常用培养基配方Word文件下载.docx

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36缓冲蛋白胨水（BP）

37氯化镁孔雀绿增菌液（MM）

38四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）

39四硫磺酸钠煌绿增菌液（换用方法）

40亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）

41GN增菌液

42肠道菌增菌肉汤

43亚硫酸铋琼脂（BS）

44DHL琼脂

45HE琼脂

46SS琼脂

47WS琼脂

48麦康凯琼脂

49伊红美蓝琼脂（EMB）

50三糖铁琼脂（TSI）

51三糖铁琼脂（换用方法）

52克氏双糖铁琼脂（KI）

53克氏双糖铁琼脂（换用方法）

54葡萄糖半固体发酵管

555%乳糖发酵管

56CAYE培养基

57Honda氏产毒肉汤

58Elek氏培养基（毒素测定用）

59氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基

60胰蛋白胨水

61Rustigian氏尿素培养液

62氯化钠结晶紫增菌液

63氯化钠蔗糖琼脂

64嗜盐菌选择性琼脂

653.5%氯化钠三糖铁琼脂

66氯化钠血琼脂

673.5%氯化钠生化试验培养基

68改良磷酸盐缓冲液（小肠结肠炎耶尔森氏菌专用）

69CIN-1培养基

70嗜盐性试验培养基

01糖发酵管

成分:

牛肉膏5g

蛋白胨10g

氯化钠3g

磷酸氢二钠（Na2HPO4·

12H2O）2g

0.2%滇麝香草酚蓝溶液12mL

蒸馏水1000mL

pH7.4

制法:

1葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5%加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内,121℃高压灭菌15min.

2其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶100mL,121℃高压灭菌15min.另将各种糖类分别配好10%溶液,同时高压灭菌.将5mL糖溶液加入于100mL培养基内,以无菌操作分装小试管.

注:

蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌.

试验方法:

从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于36℃±

1℃培养,一般观察2～3d.迟缓反应需观察14～30d.

邻硝基酚β-D-半乳糖昔（ONPG）60mg

（O-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside）

0.01mol/L磷酸钠缓冲液（pH7.5）10mL

1%蛋白胨水（PH7.5）30mL

将ONPG溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,以过滤法除菌,分装于10mm×

75mm试管,每管0.5mL,用橡皮塞塞紧.

自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种,于36±

1℃培养1～3h和24h观察结果.如果β-半乳糖苷酶产生,则于1～3h变黄色,如无此酶则24h不变色.

03西蒙氏柠檬酸盐培养基

氯化钠5g

硫酸镁（MgSO4·

7H2O）0.2g

磷酸二氢铵1g

磷酸氢二钾1g

柠檬酸钠5g

琼脂20g

0.2%溴麝香草酚蓝溶液40mL

pH6.8

先将盐类溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化.然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121℃高压灭菌15min.放成斜面.

挑取少量琼脂培养物接种,于36±

1℃培养4d,每天观察结果.阳性者斜面上有菌落生长,培养基从绿色转为蓝色.

04缓冲葡萄糖蛋白胨水（MR和VP试验用）

磷酸氢二钾5g

多胨7g

葡萄糖5g

pH7.0

溶化后校正pH,分装试管,每管1mL,121℃高压灭菌15min.

甲基红（MR）试验:

自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中,于36±

1℃培养2～5d,哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养.滴加甲基红试剂一滴,立即观察结果.鲜红色为阳性,黄色为阴性.甲基红试剂配法:

10mg甲基红溶于30mL95%乙醇中,然后加入20mL蒸馏水.

V-P试验:

用琼脂培养物接种本培养基中,于36±

1℃培养2～4d.哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养.加入6%α-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0.2mL,充分振摇试管,观察结果.阳性反应立刻或于数分钟内出现红色,如为阴性,应放在36±

1℃下培养4h再进行观察.

