液相串联质谱检测方法前处理总结docdeflateWord文档格式.docx
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同时思想上也要求比较活跃,接受新事物比较快,爱学习、爱思考、爱出点子,工作中注意发挥主观能动性,超前意识强,这有利于开拓工作新局面。
其他的如办事稳妥,处世严谨,在廉洁自律信奉诚实、正派的做人宗旨,能够与人团结共事,而且具有良好的协调能力上更应该严格的要求自己,这是做好一切工作的保证,也是新人能够更快地进入质检员角色,开展工作的前提和保障。
实习期间这些方面的要求都有所提高,可谓受益匪浅。
前处理总结
第一部分瘦肉精的检测
一尿样
1试剂:
乙腈(色谱纯)、乙腈水(10+90)(所用水为超纯水)
2器材:
50ml离心管、移液枪(200ul、1ml、10ml)、冷冻离心机、超声波清洗器、旋转蒸发仪、迷你震荡器、25ml蒸馏瓶、1ml针管、0.22um有机滤膜。
3实验步骤:
吸2ml尿样于2ml离心管中备用→从尿样中吸取500ul于50ml离心管中→加10ml乙腈→涡旋→离心(6000r/min、5min)→上清液转移入25ml蒸馏瓶中40℃水浴减压蒸干→加2ml乙腈水(10+90)定容后超声溶解→1ml针管吸取0.6-0.7ml用0.22um有机滤膜过滤→上机。
4理解要点:
1):
样品稀释倍数为4
2):
加入乙腈提取之前需要加入标100ul(10ng/ml),目的是看回收率。
二瘦肉精国标法
1试剂:
0.03mol/L盐酸溶液、甲醇、甲醇氨水(95+5)、氨水乙酸乙酯(3+97)、乙腈水(10+90)、0.2mol/L乙酸钠溶液(称取16.4g溶于1L水中,用冰醋酸调节PH值至5.20)、β-盐酸葡萄糖醛甙酶-芳基硫酸酯酶、同位素标、标准品。
2器材:
电子天平、50ml离心管、10ml离心管、移液枪(200ul、1ml、10ml)、冷冻离心机、超声波清洗器、旋转蒸发仪、迷你震荡器(平行振荡器)、25ml蒸馏瓶、MCX固相萃取柱、固相萃取装置、1ml针管、0.22um有机滤膜。
3实验步骤:
1)称取样品2.00g(±
0.02g)→加标100ul(10ng/ml)→加10ml乙酸钠→加200ulβ-盐酸葡萄糖醛甙酶-芳基硫酸酯酶→涡旋→超声15min→37℃恒温孵育16小时→离心(6000r/min、5min)→上清液倒入离心管A中→下层残渣再加入10ml乙酸钠重复涡旋、超声、离心步骤,上清液合并入离心管A中→过滤上清液于另一离心管中→吸取10ml滤液过MCX固相萃取柱
2)过柱子顺序:
加甲醇1管→加蒸馏水1管→加0.03mol/L盐酸溶液1管→加10ml样夜→加蒸馏水1管→加甲醇1管→减压抽干→加5ml甲醇氨水(95+5)和5ml氨水乙酸乙酯(3+97)→减压收集于10ml离心管→转移入25ml蒸馏瓶中40℃水浴减压蒸干→加1ml乙腈水(10+90)定容后超声溶解→1ml针管吸取0.6-0.7ml用0.22um有机滤膜过滤→上机。
3)要点与理解;
①每个加入标100ul(10ng/ml)的目的是看回收率,选取样品加标品100ul(10ng/ml)也是看回收率。
②加酶是为了更好地提取莱克多巴胺。
③乙酸钠调PH值至5.20时,提取效果最好,用冰乙酸调PH值,可避免引入其他杂质离子。
用10ml样液过柱子,1ml乙腈水定容为了和质量相约分,直接出结果,减少换算麻烦。
④过柱子是用0.03mol/L盐酸溶液是提供一个酸性环境,使其更好地吸附克伦特罗。
