高效液相色谱仪验证方案Word文档下载推荐.docx
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_r^u
N8U_n42
1.概述………………………………………………………………………………………………………3Q[bIkvr|
2.验证目的…………………………………………………………………………………………………3X'
5+)dj
3.验证依据及验证范围……………………………………………………………………………………3=@k3*#\
4.验证工作小组……………………………………………………………………………………………3a;
0$fRy
5.验证方案审批……………………………………………………………………………………………3(<
#NsW!
z
5.1验证方案起草……………………………………………………………………………………………3|y2cI,&
5.2验证方案会签……………………………………………………………………………………………3z(beTe
5.3验证方案批准……………………………………………………………………………………………3<
*&
2b
5.4验证方案实施……………………………………………………………………………………………3|y7#D9m
6.验证的准备………………………………………………………………………………………………3>
5-]Ur~
6.1文件资料的确认…………………………………………………………………………………………3ek4?
|!
kQD
6.2售后服务…………………………………………………………………………………………………4[+v}V,jb
6.3关键性仪表及消耗性备品备件…………………………………………………………………………4'
|N9xLm
6.4安装检查…………………………………………………………………………………………………41~P^g`
6.5计算机的安装情况检查………………………………………………………………………………4p!
[CH
6.6安装确认结论及批准……………………………………………………………………………………5BpKgUwf;
C
7.安装验证内容……………………………………………………………………………………………5Px))O&
w{
7.1评价设备性能、质量、适用性是否符合采购质量标准要求…………………………………………5Ka\%kB>
*`
7.1.1评价仪器的安装条件是否符合GMP及供应商提议的要求…………………………………………5hol54)7$3:
7.1.2起草标准操作规程……………………………………………………………………………………50oi=}lV
7.1.3仪器校正………………………………………………………………………………………………5V/G'
{q
7.2运行确认(也即功能试验)……………………………………………………………………………5AhARBgf<
7.2.1测试项目和认可标准…………………………………………………………………………………5dZ7+Iw;
m
7.2.2验证所需的材料………………………………………………………………………………………5"
oYyeT,?
7.2.2.1玻璃仪器设备………………………………………………………………………………………5<
Dw`Ur^X5
7.2.2.2试剂、标准溶液……………………………………………………………………………………5hb"
t8_--c
7.2.2.3其它辅助设备………………………………………………………………………………………5_h&
Ehp
7.2.3软件系统安全性确认(必要时)………………………………………………………………………5#s1O(rLRl
7.2.4运行确认的实施………………………………………………………………………………………6EW{z?
/
7.2.5运行确认评价及结论…………………………………………………………………………………73Bz0Ba
8.性能确认(适用性预试验)…………………………………………………………………………………74?
X#d)L(
9.拟订再验证项目及周期……………………………………………………………………………………8A:
1O:
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10.验证结论…………………………………………………………………………………………………8hq/\'
Z&
!
+P
1<
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OjQ
0yXUVKq3
1.概述Y2j>
lf?
8
高效液相色谱法(HighPerformanceLiquidChromatography,HPLC)是一种现代液相色谱法,其基本方法是用高压输液泵将流动相泵入到装有填充剂的色谱柱,注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后,各成分先后进入检测器,用记录仪或数据处理装置记录色谱图并进行数据处理,得到测定结果。
由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相,本法具有分离性能高、分析速度快的特点。
_Ywt_h;
:
高效液相色谱仪是根据质量控制的目的和要求,在调研的基础上,公司于年月购置的精密仪器,其生产厂为,主要用于样品的分析测试。
该仪器>
\8Bu#&
s4
为双泵型高效液相色谱仪,由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。
应用软件为,版本号。
<
dDGV>
n4;
2.验证目的3`J?
as@^8
按照GMP的要求,需要对该仪器进行安装确认、运行确认、性能确认,以确定目前的实验室环境能否满足该仪器的正常操作和使用,仪器是否具有良好的检测性能,能否满足验证可接受标准和我们日常分析测试工作的需要。
_$0<
]O$
3.验证范围及验证依据Wk'
KNo
3.1本方案适用于对理化室高效液相色谱仪的验证。
;
Mc\_>
i/
3.2本方案验证依据,$mnD@)
3.2.1JJG705-2002高效液相色谱仪检定规程u1ggLH!