柠檬酸钠3g

葡萄糖0.2g

酵母浸膏0.5g

单盐酸半胱氨酸0.1g

磷酸二氢钾1g

氯化钠5g

0.2%酚红溶液6mL

琼脂15g

加热溶解,分装试管,121℃高压灭菌15min.放成斜面.

用琼脂培养物接种整个斜面,在36±

1℃培养7d,每天观察结果.阳性者培养基变为红色.

06丙二酸钠培养基

酵母浸膏1g

硫酸铵2g

磷酸氢二钾0.6g

磷酸二氢钾0.4g

氯化钠2g

丙二酸钠3g

0.2%溴麝香草酚蓝溶液12mL

先将酵母浸膏和盐类溶解于水,校正pH后再加入指示剂,分装试管,121℃高压灭菌15min.

用新鲜的琼脂培养物接种,于36±

1℃培养48h,观察结果.阳性者由绿色变为蓝色.

07葡葡糖铵培养基

葡萄糖2g

先将盐类和糖溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化,然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121℃高压灭菌15min,放成斜面.

用接种针轻轻触及培养物的表面,在盐水管内做成极稀的悬液,肉眼观察不见混浊,以每一接种环内含菌数在20～100之间为宜.将接种环灭菌后挑取菌液接种,同时再以同法接种普通斜面一支作为对照.于36±

1℃培养24h.阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长;

阴性者不生长,但在对照培养基上生长良好.如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果.

容器使用前应用清洁液浸泡.再用清水,蒸馏水冲洗干净,并用新棉花做成棉塞,干热灭菌后使用.如果操作时不注意,有杂质污染时,易造成假阳性的结果.

蛋白胨2g

磷酸氢二钾0.3g

琼脂4g

葡萄糖10g

pH7.2

将蛋白胨和盐类加水溶解后,校正pH至7.2.加入葡萄糖,琼脂煮沸,溶化琼脂,然后加入指示剂.混匀后,分装试管,121℃高压灭菌15min,直立凝固备用.

从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种,同时接种两支培养基,其中一支于接种后滴加溶化的1%琼脂液于表面,高度约1cm,于36±

1℃培养.

马尿酸钠1g

肉浸液100mL

将马尿酸钠溶解于肉浸液内,分装于小试管内,并于管壁画一横线.以标志管内液面高度,高压灭菌121℃20min.

试剂:

三氯化铁（FeCl3·

6H2O）12g,溶于2%盐酸溶液100mL中即成.

用纯培养物接种,于42℃培养48h,观察培养液是否到达试管壁上记号处,如不足时,用蒸馏水补足至原量.经离心沉淀,吸取上清液0.8mL,加入三氯化铁试剂0.2mL,立即混合均匀,经10～15min,观察结果.

结果:

出现恒久之沉淀物为阳性.

蛋白胨5g

牛肉膏3g

明胶120g

pH6.8～7.0

加热溶解,校正至pH7.4～7.6,分装小管,121℃高压灭菌10min,取出后迅速冷却,使其凝固.复查最终pH应为6.8～7.0.

用琼脂培养物穿刺接种,放在22～25℃培养,每天观察结果,记录液化时间.或放在36士1℃培养,每天取出,放冰箱内30min后再观察结果.

酵母浸膏3g

DI-苯丙氨酸（或L-苯丙氨酸1g）2g

磷酸氢二钠1g

琼脂12g

加热溶解后分装试管,121℃高压灭菌15min,使成斜面.

自琼脂斜面上挑取大量培养物,移种于苯丙氨酸琼脂,在36±

1℃培养4h或18～24h.滴加10%三氯化铁溶液2～3滴,自斜面培养物上流下,苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色.

