纯化水微生物验证方案和记录Word文档格式.docx
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刘君
分析领班
质量部检验室
验证报告批准
方案起草
签名
日期
方案审核
检验室主任
方案批准
1、引言……………………………………………………………………………………………5
1.1概述……………………………………………………………………………………………5
1.2验证的目的……………………………………………………………………………………5
1.3验证的意义……………………………………………………………………………………5
1.4验证的时机……………………………………………………………………………………5
1.5验证的依据……………………………………………………………………………………5
1.6验证人员的职责………………………………………………………………………………5
2、验证内容………………………………………………………………………………………5
2.1供试品…………………………………………………………………………………………5
2.2仪器设备………………………………………………………………………………………6
2.3培养基…………………………………………………………………………………………6
2.4菌种……………………………………………………………………………………………7
2.5稀释液…………………………………………………………………………………………7
2.6器具……………………………………………………………………………………………7
2.7相关文件………………………………………………………………………………………7
3、方法建立………………………………………………………………………………………8
3.1实验组…………………………………………………………………………………………8
3.2菌液组…………………………………………………………………………………………8
3.3供试品对照组…………………………………………………………………………………8
3.4稀释剂对照组…………………………………………………………………………………8
4、实验操作………………………………………………………………………………………8
4.1供试液的制备…………………………………………………………………………………8
4.2菌液的制备……………………………………………………………………………………8
4.3试验记录…………………………………………………………………………………9-11
4.4回收率计算…………………………………………………………………………………12
4.5结果判断……………………………………………………………………………………12
5、验证结论……………………………………………………………………………………12
1、引言:
1.1概述
微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。
检查项目包括细菌数、霉菌数及控制菌检查。
1.2验证的目的:
确认所采用的薄膜过滤法适合于纯化水的细菌,霉菌及酵母菌数的测定。
1.3验证的意义:
保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。
1.4验证的时机:
(1)建立纯化水的微生物限度检查法时。
(2)修订的检查方法时。
(3)供试品的生产工艺或原检验条件发生改变可能影响检验结果时。
(4)定期的方法验证。
1.5验证的依据:
1)中国药典2010版附录ⅪJ微生物限度检查方法验证。
2)中国药典2010版附录ⅪⅩP微生物限度检查法应用指导原则。
1.6验证人员职责:
表1
姓名
组内职务
需完成工作
QC领班
负责纯化水微生物限度检查验证方案的起草及实验操作。
负责微生物限度检查验证方案的审核及实验操作的校对。
刘荣福
负责微生物限度检查验证方案的批准及验证结果的评价。
负责微生物限度检查验证报告的批准。
2验证内容:
2.1供试品:
品名:
纯化水规格:
批号:
单位:
泰柯棕化(张家港)有限公司。
2.2仪器设备:
表2
名称
厂家
型号
恒温恒湿培养箱
上海贺德实验设备有限公司
LRHS-150B
隔水式恒温培养箱
上海索普仪器有限公司
GHP9050
MJ型霉菌培养箱
上海新苗医疗器械
MJ-180BS
烘箱
德国美而特有限公司
ULE400
SW-CJX-1F型工作台
苏州汇通空调净化工程有限公司
SW-CJX-1F
美墨尔特(上海)有限公司
振荡水浴槽
WNB22
2.3培养基:
表3
来源
批号
营养肉汤培养基
北京三药科技开发公司
140318
营养琼脂培养基
140425
玫瑰红钠琼脂培养基
140414
PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液
140372
乳糖胆盐培养基
上海盛思生化科技有限公司
130201
改良马丁培养基
140611
改良马丁琼脂培养基
130911
2.4菌种
大肠埃希菌[CMCC(B)44102]第 代。