U
3.2.2高效液相色谱仪操作规程wtetB'
)yD
4.验证工作小组y^pk)`y8
组长]P(:
姓名职务/职称部门(X,Ua+{_
2+TCFpv
成员8*H_-<
/=
tjBs>
w
4cRF3$amd
>
t)vQ&
;
u
5.验证方案审批=GL}\I
5.1验证方案起草Yewn
起草部门签名日期bvuoGG*
设备动力部年月日WM.JoQ
质管部年月日F^7qLvh
5.2验证方案会签}=z_3JfO
部门签名日期]|it&
4l
质管部年月日<
k<
K"
{
设备动力部年月日K#rfQ0QK/!
5.3验证方案批准_ui03veA1
批准人签名日期!
O6e,l
质量部部长年月日MGzeIrV
5.4验证方案实施g@wF2=
实施部门职责=F'
p#N0_2
设备动力部负责仪器的安装确认。
CF"
$&
+s9
质管部负责仪器的运行确认、性能的确认。
_OV\W'
RrA
6.验证的准备mkgGX|k;
6.1文件资料的确认Tlrr02>
B{
下列文件资料是否齐全,是否符合GMP要求Ay)q%:
qx
序号文件/资料编号存放地<
X[TjP
1设备采购定单Y.`{]rC
2原版操作说明书安装手册和维修手册(如必要)lOIBX@KE
3仪器操作规程SOPr~cmrLQa
4仪器使用、维修记录1d/-SxhZ
5中华人民共和国国家计量检定规程JJG705-2002&
_v!
=\Fig4
6仪器档案(如必要)f[,9WkC_
7中国药典(2005版)附录_A?
"
(5da.
8标准物质证书'
[#a-8-JY_
9验证方案36>
pa
结论:
rkhQoYZ[
检查人检查日期34VyRa
复核人复核日期{zoUU
6.2售后服务rQiX7
维修单位:
联系电话:
gyH'
92ck
地址:
传真:
}QRMn|@H
联系人:
~ZU;
0#
检查人日期3nuf3)
6.3关键性仪表及消耗性备品备件:
见附件2D^Dm,_-
检查人日期lJ]r%YlF
6.4安装检查mY-Z$8r
对照使用说明书要求安装,确认环境、电源等符合要求。
8o8FL~&
]
检查内容要求方法结果IVy,A7f
环境室内不得存放与实验无关的易燃、易爆和强腐蚀性的物质,无强烈的机械震动和电磁干扰。
目测:
NU-C!
eT
环境温度5℃-35℃温湿度仪测Ff>
Y<
7CQv
环境相对湿度20%~85%温湿度仪测1=#r$H
安装位置仪器应平稳而牢固地安置在工作台上按要求安装L1BpkB
电压220V±
22V电压仪测Wy#`*h,
频率50Hz±
0.5Hz[2w3c4K
接地接地良好接地电阻表测定4W9!
_:
j(j
电源线与插孔吻合按要求安装7tAWPSwf
液体管路液路管路选材正确,连接处密封良好,检漏合格按要求安装zq!
2);
__`m<
="
No
检查人日期?
d+B]VYw
6.5计算机的安装情况检查$O}glQ
项目8g>
jz8
安装的主要软件(i*1M
文件格式2IjqTL
安装位置_p00\C
数据文件保存位置!
LIWoa[F.
密码复杂性yrsP'
th
工作站安装,}{E+e5jh7
6.6安装确认结论及批准;
uoH+`pf
所有物品与检查清单相符,实验室电、气设计安装合理,实验室环境良好,符合仪器安装要求。
气、电及管路连接符合供货方的要求。
ZlO@PlZ)
仪器安装。
SF.,sCk
检查人日期QyHUuG|g
批准人日期Opjt?
7.安装验证内容JpuW!
I
7.1评价设备性能、质量、适用性是否符合采购质量标准要求:
见附件3。
9l,Gd
7.1.1评价仪器的安装是否符合GMP及供应商提议的要求;
Rnb^t6Z
查阅设备采购定单、操作手册等,列出设备安装、使用所需条件,包括温度、湿度、通风条件、电路等。
检查仪器安装与使用所处的环境条件,是否符合上述要求。
检查结果记录于附件4。
%<
W1y
7.1.2起草标准操作规程(可验证后补充)dUe"
qH29s
标准操作规程x65e,'
维护保养规程;
l`8w3fDt
校正规程@ym7hk.
7.1.3仪器校正,U7hzBj8k
由厂商技术人员现场安装、调试,进行运行确认前的校正。
{K|{a
7.2运行确认(功能试验)k,@1rOf
7.2.1测试项目和认可标准)b-G2<
kb
整个验证过程分为单个部件的验证和整机验证。
验证时一般先验证泵、柱温箱、自动进样器的性能,接着是检测器的性能,最后是整机的性能验证。
4B>
l|%
根据中华人民共和国国家计量检定规程JJG705-2002、中国药典(2005版)附录确定。
X:
e'
@]Z)?