葡萄糖1g

1.6%滇甲酚紫-乙醇溶液1mL

L-氨基酸或DL-氨基酸0.5或1g/100mL

除氨基酸以外的成分加热溶解后,分装每瓶100mL,分别加入各种氨基酸:

赖氨酸,精氨酸和鸟氨酸.L-氨基酸按0.5%加入,DL-氨基酸按1%加入.再行校正pH至6.8.对照培养基不加氨基酸.分装于灭菌的小试管内,每管0.5mL,上面滴加一层液体石蜡,115℃高压灭菌10min.

从琼脂斜面上挑取培养物接种,于36±

1℃培养18～24h,观察结果.氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱,培养基应呈紫色.阴性者无碱性产物,但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色.对照管应为黄色.

蛋白胨（或胰蛋白胨）20g

按上述成分配制,分装小试管,121℃高压灭菌15min.

靛基质试剂

柯凡克试剂:

将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中.然后缓慢加入浓盐酸25mL.

欧-波试剂:

将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内.然后缓慢加入浓盐酸20mL.

挑取小量培养物接种,在36±

1℃培养1～2d,必要时可培养4～5d.加入柯凡克试剂约0.5mL,轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色;

或加入欧-波试剂约0.5mL,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色.

蛋白胨中应含有丰富的色氨酸.每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用.

硫酸亚铁0.2g

硫代硫酸钠0.3g

加热溶解,校正pH,分装试管,115℃高压灭菌15min,取出直立候其凝固.

挑取琼脂培养物,沿管壁穿刺,于36±

1℃培养1～2d,观察结果.产硫化氢者使培养基变为黑色.

肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生,应采用三糖铁琼脂或本培养基.

蛋白胨1g

磷酸二氢钾2g

0.4%酚红溶液3mL

20%尿素溶液100mL

pH7.2±

0.1

将除尿素和琼脂以外的成分配好,并校正pH,加入琼脂,加热溶化并分装烧瓶.121℃高压灭菌15min.冷至50～55℃,加入经除菌过滤的尿素溶液.尿素的最终浓度为2%,最终pH应为7.2±

0.1.分装于灭菌试管内,放成斜面备用.

挑取琼脂培养物接种,在36±

1℃培养24h,观察结果.尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色.

磷酸二氢钾0.225g

磷酸氢二钠5.64g

0.5%氰化钾溶液20mL

pH7.6

将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶,121℃高压灭菌15min.放在冰箱内使其充分冷却.每100mL培养基加入0.5%氰化钾溶液2.0mL（最后浓度为1:

10000）,分装于12mm×

100mm灭菌试管,每管约4mL,立刻用灭菌橡皮塞塞紧,放在4℃冰箱内,至少可保存两个月.同时,将不加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装试管备用.

1%盐酸二甲基对苯二胺溶液:

少量新鲜配制,干冰箱内避光保存.

1%α-萘酚-乙醇溶液.

取白色洁净滤纸沾取菌落.加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴,阳性者呈现粉红色,并逐渐加深;

再加α-萘酚溶液一滴,阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色.阴性于两分钟内不变色.以毛细吸管吸取试剂,直接滴加于菌落上,其显色反应与以上相同.

硝酸钾0.2g

蛋白5g

溶解,校正pH,分装试管,每管约5mL,121℃高压灭菌15min.

硝酸盐还原试剂:

甲液:

将对氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中.

乙液:

将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中.

接种后在36±

1℃培养1～4d,加入甲液和乙液各一滴,观察结果.硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色.

本试验阴性的原因有三:

细菌不能还原硝酸盐;

亚硝酸盐继续分解,生成氨和氮;

培养基不适于细菌的生长.如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解,可再加入锌粉少许,可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色.

1%盐酸二甲基对苯二胺溶液.

取37℃（或低于37℃）培养20h的斜面培养物一支,将两种试剂各2～3滴,从斜面上端滴下,并将斜面略加倾斜,使试剂混合液流经斜面上的培养物.如系平板培养物,则可用试剂混合液滴在菌落上.

于2min内呈现蓝色者为阳性.阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应,2min以后出现微弱或可疑反应均作为阴性结果.

