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:
:
;
.,本文所用主要缩写词
完伞缓解
部分缓解
保留时间
比移值
阿霉素
顺氯氨铂
环磷酰胺
相对标准偏差
氓隙肌盯删潴四脚
催吐化学感受器
紫外分光光度法
红外分光光度法
核磁共振
质谱
薄层色谱
高效液相色谱
气相色谱
高效毛细管电泳
高效逆流色谱
蒸发光检测器
二极管阵列检测器
聚合酶链式反应
生产质量管理规范
豫胍四∽四愀眦啪眦四四
药品安全性实验规范Ⅱ
前言
全世界肿瘤发病率居高不,每年新发病人约为万人,中困每年新发病人
则为万人。
肿瘤治疗的重要手段化疗与放疗【,都可引起强烈的恶心呕吐,
不仅影响肿瘤患者的食欲和消化,还可引起机体电解质和酸碱平衡紊乱而衰竭,
且一般的抗呕吐药难以奏效,严重影响治疗并降低病人的生命质量,因此如何解决
恶心呕吐这一毒性反应为世界各国所关注。
目『研究表明呕吐是涉及外周与中枢神经系统的一种防御性反应【】。
许多因素
可引起恶心、呕吐,如迷路刺激【】,外科手术后,内脏器官疼痛等。
它涉及呕吐
中枢和催吐化学感受器以及外周化学感受器如前庭系统、口囡和胃肠道、高级脑十及
皮层结构。
目前已知具有抗呕吐效果药物有多种,常用的有一受体阻断药如恩丹西
酮,格拉斯琼等及胃肠动力促进药如甲氧氯普安,吗丁林等,其它还有抗胆碱
药,抗组胺药等;
中药主要有大麻类化合物。
但它们具有副作用大,安全性筹、价
格昂贵等特点,冈此,寻找并丌发天然的集止呕和抗肿瘤活性于一体的植物药将会
有着广阔而美好的前景。
中药半夏系天南星科半夏属.的干燥块茎,味辛,
性温有小毒,归胃辟、肺经,具有降逆止呕、燥湿化痰、消痞散结等功效。
出于
生半夏有一定毒性,其毒性归纳为刺激咽喉、叶、泻等方面,临床上多以炮制品入
药,姜半夏作为半夏的一个炮制品,在临床应用非常广泛。
其常用方刺小半夏汤,
小半夏加茯苓汤,半夏厚朴汤,半夏泻心汤等屡见有关卜呕、调节胃肠功能等方面
的报道,但汤剂具有液体量大,病人服用困难的缺点。
半夏药理作用已证实具有抗
肿瘤、抗呕吐、镇咳祛痰等,生物碱是其主要药理活性成分。
本文制备半夏口服液,
并制定其质量标准,以生物碱含景控制其质量,并进行了其在临床的药理作用的观
察,同时以水溶性成分鸟苷和脂溶性成分麻黄碱为标准品,对半夏的指纹图谱进行
初步研究,以将来对半夏在人体的药代动力学进行研究。
旨在利用我国丰富资源,
丌发一种具有抗呕叶及抗肿瘤双重作用的天然新药。
本课题为生部、山爪竹生力:
和青岛市一
资助项青岛人学硕十学位论文
主要研究内容
、,夏服液的制备
.制备工艺
.质量标准
半夏口服液的临床药理作用
半夏指纹图谱研究
材料
试剂与药品
盐酸麻黄碱对照品批号:
精氨酸对照品批号:
亮氨酸对照品批号:
缬氨酸对照品批号:
.
丙氨酸对照品批号:
以上对照品均购自中国药品生物制品检定所。
柠檬酸.柠檬酸钠缓冲液.
氯仿、浓硫酸、浓氨溶液、茚三酮、正丁醇等为分析纯
甲醇、冰醋酸、乙二胺等为色谱纯
购白中圜科学院上海乍
呜苷.?