验证部件验证项目合格标准HwGtLeB"
输液泵流量设定值误差SS0.5ml/min:
<5%;
1.0ml/min:
<3%;
2.0ml/min:
<2%TxiJ?
sDh*
流量稳定性误差SR0.5ml/min:
<2%;
<2%1rKR=To
梯度误差GC:
不超过±
3%3gM{lS}h#
柱温箱柱箱温度设定值误差ΔTS<±
2℃LNg1q1P3
柱箱控温稳定性TC≤1℃dn5v|[dJ
自动进样器进样量准确度误差≤±
2%F+6ZD5/
检测器基线噪声≤2×
10-5AUK4rr.f6
最小检测浓度≤1×
10-7g/mL(萘的甲醇溶液)lAGxE-B^a"
基线漂移≤5×
10-4AU/hq[#\qT&
QU
波长示值误差不超过±
2nmlz*PNT{E
波长重复性优于2nmW@G[gS\T
整机性能定性测量重复性误差RSD≤1.5%m^=,RfUUd
定量测量重复性误差RSD≤3.0%BOWTH{KR<
7.2.2验证所需的材料Y1~SGg7(@
7.2.2.1玻璃仪器设备计量玻璃仪器需彻底清洗并经检定,一般玻璃仪器要保证洁净。
^"
Y'
zIL
7.2.2.2试剂、标准溶液xo%iL
a)萘(AR)[vi4,'
wm
b)甲醇(色谱纯)=gn}_sKNE
c)咖啡因(AR)F:
g{rm[
d)去离子水:
电导率不大于0.1μs/cms,v#lJ]d0W
e)紫外波长标准物质v6VhXV6$|
7.2.2.3其它辅助设备wUeOD.;
#F
a)玻璃仪器:
经检定、其它玻璃器皿PQ]9xzOg[
b)C18色谱柱Q75^7Ga_
c)铂电阻温度计(Pt100)准确度≤0.3℃a~7osRmp0
d)秒表分度值不大于0.1秒3x0wk9lND
e)注射器10μl、50μl、10mlS1`0d9ds#
f)分析天平"
3|"
rc&
F#
g)游标卡尺15cm/0.02mm'
F?
Znd2L
7.2.3软件系统安全性确认nj0AO0
打开计算机开关,待屏幕运行Windowsxp操作系统以后,由可以授权操作该仪器的检验员设定登陆用户名、密码,重新启动系统。
再让其他不知被授权人员登陆,尝试输入用户名和密码,尝试能否进入计算机系统,连续尝试5次。
不知用户名和密码的操作人,应无法登陆计算机系统。
25c!
-.5D
结论:
OG+r|.N;
检查人:
日期:
%)Uvf`Xhh4
7.2.4运行确认的实施`6N-MsP
7.2.4.1输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定ho]_!
G498
将仪器的输液系统,进样器、色谱柱和检测器联接好,以甲醇为流动相,流量设为1.0mL/min,按说明书启动仪器,待压力平稳后保持10分钟,按表1设定流量,待流速稳定后,在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相,同时用秒表计时,准确地收集,称重。
按式
(1)、式
(2)计算SS和SR。
-Bo~"
q
表1RsF3#H
流量设定值(mL/min)0.51.02.0PWk?
8dL-
测量次数333X`3vSCn
流动相收集时间(min)1055[%84L@:
SS=(Fm-FS)/FS×
100%……
(1)~1=._?
Ho
SR=(Fmax-Fmin)/F×
100%……
(2)`\ef0
式中:
SS——流量设定值误差(%);
d{2y/
SR——流量稳定性误差(%);
-7k|6"
EwM
Fm=(W2-W1)/ρT•t,流量实测值(mL/min);
s!
@_=rq
W2——容量瓶+流动相的重量(g);
t+3
W1——容量瓶的重量(g);
rnn2u+OG
FS——流量设定值(mL/min);
@V*ju
ρT——实验温度下流动相的密度(g/cm3);
&
RKH2_R
t——收集流动相的时间(min);
t}*l?
$`
Fmax——同一组测量中流量最大值(mL/min);
{{V;
+62
Fmin——同一组测量中流量最小值(mL/min);
je&
dioZ>
F——同一组测量值的算术平均值(mL/min)。
Q`.'