⑤先加甲醇是为了活化萃取柱,最后再加甲醇是洗脱杂质。
甲醇氨水(95+5)和氨水乙酸乙酯(3+97)的作用是洗脱有效成分。
三瘦肉精反向萃取法(对于骨汤、肉馅等含油比较高的样品)
10%碳酸钠溶液(m/v)、乙酸乙酯,2%甲酸乙腈水、2%甲酸乙腈水饱和正己烷。
电子天平、50ml离心管、移液枪(200ul、1ml、10ml)、冷冻离心机、超声波清洗器、旋转蒸发仪、迷你震荡器(平行振荡器)、50ml蒸馏瓶、1ml针管、0.22um有机滤膜。
称取样品2.00g(±
0.02g)→加标100ul(10ng/ml)→加2ml10%碳酸钠溶液→涡旋→加8ml乙酸乙酯涡旋震荡2min→超声提取10min→离心(6000r/min、5min)→吸取上清液于50ml蒸馏瓶中→下层残渣再加入6ml乙酸乙酯提取一次,合并上清液于50ml蒸馏瓶中→40℃水浴减压蒸干→加2%甲酸乙腈水饱和正己烷(肉馅加5ml,骨汤、香精加10ml),和2ml2%的甲酸乙腈水→超声溶解→转移入50ml离心管中→离心(6000r/min、5min)→1ml针管吸取下层溶液约1ml用0.22um有机滤膜过滤→上机。
4要点与理解:
1)加碳酸钠溶液是提供一个碱性环境,便于乙酸乙酯提取。
每个加入标100ul(10ng/ml)的目的是看回收率,选取样品加标品100ul(10ng/ml)也是看回收率。
2)用饱和正己烷,是为了除去油性杂质。
用2%甲酸乙腈水去饱和正己烷是为了和定容试剂保持一致,避免引入其他杂质离子。
定容试剂中加入2%甲酸是为了提供一个酸性环境,便于提取克伦特罗,同时和上机流动相保持一致。
3)对于复检样品,超声提取时间可以适当延长。
4)此方法还可以把两次提取液合并于离心管中,分两次加5ml盐酸溶液(0.1mol/L)涡旋离心提取两次,吸出盐酸层,合并盐酸提取液,用100g/L氢氧化钠调节PH值至5.20,过MCX固相萃取柱,然后减压蒸干定容的方法。
β-受体激动剂的检测
根据国标GB/T22286-2008不加酶法
样品:
猪肝
编号:
-1,-2,-1,-1,+1,+2
一、前处理:
①取六个50mL离心管,依次按顺序编上号,分别称取样品2g(±
0.02g),
②分别加入标100μL(10ng/mL),根据编号加100μL外标(10ng/mL)然后分别加8mL无水乙酸钠(PH=5.2),混匀充分提取,涡旋10min,离心(6000r,10min),
③取上清液4mL于离心管A中,加5mL0.1mol/L的高氯酸溶液涡旋混匀,用高氯酸调到PH=1(±
0.2大概加用1mL针管加12滴左右),混匀,离心(6000r,10min),上清液转移到离心管B中,用400g/L(10mol/L)的氢氧化钠溶液调到PH=11(±
0.2).
④加入10mL饱和氯化钠和10mL异丙醇-乙酸乙酯(6+4),充分提取涡旋15min,离心(6000r,10min),上清液转移入离心管C中,40℃水浴氮吹至干,加入10mL无水乙酸钠溶液,涡旋超声溶解,备用。
二、过MCX柱子顺序
甲醇1管→水1管→2%甲酸水1管→样液10mL→水1管→2%甲酸水1管→甲醇1管→加压抽干
用5mL5%氨水甲醇溶液洗脱柱子,洗脱液转移到25mL蒸馏瓶中,可在收集管中加入1mL5%氨水甲醇溶沿管壁缓缓冲洗加入,该液也转移到对应蒸馏瓶中。
注意:
过柱子时为不完全通液,过样和洗脱时应控制流速大概2-3秒1滴,洗脱时最好先用洗脱液浸润30s到1min.