物化学研究所。
硅胶青岛海洋化厂,溥层色谱用
山东潍坊产姜半夏、四川万县,“生半夏、四川力县产姜半夏
.,由东中医药大学景振教授鉴定为灭南星科植物半夏
..的干燥块茎:
四川万县产水半夏鉴定为天南星科植物鞭檐犁头尖
.的块茎。
以上各种半夏均购出青岛市药
材站。
方法
仪器
一型可见一紫外分光光度计北京第二光学仪器厂
高效液相色谱仪公司
检测器迪马公司
分析大平上海天平仪器厂
恒温水浴锅上海医疗器械五厂
半夏口服液的制备
.处方:
半夏
.制法:
将半夏以倍苣水浸泡,加热煎煮提取次,第一次.,第二:
次
过滤,合并滤液,将滤液浓缩至一定体积,用%醇调整至含醇量达%,
静置后过滤,取上清液,回收乙醇至无醇味,用纯化水调整体积至,分
装支,灭菌,即得。
性状:
本品为浅棕红色澄清液体,性温,味微辛。
.鉴别
麻黄碱的鉴别:
取半夏口服液,加氨试液调整为,用氯仿萃取
次,,,取氯仿层,蒸干,残渣加甲醇充分振摇,滤过,将
滤液浓缩至约作为供试品溶液;
另取盐酸麻黄碱对照品加甲醇制成每含
的溶液作为对照品溶液,吸取上述两种溶液各,分别点于同一硅胶薄层
板上,以氯仿一甲醇.浓氨试液:
.为展丌荆,展盯,取出,晾干,喷以茚
三酮试液,在℃加热至斑点疑色清晰,在供试品色谱中与对照品色谱相同的位
置上显相同颜色的斑点。
半夏的鉴别:
取半夏口服液,在水浴上蒸干,加甲醇溶解,过滤,
将滤液挥虿约作为供试品溶液:
另墩精氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸对照品
%甲醇制成每各含的浞合溶液作为对照品溶液,照薄层色谱沤试验,吸
取供试品溶液,对照品溶液“,分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合荆的砖胶
’青岛人学硕学位论文
薄层板上,以『丁醇.冰醋酸.水:
为展开剂,展丌,取出,晾干,喷以
茚三酮试液,在:
加热至斑点显色清晰,供试品色谱中在与对照品色谱中相同
的位置上显相同颜色的斑点。
.生物碱含量测定
..对照品溶液的制各
精密称取在干燥至恒蕈的盐酸麻黄碱.,置于容量瓶中,加
蒸馏水溶解并定容,摇匀,得含盐酸麻黄碱浓度为./的溶液。
..标准曲线的绘制
精密量取上述对照品溶液.,.,.,.,.,分置于分液漏斗中,
蒸馏水至.,加入
.的柠檬酸.柠檬酸钠缓冲液,再加.%溴
麝香草酚蓝溶液,加入氯仿,振摇,放置.,分取氯仿层,定容于
容量瓶中,以氯仿为空白对照,在波长处测定吸光值,以浓度为横坐
标,及光值为纵坐标,求回归方程。
..样品供试品的制各与测定
精密取半夏口服液.,胃容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度,精密
取稀释液.加氨水.~.调为,以氯仿萃取次,,
合并氯仿萃取液,在。
热水浴减压回收氯仿至干,用.氯仿溶解,依
次加入.的柠檬酸一柠檬酸钠缓冲液和溴麝香草酚蓝溶液,振摇后静
置,取氯仿层至容量瓶定容,以氯仿为空门,在处测定吸光值,由
回归方程得出浓度。
..精密度实验
同一份供试品溶液,按..项下操作,重复测定次吸光度。
..重现性实验
取同一批样品份,按..项下操作,测定吸光度。
..加样回收实验
在已知浓度的本品溶液中,精密加入一定量的盐酸麻黄碱对照品,按..项下
操作,测定吸光度。
.检查值为~.,其他避符合口服液项下的有关规定。
.功能与主治降逆止呕,消痞散结。
用于治疗和预防肿瘤放疗或放疗引起的恶
心、呕吐。
.用法与用量口服,每两次,每次支
.规格每支含生药量为?
‘
半夏臣液临床药理作用
.病例选择恶性肿瘤患者例,男例,女例。
年龄在~岁,平均
年龄岁。
临床分期期例,期例,Ⅳ期例,所有病例均经过病理或
脱落细胞检查以及线、等确诊。
其中包括肺癌例,食管癌例,乳腺癌
例,胃癌例,肠癌例,非何杰会氏淋巴瘤例。
.分组在例肿瘤患者中有例为放疗患者,随机分为放疗加半夏组
组和放疗对照组组;
由例为化疗患者,随机分为化疗加半夏组组
和化疗对照组组。
各组问的年龄、性别、病种分布情况经统计无显著性差异。
其中组例,组例,给予?