3%过氧化氢溶液:

临用时配制.

挑取固体培养基上菌落一接种环,置于洁净试管内,滴加3%过氧化氢溶液2mL,观察结果.

于半分钟内发生气泡者为阳性,不发生气泡者为阴性.

2%儿茶酚溶液.

3%过氧化氢溶液.

挑取固体培养基上菌落一接种环,置于洁净试管内,滴加2%儿茶酚溶液1mL及3%过氧化氢溶液1mL.静置于室温（20℃）中30～60min,观察结果.

阳性反应,细菌变为黑褐色;

阴性反应,细菌不变色.

过氧化物酶的作用可受氰化钾的抑制.

储存液

磷酸二氢钾34g

1mol/L氢氧化钠溶液175mL

蒸馏水825mL

pH7.2

先将磷酸盐溶解于500mL蒸馏水中,用1mol/L氢氧化钠溶液校正pH后,再用蒸馏水稀释至1000mL.

稀释液:

取储存液1.25mL,用蒸馏水稀释至1000mL.分装每瓶100mL或每管10mL,121℃高压灭菌15min.

明胶2g

磷酸氢二钠4g

pH6.2

加热溶解,校正pH,121℃高压灭菌15min.

苯酚10g

乳酸（比重1.21）10g

甘油20g

蒸馏水10mL

将苯酚在水中加热溶解,然后加入乳酸及甘油.

用途:

检验真菌形态时用.

绞碎牛肉500g

磷酸氢二钾2g

将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL,混合后放冰箱过夜,除去液面之浮油,隔水煮沸半小时,使肉渣完全凝结成块,用绒布过滤,并挤压收集全部滤液,加水补足原量.加入蛋白胨,氯化钠和磷酸盐,溶解后校正pH7.4～7.6煮沸并过滤,分装烧瓶,121℃高压灭菌30min.

肉浸液肉汤（PH7.4）1000mL

琼脂17～20g

加热溶化琼脂,分装烧瓶或试管,121℃高压灭菌30min.根据需要,倾注平板或放成斜面.

绞碎牛肉（或牛心）1000g

15%氢氧化钠溶液27mL

胰蛋白酶40mL

三氯甲烷1mL

氯化钠10g

蒸馏水2000mL

1称取碎牛肉,加蒸馏水,隔水加热到80℃,维持15min.

2加氢氧化钠溶液,对pH试纸呈弱碱性,冷至40℃.

3加胰蛋白酶,氯仿,在36±

1℃放置4～5h,每小时摇动一二次.

44h后,吸取上层液5mL于试管中,加5%硫酸铜溶液0.1mL,4%氢氧化钠溶液5mL,混合之.若呈红色,则不须再消化,可由温箱取出.

5加入15%乙酸溶液45mL,对pH试纸呈酸性.

6煮沸15min,使胰蛋白酶破坏,冷后,放冰箱内一夜.

7次日吸取上层清液,加氯化钠10g,并加水补足原量,煮沸.

8校正pH7.4～7.6（加15%氢氧化钠溶液约10mL）,加热,用滤纸过滤,分装烧瓶,121℃高压灭菌20min.

①此培养基可作为琼脂培养基的基础,不需加蛋白胨.

②胰蛋白酶之配制:

称取去脂绞碎的猪胰500g,加入乙醇500mL,蒸馏水1500mL,混合之,装人玻塞瓶内.每日摇匀三次.3d后,用绒布过滤挤出其汁,加盐酸至0.05%,放冰箱内保存备用.

绞碎猪胃100g

绞碎猪血块100g

浓盐酸10mL

1洗涤猪胃,除去油脂,保留胃粘膜,用绞肉机绞碎.

2用绞肉机将猪血块绞碎.

3将蒸馏水加热至55℃,加入猪胃,猪血块和盐酸,置55℃水浴中24h,时常加以摇动.