金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]第 代。
枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]第 代。
白色念珠菌[CMCC(F)98001]第 代。
黑曲霉[CMCC(F)98003]第 代。
菌种不得超过5代
加菌量:
50—100CFU/ml
2.5稀释液:
①0.9%无菌氯化钠溶液;
②PH7.0无菌氯化纳—蛋白胨缓冲液
2.6器具:
不锈钢薄膜过滤器(六个滤头)、无菌培养皿、无菌移液管、三角烧瓶、不锈钢镊子、不锈钢移液管桶、接种棒、酒精灯、量筒等。
2.7相关文件:
表4
文件名称
编号
存放部门
微生物限度检查标准操作规程
SOP-GR22-2014
品质管理部
检验方法验证、确认标准操作规程
SOP-QP07-2014
纯化水检验标准操作规程
SOP-QT10-2014
ULE型电热鼓风干燥箱操作、维护程序
SOP-TI18-2014
隔水式电热恒温培养箱操作规程
SOP-TI27-2014
MJ-180BS型霉菌培养箱操作规程
SOP-TI19-2014
手提式不锈钢蒸汽消毒器操作维护规程
SOP-TI21-2014
3方法建立:
2010版中国药典规定纯化水微生物限度试验采用薄膜过滤法检查。
但没规定取样量,由于所使用的滤膜孔径不大于0.45um,直径为50mm,规定每片滤膜上的菌落数应不超过100个。
如果取样量过大,样品含菌量较多,就会造成细菌不宜分散,点计困难;
如果取样量过少,不能有效反映样品染菌量。
为此参照注射用水微生物限度检查法建立以下几种方法进行了筛选试验:
方法1:
每张滤膜取100ml样品做为供试液直接过滤。
方法2:
每张滤膜取样品10ml用灭菌0.9%氯化钠溶液90ml稀释后作为供试液(100ml)直接过滤。
方法3:
每张滤膜取样品1ml用灭菌0.9%氯化钠溶液99ml稀释后作为供试液(100ml)直接过滤。
验证试验采用方法3制备供试液,其它筛选试验另外报告。
3.1试验组分别取供试液100ml过滤,冲洗,在最后一次的冲洗液中加入50~100cfu试验菌,过滤,取出滤膜,取出滤膜,菌面朝上贴于琼脂培养基平板上培养。
每株试验菌平行制备2个平皿,按平皿菌落计数法测定其菌数,每片滤膜上的菌落数应不超过100个。
3.2菌液组取50~100cfu试验菌,分别注入平皿中,立即倾注琼脂培养基,每株试验菌平行制备2个平皿,按平皿菌落计数法测定其菌数。
3.3供试品对照组分别取供试液100ml过滤,取出滤膜,菌面朝上贴于琼脂培养基平板上培养。
细菌、霉菌及酵母菌各制备2个平皿,测定供试品本底菌数。
3.4稀释剂对照组取0.9%无菌氯化钠溶液100ml和50~100cfu试验菌,分别过滤,取出滤膜,菌面朝上贴于琼脂培养基平板上培养。
4实验操作:
4.1供试液的制备:
分别取供试液(纯化水)1ml,加PH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液至100ml混匀,作
为1:
100供试液。
4.2菌液的制备:
9ml0.9%无菌NaCl溶液
金黄色葡萄球菌新鲜肉汤培养物1ml至含菌量CFU/ml
10倍系列稀释
大肠埃希菌新鲜肉汤培养物1ml至含菌量CFU/ml
枯草芽孢杆菌新鲜肉汤培养物1ml至含菌量CFU/ml
白色念珠菌新鲜改良马丁培养物1ml至含菌量CFU/ml
黑曲霉新鲜孢子悬液,用0.9%无菌NaCl溶液稀释至与细菌浓度标准管相同浊度,10倍系列稀释至含菌量CFU/ml
4.3试验记录:
独立试验一:
各试验组菌落计数(回收率%)取样点总出水口
试验时间年月日完成时间年月日
表5.1:
纯化水细菌、霉菌和酵母菌回收率的测定(薄膜过滤法)
菌种
类型
试验
次数
试验组
菌液组
供试品
对照组
回收率
大肠
埃希菌
1
65
83
62
2
92
74
平均值
63.5
87.5
1.5
68
金黄色
葡萄球菌
枯草芽
孢杆菌
白色
念珠菌
黑曲霉
备注:
试验组及菌液组的霉菌及酵母菌培养72小时后开始计数,供试品对照组的霉菌及酵母菌培养72小时后疑有菌落,但不宜观察。
所以霉菌及酵母菌计数以培养96小时后计数为准。
试验周期为4天。
结论:
本次试验各试验组的菌回收率和各稀释剂对照组的菌回收率均不低于70%,按标准规定,本次试验结果符合规定。
各试验组菌落计数(回收率%)取样点总回水口
表5.2:
各试验组菌落计数(回收率%)取样点贮水罐
表5.3:
4.4回收率计算:
试验组平均菌落数—供试品对照组平均菌落数
试验组菌回收率(%)=×
100%
菌液组平均菌落数
稀释剂对照组平均菌落数
稀释剂对照组菌回收率(%)=×
4.5结果判断:
在三次独立的平行实验中,若试验组的菌回收率均不低于70%,照该供试液的制备方法和计数法测定供试品的细菌、霉菌数。
操作人:
复核人:
5、验证结论:
根据验证试验结果,纯化水微生物限度检查按照2010版中国药典二部(附录XIJ微生物限度检查法检验),细菌、霉菌及酵母菌计数可采用薄膜过滤法检查。
审核人:
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