线常规分割放射治疗,照射部位在胸或
腹部,≥/。
组例,组例,给予静脉全身化疗,化疗方案中所
用药物至少含有列一:
项。
二,//次。
//。
//次。
以上均为联合用药。
各组均排除有脑转移,肠梗阻等情况者。
.止呕方案组及组均在治疗前天开始给予半夏口服液,口服,一同
次,至化疗后天停给药;
组不给予任何止呕药;
及纽均在当日化疗前
给予恩月‘西酮,静脉滴注,于化疗结束后三天停止给药。
同时观察记录
患者用药前后的血常规和肝肾功能指标情况。
.观察时间及观察指标于放化疗期恻及停药后天,每闩观察记录。
采用
年欧洲临床肿瘤会议推荐的标准进行观察及疗效评价。
恶心度:
无恶
心;
度:
轻度恶心,但不影响进食和日常生活;
恶心,影响进食及常生
活;
因恶心而卧床。
呕吐度:
无呕吐;
呕吐?
次,同:
次/;
呕吐超过次/同。
.疗效评价标准完全缓解:
恶心呕叶均为度;
部分缓解:
恶心
.度,呕吐度;
轻度缓解:
恶?
度,眍吐度;
无效:
恶一,畎
止度。
完伞缓解率%例数本组例数;
部分缓解率%例数本
组例数;
总有效率%完仝缓解率%部分缓解率%。
青岛人学硕学位论文
在大部分化学成分尚不清楚的情况下间接测定总成分含量还不能真诈反映原药
材和道地药材质量的稳定,特别是中药材。
本文在对半夏成分和提取工艺的基础上,
选择两种溶剂系统,以水溶性成分鸟苷和脂溶性成分麻黄碱作为对照品,选用山东
产姜半夏、四川产姜半夏、生半夏以及半夏伪品水半夏,用法对半夏的指纹
图谱进行初步研究。
这不仅有助于半夏药材的标准化种植及半夏道地药材的质量控
制,还为将来进行半夏的药动学研究打下基础。
.色谱条件
测定水提取物色谱条件色谱桔:
柱,.×
流动相:
甲醇
.水一冰乙酸:
.:
流速:
./;
检测波长:
柱温:
。
进样量:
。
测定醇提取物色谱条件色谱柱:
柱
.:
取
乙二胺.加水至,加甲醇,用醋酸调.约滴;
.?
’。
进样虽;
.对照品溶液的制备
鸟苷对照品精密称定在。
干燥的鸟昔标准品.,放入容量瓶中,
加水溶解,定容,配成浓度为.。
的对照品溶液。
麻黄碱对照品精密称定在。
干燥的麻黄碱标准品.,放入
容量瓶中,力¨
甲醇溶解,定容,配制成浓度为.?
.供试液的制备
用于水提取物色谱贾测定的供试液制各将干燥的过目筛的半夏粉木放
入磨口三角瓶中,加水,超声提取,以/离心,取
上清液:
钱渣加水,超声提取,离心,合并上清液。
水浴浓缩定容丁
容量瓶中,每次进样
用于薛提取物色谱圈测定的供试液制备将干燥的过目筛的半夏粉末放
于圆底烧瓶中,加%的乙醇含%回流提取次,,冷却用.
微孔滤膜过滤,定容于容量瓶中,每次进样
.精密度实验取供试品溶液,连续测定次,每次进样,比较其保留时问
和峰面积。
比较其保留时
.重现性实验取分供试品,按测定方法测定,每次进样
结果
州和峰面积。
统计学处理
实验数据均用表示,用.统计软件包统计,两组间比较用检验
检验水准.。
结果
半夏口服液性质稳定,鉴别乃’法专属性强,灵敏度高,重现性好。
用酸性染料
比色法进行生物碱含量测定方法稳定,结果准确,可作为本制剂的质量控制方法。
取批样品按质量标准进行检查,均符合规定。
结果如下:
.鉴别检查批样品,照鉴别项下操作,均出现阳性结果,在与对照品色谱相同
的位置上出现相同颜色的斑点。
结果如下所示。
.麻黄碱鉴别
结果址图.
