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。
Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。
2、实验操作讲解:
5分钟
教学重点及难点
1、扩展剂的制备。
2、氨基酸样品的点样。
教学方法
理论与实际相结合,深入浅出,培养学生综合运用所学课程知识。
实验过程中向学生提出问题,让学生在实验中观察思考,提高学生的分析问题,解决问题的能力。
教学手段(挂图、幻灯、多媒体..等)
板书,PPT,示教。
1、生物化学实验指导,自编讲义
1、何谓Rf值?
影响Rf值的主要因素是什么?
2、层析缸中平衡溶剂的作用是什么?
3、滤纸为什么要在层析缸中预先悬空密封饱和30min?
4、展开时为什么要调节滤纸使溶剂前沿线平行于点样线?
5、实验结果为什么有时会产生拖尾、相邻氨基酸分不开等异常现象?
在实验中向学生提问题,可增强学生的好奇心,对于理解实验原理很有帮助。
实验五酶的特性(设计型实验)
酶的特性(设计型实验)(6学时)
1、加深对酶的性质的认识:
本实验由温度对酶活力的影响;
PH对酶活力的影响;
酶的激活剂及抑制;
酶的专一性4组实验组成。
2、学会设计并实施影响酶催化活性因素的实验方案。
10分钟
酶的催化作用受温度的影响。
在最适温度下,酶的反应速度最高。
大多数动物酶的最适温度为37-40℃,植物酶的最适温度为50-60℃
酶的活力受环境pH的影响极为显著。
不同酶的最适pH值不同
酶的活性受活化剂或抑制剂的影响
酶具有高度的专一性,淀粉和蔗糖无还原性
2、实验设计方案讲解:
1、影响酶催化活性的因素。
2、实验方案设计及原理方法选择。
结合理论实际,深入浅出。
实验操作过程给于示教。
多媒体,板书,画图,示教。
实验方法设计及选择的原理和依据
2、
进行设计性实验的经验与体会
3、什么是酶的最适温度及其应用意义?
4、什么是酶反应的最适pH?
对酶活性有什么影响?
5、什么是酶的活化剂?
6、什么是酶的抑制剂?
与变性剂有何区别?
1、学生实验结合理论内容进行自行设计,讲述实验设计方法,效果较好。
2、学生自己设计实验方案,探讨影响酶催化活性的因素,培养学生分析和解决实际问题的能力,提高学生的主动性和创造性,得到能力的培养。
实验六酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定(3学时)
生科、农学专业
了解核酸的组分,并掌握鉴定核酸组分的方法。
酵母核酸中RNA含量较多。
RNA可溶于碱性溶液,在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀,由此即得到RNA的粗制品。
核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。
加硫酸煮沸可使其水解,从水解液中可以测出上述组分的存在。
5分钟
3、总结2分钟
核酸组分鉴定的实验依据。
理论结合实践,深入浅出。
实验操作过程给予示教。
教学手段:
1、如何得到高产量RNA的粗制品?
2、现有三瓶未知溶液,已知它们分别为蛋白质、糖和RNA,采用什么试剂和方法鉴定?
(自行设计简便的实验)
本单元教学总结:
对学生的实验预习、实验纪律、实验操作、实验报告、实验整理等环节进行督导,使学生养成良好的实验习惯,提高实验技能。
实验七紫外分光光度法测定核酸的含量
紫外分光光度法测定核酸的含量(3学时)
1、了解紫外分光光度计的基本原理和使用方法。
2、学习用紫外分光光度法测定核酸含量的原理和操作方法。
核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键系统,能吸收紫外光。
RNA和DNA的紫外吸收高峰在A260nm波长处。
一般在A260波长下,每mL含1ugRNA溶液的光吸收值为0.020。
故测定未知浓度RNA或DNA溶液A260nm波长的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。
此法操作简便。
若样品内混杂有大量的核苷酸或蛋白质等能吸收紫外光的物质,则测定误差较大,故应设法预除去。
5分钟
紫外分光光度计的使用
1、核酸的制备
2、紫外分光光度计的使用
思考题或作业:
1、紫外分光光度计的使用方法和操作要点?
2、若样品中含有蛋白质和核苷酸等杂质,如何排除干扰?
1、强调实验基本操作规范,让学生养成良好的实验习惯,具有扎实的实验技能。
实验八 维生素C的定量测定
维生素C的定量测定(3学时)
1、学习维生素C定量测定法的原理和方法。
2、进一步熟悉、掌握微量商定法的基本操作技术。
测定维生素C(抗坏血酸)的化学方法,一般是根据它的还原性。
本实验即利用维生素C的这一性质,使其与2,6-二氯酚靛酚作用。
2,6-二氯酚靛酚钠盐的水溶液呈蓝色,在酸性环境中为玫瑰色,当其被还原时,则脱色。
5分钟
1、含维生素C的样品提取液的制备
2、熟练掌握滴定操作
教学手段(幻灯、多媒体等)
试述本实验介绍的2,6-二氯酚靛酚滴定法的优缺点。
实验九 血糖的定量测定—GOD-PAP法
血糖的定量测定—GOD-PAP法(3学时)
生科、动科专业
学习用GOD-PAP法测定血糖含量。
动物血液中的糖主要是葡萄糖,正常情况下,其含量较恒定。
健康家兔的血糖水平为80-120mg/dL。
GOD-PAP法,即过氧化物酶-抗过氧化物酶法是近几年临床血糖定量测定普遍采用的方法。
该法测定血糖依据的酶反应为:
葡萄糖
氨基安替比林+酚
醌亚胺+
醌亚胺在A480nm~A550nm波长有最大吸收,所产生颜色的深浅与血清中葡萄糖的量成正比。
样品中葡萄糖浓度的计算方法。
1、制取样品时应主要什么?