三、蒸干浓缩定容
在旋转蒸发仪上40℃水浴蒸干,冷凝水10℃以下,在蒸馏瓶中加入1mL2%甲酸乙腈水,超声溶解1-2min,尽可能最大的把侧壁也超声一下,用1mL针管吸取过0.22μm有机滤膜于进样小瓶中,待上机检测。
第二部分硝基呋喃代物的检测
0.125mol/L盐酸溶液(量取10.6ml盐酸,定容至1000mL。
混匀。
)、0.1mol/L盐酸溶液、0.5mol/L磷酸氢二钾缓冲溶液、100g/L氢氧化钠溶液、甲醇、甲醇水(5+95)、乙腈水(10+90)、乙酸乙酯、水饱和正己烷,0.2mol/LTris试剂(称取14.228g三羟基氨基甲烷溶于1000mL水中)、衍生试剂(0.01g邻硝基苯甲醛溶于1.25ml二甲基亚砜)。
.
电子天平、50ml离心管、10ml离心管、移液枪(200ul、1ml、10ml)、冷冻离心机、超声波清洗器、旋转蒸发仪、迷你震荡器(平行振荡器)、50ml蒸馏瓶、25ml蒸馏瓶、Strata-X固相萃取柱、固相萃取装置、1ml针管、0.22um有机滤膜。
3实验步骤:
0.02g)→加20ml0.125mol/L盐酸→加200ul衍生试剂→涡旋→超声10min→37℃恒温避光衍生16小时。
2)取出反应后样品冷却至室温,加1ml0.5mol/L磷酸氢二钾缓冲溶液,用100g/L氢氧化钠调节PH值到7.0-7.5之间→加8ml乙酸乙酯涡旋震荡2min→离心(6000r/min、5min)→吸取上清液于50ml蒸馏瓶中→下层再加入6ml乙酸乙酯提取一次,合并上清液于50ml蒸馏瓶中→40℃水浴减压蒸干→加5ml水饱和正己烷和5mlTris试剂→超声溶解→转移入50ml离心管A中→再向蒸馏瓶中加5mlTris试剂→超声溶解→合并入50ml离心管A中→离心(6000r/min、5min)→取下层溶液于离心管B中过Strata-X固相萃取柱。
3)过柱子顺序:
加甲醇1管→加蒸馏水1管→加完全部样夜→加甲醇水1管→减压抽干→加1管半甲醇减压收集于10ml离心管中→移入25ml蒸馏瓶中→40℃水浴减压蒸干→加1ml乙腈水(10+90)定容后超声溶解→1ml针管吸取0.6-0.7ml用0.22um有机滤膜过滤→上机。
1)衍生试剂现配现用。
2)加1ml0.5mol/L磷酸氢二钾缓冲溶液,是为了方便调PH值。
用100g/L氢氧化钠调节PH值到7.0-7.5之间,是为了提供一个碱性环境,有利于乙酸乙酯的提取。
2)用水饱和正己烷是出去油性杂质。
3)收集时,用甲醇洗脱有效成分。
4)空白加标是为了在上机检测时建立标准曲线。
5)呋喃四种混标(呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因)100ng/mL加100ul。
第三部分沙星、磺胺类抗生素的检测
无水硫酸钠、乙腈、乙腈饱和正己烷、正丙醇、乙腈水(10+90)、乙腈水饱和正己烷。
电子天平、50ml离心管、移液枪(200ul、1ml、10ml)、均质器、冷冻离心机、超声波清洗器、旋转蒸发仪、迷你震荡器(平行振荡器)、50ml蒸馏瓶、1ml针管、0.22um有机滤膜。
0.02g)→加3g无水硫酸钠→加9ml乙腈用玻璃棒搅匀或用均质器均质→涡旋→离心(4000r/min、2min)→上清液转入另一离心管A中→下层再加入9ml乙腈如有结块用璃棒搅匀或用均质器均质→涡旋→离心(6000r/min、5min)上清液并入离心管A中。
在离心管A中加入5ml乙腈饱和正己烷→涡旋→离心(6000r/min、5min)→下层溶液转入50ml蒸馏瓶中→加2ml正丙醇→40℃水浴减压蒸干→蒸馏瓶中再加入5ml乙腈水饱和正己烷和2ml乙腈水(10+90)→超声溶解转入离心管B中→离心(6000r/min、5min)→1ml针管吸取下层溶液约1ml用0.22um有机滤膜过滤→上机。