图.麻黄碱薄层色谱图
.麻黄碱对照品;
.样品
样品与刘照品在相同的位置显紫红色斑点
青岛人学硕斗:
学何论文
..半夏药材鉴剐
结果见图.
图半夏薄层色谱图
.阳性对照品;
样品与对照品在色谱图相对应的位置显相同的紫红色斑点,
按值由小到大依次为:
精氨酸、亮氨酸、『天氨酸、缬氨酸
盐酸麻黄碱标准品与吸收度对应关系,结果见衷.。
表¨
盐酸麻黄碱浓度与吸光度对应表
以浓度为横坐标,吸光值为纵坐标,求得回归方程为:
.,
.,说明赫酸麻黄碱在.~
范围内与吸光值呈良好的线性关系。
取批样品各,依法制成供试品溶液,分别测定其生物碱含量,结果见
表.。
表.样品测定结果
结果测定生物碱平均含量为.?
~,.。
由于不同产地的半
夏质量不同,有效成分差异很大,所以制定半夏口服液质量标准生物碱含量不低于
.加样回收实验
结果见表.。
表.加样回收实验结果
编号样品含有量加入量实测值回收率平均回收率
%
%%曲
....
.....土..
结果其平均加样回收率为.%,.,表明该实验方法可行。
精密
度实验测定结果,其.%:
表明本实验使用的测定仪器精确;
重现性
试验结果其.%,表明方法可行。
半夏口服液临床药理作用观察
肿瘤患者用药后疗效确切,放疗两组恶心、呕吐发生率明显低于化疗两组,
化疗岛半夏组完全缓解率虽然较放疗两组低,但总有效率与放疗两组接近。
肿瘤患
者用药前后常规、肝肾功能均正常,且无显著性变化。
青岛人学硕士学桡论文
.肿瘤患者放化疗发生恶心呕吐情况
表.肿瘤患者放化疗发生恶心呕吐的情况
放疗、夏几服液组:
单纯放疗组
化疗恩丹曲酮、夏口服液组
化疗十恩丹阳酮对照组
.半夏口服液对肿瘤患者所致呕吐的疗效评价
表.半夏服液对肿瘤患者所致呕吐的疗效评价
、、、组分组情况同表
组率为.%,组率为.%,两组删完全缓解率有明显差异
但两组部分缓解率分别为.%和.%,差异小显著.。
组牢为.%,组率为.%,两组问完全缓解率差异显著.,
两组问部分缓解率分别为.%和.%,差异不显著.,各组、日总有效
率分别为.%、.%、.%和.%,存在明显差异.。
放疗两绀
恶心、呕吐发生率明显低于化疗两组,化疗加半夏组完全缓解牢虽然较放疗两组低,
但总有效率与单纯放疗组柏近。
毒副作用方面,治疗过程中化疗对照组个别病人出现腹;
不适,便秘等情况,
无严覃不良反应发牛。
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图.麻黄碱对照品色谱图
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图.弓苷对照品色谱图
青岛人学硕十学位论文
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图.水半夏水提取物色谱图
各种半夏在相同条件下制备的供试品,四川产生半夏、姜半夏以及山东产姜半
夏在与对照品相同的位首上有明显的鸟苷吸收峰,水半夏也有鸟苷吸收峰,但吸收
较弱,各种半夏鸟苷吸收峰参数见表.。
在四川产生半夏、姜半夏以及山东产姜半
夏吗甘色谱图中,住存.、.、.均有明显的吸收峰,而水半夏则没
有。
这三个峰可以作为半夏水提取物的指纹图谱。
青岛人学硕十学俯论文
表.各种半夏鸟苷吸收峰相关参数
从表.町以看出,山东产姜半夏的鸟苷含量很高,高于四川产生半夏的含罱,
根据呜苷的含量与半夏药材的等级有关,半夏药材等级高者,其鸟苷豹含量也商,
凶此山东半夏、四川半夏都可作为优质半夏。
精密度实验测定结果色谱峰的保留时间和峰面积的分别为.%和
.%,说明仪器的精密度良好;
重现性实验结果色谱峰的保留时问和峰面积的
分别为.%和.%,说明重现性好。
讨论
讨论
半夏为天南星科植物三叶半夏..