2、体液血糖测定有哪些方法
实验十DNA的琼脂糖凝胶电泳
DNA的琼脂糖凝胶电泳(3学时)
1、了解琼脂糖凝胶电泳的原理和使用范围。
2、了解琼脂糖凝胶电泳的操作技术。
10分钟
DNA片断琼脂糖凝胶电泳的原理与蛋白质的电泳原理基本相同,DNA分子在高于其等电点的pH溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。
DNA分子在电场中通过介质而泳动,除电荷效应外,凝胶介质还有分子筛效应,与分子大小及构想有关。
对于线形DNA分子,其电场中的迁移率与其分子量的对数值成反比。
在凝胶中加入少量溴化乙锭,其分子可插入DNA的碱基之间,形成一种光络合物,在254~365nm波长紫外光照射下,呈现桔红色的荧光,因此可对分离的DNA进行检测。
电泳时以溴酚蓝及二甲苯氰(蓝)作为双色电泳指示剂。
其目的有:
①增大样品密度,确保DNA均匀进入样品孔内;
②使样品呈现颜色,了解样品泳动情况,使操作更为便利;
③以0.5×
TBE做电泳液时溴酚蓝的泳动率约与长300bp的双链DNA相同,二甲苯氰(蓝)则与4kb的DNA相同。
琼脂糖凝胶的制备
样品配制与加样
电泳
观察和拍照
3、凝胶成像系统的使用2分钟
利用电泳方法分离核酸的原理。
如何使用电泳仪和水平式电泳槽。
3、
凝胶的制备和加样操作。
实验操作过程给于示教和个别指导。
教学手段(多媒体、录像等)
PPT,录像,示教。
1、DNA在电场中的迁移率取决于哪些因素?
2、琼脂糖凝胶有哪些注意事项?
首先让学生观看录像,要求学生注意电泳技术的基本原理和基本操作。
在此基础上,学生进入实验操作阶段。
实验十一 蛋白质的透析
蛋白质的透析(3学时)
生科专业
学习透析的基本原理和操作
3分钟
蛋白质是大分子物质,它不能透过透析膜而小分子物质可以自由透过。
在分离提纯蛋白质的过程中,常利用透析的方法使蛋白质与其中夹杂的小分子物质分开。
用蛋白质溶液作双缩脲反应
向火棉胶制成的透析管中装人10~15mL蛋白质溶液并放在盛有蒸馏水的烧杯中
检查氯离子的存在。
做双缩脲反应,检查是否有蛋白质存在。
不断更换烧杯中的蒸馏水以加速透析过程。
火棉胶制成透析管
板书,示教。
蛋白质透析的操作要点及主要事项。
实验十二SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离细菌蛋白质
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离细菌蛋白质(12学时)
生科
掌握不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理和实验方法。
能够熟练使用电泳仪和垂直板式电泳槽进行凝胶电泳操作。
1、凝胶电泳分离蛋白质的原理。
5分钟
2、聚丙烯酰胺凝胶电泳的组成成份。
3分钟
3、影响电泳分离效果的因素。
2分钟
4、实验条件及步骤。
10分钟
5、仪器的使用方法。
4分钟
6、具体实验过程包括:
凝胶贮液和工作液的配制、电泳装置的安装、制分离胶和浓缩胶、样品的制备、加样、电泳、取胶、染色、固定、背景脱色。
7、评价并总结实验结果1分钟
利用电泳方法分离蛋白质、核酸等生物大分子物质的原理。
如何使用电泳仪和垂直板式电泳槽。
分离胶和浓缩胶的制备及灌胶和加样的操作。
多媒体、录像,示教
电泳后上下槽缓冲液可否混合后再使用?
为什么?
2、上样缓冲液中加入甘油的作用是什么?
3、贮液配制及贮存应注意什么?
4、过硫酸铵、TEMED和考马斯亮蓝在实验中有什么作用?
1、分离胶和浓缩胶的制备过程不要与皮肤接触,管胶过程缓慢不能产生气泡。
2、电泳仪应从低压电流逐步到高压电,以免直接影响实验结果。
此实验过程中需要凝胶过程,所以最好选择于室温达到25°
C的季节进行。
强调实验基本操作规范,让学生养成良好的实验习惯,具有扎实的实验技能。
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