4要点与理解
1)样品加入无水硫酸钠,是为了除去样品中多余的水分。
样品加入无水硫酸钠后,样品易结块不利于提取,要用玻璃棒捣碎或用均质器均质。
第一次离心可以降低转度、缩短离心时间,减轻样品结块程度。
2)加乙腈饱和正己烷和乙腈水饱和正己烷的目的是为了除去油性杂质。
3)加正丙醇的目的是防止溶液暴沸。
4)标品需要加沙星类混标(4种混标1ug/ml加20ul),磺胺类混标(24种混标1ug/ml加50ul)。
第四部分氯霉素的检测
无水硫酸钠、氨水乙酸乙酯(3+97)、超纯水、水饱和正己烷。
电子天平、50ml离心管、移液枪(200ul、1ml、10ml)、均质器、冷冻离心机、超声波清洗器、氮吹仪、迷你震荡器(平行振荡器)、1ml针管、0.22um有机滤膜。
0.02g)→加3g无水硫酸钠→加10ml氨水乙酸乙酯(3+97)用均质器均质→涡旋→离心(4000r/min、2min)→上清液转入另一离心管A中→下层用10ml氨水乙酸乙酯(3+97)→涡旋→超声10min→离心(6000r/min、5min)→上清液并入离心管A中→经氮吹仪吹干→加5ml水饱和正己烷和2ml超纯水→涡旋→超声5min→离心(6000r/min、5min)→1ml针管吸取下层溶液约1ml用0.22um有机滤膜过滤→上机
1)氯霉素容易被污染,处理样品时不要徒手操作,要带上手套。
不用洗洁精洗刷容器。
离心管专用。
2)样品加入无水硫酸钠,是为了除去样品中多余的水分。
3)第一次离心可以降低转度、缩短离心时间,减轻样品结块程度。
在第二次提取时可以延长超声时间使结块松动利于提取。
4)均质器均质以后,需要用另一个离心管装10ml氨水乙酸乙酯(3+97)来清洗均质器。
清洗后的洗液供二次提取用。
再用蒸馏水来清洗均质器两次,避免样品间的交叉污染。
5)需要做空白样品来检验检测过程是否被污染。
选择样品加标(10ng/L加100ul),来检测回收率。
6)用超纯水定容,是为了和上机流动相保持一致。
第五部分:
四环素的检测
甲醇、甲醇水(5+95)、乙腈水(10+90)、乙酸乙酯、水饱和正己烷、乙腈水(10+90)、OTC萃取剂(柠檬酸12.93g、磷酸氢二钠27.55g、乙二胺四乙酸二钠37.23g三种试剂混合溶于水,定容至1L)
电子天平、50ml离心管、10ml离心管、移液枪(200ul、1ml、10ml)、冷冻离心机、超声波清洗器、旋转蒸发仪、迷你震荡器(平行振荡器)、25ml蒸馏瓶、Strata-X固相萃取柱、固相萃取装置、1ml针管、0.22um有机滤膜。
1)称取样品2.00g(±
0.02g)→加10mlOTC萃取剂→涡旋→离心(6000r/min、5min)→上清液转入另一离心管A中→下层再加入10mlOTC萃取剂→涡旋→离心(6000r/min、5min)上清液并入离心管A中。
2)在离心管A中加入5ml水饱和正己烷→涡旋→离心(6000r/min、5min)去下层10ml过Strata-X固相萃取柱。
加甲醇1管→加蒸馏水1管→加完全部样夜→加甲醇水1管→减压抽干→加2管乙酸乙酯减压收集于10ml离心管中→移入25ml蒸馏瓶中→40℃水浴以下减压蒸干→加1ml乙腈水(10+90)定容后超声溶解→1ml针管吸取0.6-0.7ml用0.22um有机滤膜过滤→上机。
1)40℃水浴以下减压蒸干,防止对四环素的破坏。
2)乙酸乙酯洗脱有效成分。
3)标品1ug/ml加100ul(包括土霉素、金霉素、四环素、强力霉素)。
经过实习我充分认识到了自己的不足,而且做实验动手能力更是有待加强,以后做实验要认真仔细,善于发现问题和思考问题及总结,使自己的检验水平更上一层楼,也感老师对我的培养。
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