的干燥块茎。
最早收载《神农本革经》,列为下品。
味辛,性温有小毒,归胃、胂、
肺经,其功能为降逆止呕、燥湿化痰,消痞散结等,即现代药理所指的止呕、抗肿
瘤等作用,主治呕吐反胃、痰多咳喘、痰饮眩悸、风痰眩晕、头晕不眠、痰厥头痛、
胸脘痞痛、梅核气,牛用外治痈肿痰咳。
关于半夏止呕的论著古籍有很多记载,
药性论说:
“消痰涎,开胃健脾,治呕叶,去胸中痰满,下肺气,主咳结。
新生者摩
涂臃肿不消,能除瘸瘿,气虚而有痰气,加而用之。
”华子本草记载:
“治吐食反
胃,霍乱转筋,肠腹冷,痰疟。
”可见半夏被历代医家公认为止呕圣药。
其常用方剂
小半夏汤、小半夏加茯苓汤、半夏厚朴汤、半夏泻心汤等屡见止呕、调节胃肠功能
等方而的报道。
由于半夏有毒,自有“生令人吐,熟令人下”的说法【,不同炮制方法药性迥
然不同,其中清半夏主要用于丌结,其炮制方法为取净半夏,大小分月:
用%白
矾溶液浸泡全内无一心、口尝微有麻舌感,取出,洗净,干燥;
京半夏主要用于因
湿化热而成稠痰,其炮制方法为取生半夏,加适量水浸泡数?
用%的明矾水浸
泡数,将浸泡好的半夏洗净、晾十水分,放入缸内,再加入甘草石灰水浸泡数闩,
直至表面呈桔黄色,内无白心,取出沈净,晾十水分,迅速烘干;
法半夏主要燥湿
化痰,其炮制方法为取净半夏,大小分丌,用水浸泡至内无白心,取出。
另取甘草
适量,加水煎煮次。
合并煎液。
倒入适量水制成的石灰液中,搅匀,加入上述已
浸透的半夏,浸泡,每天搅拌.次,并保持浸液以上,仝剖面黄色均匀,
口尝无麻舌感时,取出,洗净,干燥;
半夏曲主要用于和胃;
姜半夏要用于降逆
』呕,其炮制方法为取净半夏,大小分开,用水浸泡至内无白心,另取生姜切片煎
汤,加白矾与半夏共煮透,取出,沈净,干燥。
故半夏具有和胃降逆化痰散结之功
效,在临床应用非常广泛。
现代药理研究发现,半夏含有成分复杂,主要含有乍物碱、多糖、一谷醇、
氨皋酸、挥发油、半夏蛋白及无机元素等多种成分有关半夏各种成分的测,定
也有很多报道。
王锐等】驯用气桐色谱法测定了半夏中所含挥发油的情况。
结果鉴定
了其中个化学结构,占总色谱峰面积的.%。
其中‘些得率较高的物质具有
生理活性,如茴香腑,可促进骨髓中中性粒细胞成熟提『向周喇血液释放,适用于
冈肿瘤化疗或放疗引起的白细胞减少以及其他原凶所致的白细胞减少。
青岛大学硕士学能论文
何凌爿等采用薄层扫描法测定不同地区半夏药材琥珀酸的含量,结果各产区
存在很大差异,以山西药材产黾最高约为.%,湖南产含量最低约为
.%,平均含量为.%,占半夏药材总游离有机酸的.%。
琥珀酸作为半
夏药材总游离有机酸部位的主要成分,具有止咳、平喘的作用,且浚游离酸具有较
好的水溶性,也可能是半夏药材总游离有机酸主要的止咳成分。
薛建海等”用氨基酸自动分析仪测定了半夏药材中氨基酸的含量,测定出
种氨基酸的含晕,氨基酸分析结果表明,半夏及其炮制品中氨基酸含量很高,总氨
基酸含量分别为:
姜半夏为.%;
清半夏为.%;
尘半夏为.%;
法半
夏为.%。
吴皓【等采反相高效液相色谱法比较“正交法”和药典法两种炮制工艺的姜
半夏中水溶性成分鸟苷的含量。
结果表明半夏各炮制品的鸟苷含量以生半夏为最高,
“正交法”姜半夏和药典法姜半夏含量相近,姜煮半夏、姜浸半夏、清半夏中鸟苷
含量则有大幅度下降。