4从水浴内取出,加入1moL/L碳酸钠溶液5mL,煮沸10min,置于冰箱内一夜.

5吸取上层清液,加磷酸氢二钾1g,加热至75℃,加入1mol/L碳酸钠溶液45mL,煮沸,校正pH7.2～7.4.

6用滤纸过滤,分装烧瓶,121℃高压灭菌20min.

牛心消化汤（PH7.4～7.6）1000mL

黄豆粉浸液50mL

将琼脂加在牛心消化汤内,加热溶解,过滤.加入豌豆粉浸液,分装每瓶100mL,121℃高压灭菌15min.

豌豆粉浸液制法:

取豌豆粉5g,氯化钠10g,加入蒸馏水100mL.置100℃水浴内加热1h,放于冰箱中过夜.吸取上清液即为豌豆浸液.

pH7.4～7.6豆粉琼脂100mL

脱纤维羊血（或兔血）5～10mL

加热溶化琼脂,冷至50℃,以灭菌手续加入脱纤维羊血,摇匀,倾注平板.亦可分装灭菌试管,置成斜面.亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂.

牛肉膏3g

琼脂15～20g

将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内,加入15%氢氧化钠溶液约2mL,校正pH至7.2～7.4.加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化.分装烧瓶,121℃高压灭菌15min.

此培养基可供一般细菌培养之用,可倾注平板或制成斜面.如用于菌落计数,琼脂量为1.5%;

如作成平板或斜面,则应为2%.

蛋白陈10g

按上述成分混合,溶解后校正pH,分装烧瓶,每瓶225mL,121℃高压灭菌15min.

蛋白胨20g

猪胆盐（或牛,羊胆盐）5g

乳糖10g

0.04%滇甲酚紫水溶液25mL

将蛋白胨,胆盐及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,分装每管10mL,并放入一个小倒管,115℃高压灭菌15min.

双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍.

0.04%溴甲酚紫水溶液25mL

将蛋白胨及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,按检验要求分装30mL,10mL或3mL,并放入一个小倒管,115℃高压灭菌15min.

①双料乳糖发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍.

②30mL和10mL乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用,3mL乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用.

胰蛋白胨20g

3号胆盐（或混合胆盐）1.5g

乳糖5g

磷酸氢二钾4g

磷酸二氢钾1.5g

将上述成分混合,溶解后,分装有发酵倒管的试管中,121℃高压灭菌15min,最终pH为6.9±

0.2.

12H2O）9g

按上述成分配好后以大烧瓶装,121℃高压灭菌15min.临用时无菌分装每瓶225mL.

本培养基供沙门氏菌前增菌用.

37氯化镁孔雀绿增菌液（MM）

甲液

胰蛋白胨5g

氯化钠8g

磷酸二氢钾1.6g

乙液

氯化镁（化学纯）40g

蒸馏水100mL

4.13.3丙液

0.4%孔雀绿水溶液.

分别按上述成分配好后,121℃高压灭菌15min备用.临用时取甲液90mL,乙液9mL,丙液0.9mL,以无菌操作混合即可.

本培养基亦称Rappaport10（R10）增菌液.

38四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）

基础培养基

多胨或眎胨5g

胆盐1g

碳酸钙10g

硫代硫酸钠30g

碘溶液

碘6g

碘化钾5g

蒸馏水20mL

将基础培养基的各成分加入蒸馏水中,加热溶解,分装每瓶100mL.分装时应随时振摇,使其中的碳酸钙混匀.121℃高压灭菌15min备用.临用时每100mL基础培养基中加入碘溶液2mL,0.1%煌绿溶液1mL.

39四硫磺酸钠煌绿增菌液（换用方法）

基础液:

碳酸钙45g

将各成分加入于蒸馏水中,加热至约70℃溶解,校正pH至7.0±

0.1,121℃高压灭菌20min.

硫代硫酸钠溶液

硫代硫酸钠（Na2S2O3·

5H2O）5