其含量顺序为生半夏药典法讵交法清半夏姜煮半夏
姜浸半夏。
张科卫等【对不同广区半夏种鸟苷含量测定结果表明:
山西产半夏含
量高,河南产半夏含量最低,这可能与各产地半夏的生长环境和半夏药材产地加。
】:
方法有关。
试验还发现鸟苷的含量与半夏药材的等级有关,半夏药材等级高者,其
鸟苷的含量也高。
鸟苷本身性质稳定,水溶性好,一般条件不易破坏,可以将鸟苷
含量作为生半夏药材中的水溶性检测指标,根据实验结果计算,生半夏药材中鸟苷
的含量的限量不应低一:
.%。
吴皓等用薄层扫描法对半夏各炮制品中一谷醇含量进行测定,结果表明,
各炮制品中.谷醇含量以生半夏为最高.%.而以姜煮半夏为最低.%,
个炮制品的含量依次为生半夏姜浸半夏矾半夏姜矾半夏姜煮半夏。
说明
加热对.谷醇的含量影响较大。
关于半夏生物碱含量测定,文献已有多种方法的报道,如重量法?
蕈量法为
传统经典法,被广为采用测定总碱含量,但该法误差较大,重现性差,据查阅资料
看,』该法测定总碱的报告虽多,但含量从.%~.%,相差近倍。
也有用酸
碱滴定法川:
杨乇琴等【】用高效液相法测定不同半夏炮制品中麻黄碱的含量,结果
牛半夏.%.法半夏.%,姜半夏.%,清半夏.%,京半夏.%。
用酸性染料比色法测定半夏中生物碱研究较多。
酸性染料比色法是利用在‘定
介质中,牛物碱与氢离子成盐,一些酸性染料在此条件下可,上述离予定量的结
合成有色的络合物向被某些有机溶剂定量的提取的原理,根据半夏生物碱中含有麻
黄碱,在实验中用盐酸麻黄碱作为参比物质,在.条件下,与溴麝香草酚蓝
定量显色,半夏中生物碱儿住此条件能与溴麝香草酚监显色的均口被测出,从而
求得相对生物碱含量,该法灵敏度高,重现性强,结果稳定,操作简单。
克服了晕
量法和滴定法均须经多次萃取易造成误筹导致重现性差的不足,以及在高效液相法
中因麻黄碱的吸收弱,给半夏中微量生物碱测定带来困难,而另需借助加入一种二
价镍的螫和剂/能测定的特殊条件。
于超等】用比色法对不同产地半夏中生物碱含
量进行了测定,结果以山东产地的品种含量最高,金川产地的品种含量最低,但总
体差别不是太大。
吴皓等【用比色法对半夏各种炮制品中生物碱含量进行测定,结
果种炮制品总碱古量顺序依次为姜矾半夏姜浸半夏生半夏矾半夏姜煮半
夏。
出现这种结果,可能是因为矾水呈酸性,浸泡半夏可能会与其中生物碱成盐而
随矾水流失;
姜煮可能因为单纯长时间加热导致半夏中部分生物碱分解或转化;
姜
矾半夏虽也经煮制,但可能因为矾的存在,生物碱成盐不易被热破坏;
姜浸半夏生
物碱含量高于生半夏,是因为浸泡使植物组织细胞中的某些生物碱扩散或游离更易
被提取。
半夏在临床应用多以复方为主,少有单用一味半夏,我们首次制备半夏口服液,
用于临床治疗肿瘤放、化疗引起的呕吐,建立半夏口服液的质量标准,参照药典,
建市了半夏药材和麻黄碱的色谱鉴别,鉴别方法专属性强。
因为生物碱是其主要活
性成分,垓文以生物碱含量来控制半夏口服液的质量,取得较好的效果。
我们依据
酸性染料比色法对半夏口服液中生物碱的含量进行控制,半夏产地不同,品种多样,
如四川南允和安徽古颖洲府现阜阳地区颖上县所产半夏为道地药材,不同产地
的同种半夏成分含量不同。
制定半夏口服液质量标准将生
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