-iq
输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定记录。
见附件5。
Gw~{V
7.2.4.2梯度误差的检定L;
/9L[s,
由梯度控制装置设置阶梯式的梯度洗脱程序,A溶剂为纯水,B溶剂为含0.1%丙酮的水溶液,B经由5个阶梯从0变到100%。
将输液泵和检测器连接(不接色谱柱),开机以后以A溶剂冲洗系统,基线平稳后开始执行梯度程序,画出梯度变化曲线。
求出A,B溶剂不同比例时的输出信号值(或记录仪读数),重复测量2次,计算平均值。
从B溶剂的含量及对应的输出信号值(或记录仪读数),按式(3)计算梯度误差Gci,取Gci最大者作为仪器梯度误差。
WGH%92
Gci=(Li–Lm)/Lm×
100%ppAmN0=G
Gci——第i段梯度误差(%);
0CPxIF&
_
Li——第i段输出信号值(或记录仪读数)平均值;
KMUK`tbaI
Lm——各段输出信号(或记录仪读数)平均值的平均值。
*8z"
^7?
^=
7.2.4.3柱温箱柱箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的检定3\;
v5D:
将数字温度计探头固定在柱温箱内,选择35℃和45℃进行检定。
按仪器说明书操作,通电升温,待温度稳定后,记下温度计读数并开始计时,以后每隔10min记录一次读数,共计7次,求出平均值。
平均值与设定值之差为ΔTS,7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性TC。
|)hCJu
柱温箱柱箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的检定原始记录。
1Fv8T'
7.2.4.4自动进样器进样量准确度误差的检定vkJ)FEar
取1.5ml进样瓶装入1ml水,用天平精密称定其重量,然后置于自动进样器上让其进样10次,每次50μl。
进样完成后再精密称定其重量,由重量差计算进样量准确度。
grr'
d+_e
自动进样器进样量准确度误差的检定原始记录。
m+?
N7
7.2.4.5检测器的检定zJ;
Rt9<
7-
7.2.4.5.1检测器基线噪声和基线漂移的测定_g[-=y{Bb
取C18色谱柱,以100%甲醇为流动相,流量为1.0ml/min,检测器波长设定为254nm,开机预热,待仪器稳定后(约60min)记录基线60min,从30min内基线上读出噪音值;
从60min基线上读出基线漂移值。
{(4#)K2g%
7.2.4.5.2检测器最小检测浓度的测定joqWh!
kv7U
取C18色谱柱,以100%甲醇为流动相,流量为1.0ml/min,检测器波长设定为254nm,开机预热,待仪器稳定后取1×
10-7g/ml的萘/甲醇溶液进样20μl,记录色谱图,由色谱峰峰高和基线噪声峰峰高计算最小检测浓度CL。
公式如下:
/prYSRn8
CL=(2×
Nd×
C)/H~O{W;
Cyh
式中CL——最小检测浓度,g/ml;
6W&
_2a7_*
Nd——基线噪声峰峰高,mm;
eCWPhB6l
C——标准溶液浓度,g/ml;
zC=a3
H——标准溶液峰峰高,mm。
Ja|{1&
J.
检测器的检定原始记录。
e\F}q)_
7.2.4.5.3波长示值误差和重复性检定eh(<
m8I
仪器通电稳定后,用注射器将紫外波长标准溶液(波长为235nm、257nm、313nm、350nm)注入检测器样品池,使用仪器光谱扫描功能,分别记录各标准溶液的光谱图,光谱图最大值对应的波长与标准溶液标准波长之差为波长示值误差。
!
3.D,
每个波长重复测量3次,其中最大值与最小值之差为波长重复性误差。
19t{|w<
7.2.4.6整机性能的检定&
c>
O
取C18色谱柱,以100%甲醇为流动相,流量为1.0ml/min,检测器波长设定为254nm(当选用萘时)或272nm(当选用咖啡因时),柱温设定为40℃。
开机预热待仪器稳定后取0.1mg/ml的萘/甲醇溶液或0.02mg/ml的咖啡因甲醇溶液进样10μl,连续进样6次,记录其峰面积和保留时间,以保留时间计算其定性测量重复性误差,以峰面积计算其定量测定重复性误差。
h/)_)r.x
整机性能的检定原始记录。
SUT~oETP
7.2.5运行确认评价及结论。
UzG[:
ic%
8性能确认(适用性试验):
pQa:
pX
使用对照品或供试品,确认仪器性能符合使用要求。
对各类不同物质进行验证的方法可以不同,由质量部确定具体验证方法并组织实施。
n3KI+I%nQ
8.1系统适用性试验:
h6:
#!
Rg
8.1.1色谱柱的理论板数(n),在选定的色谱条件下,注入供试品溶液(或内标溶液),记录色谱图,量出供试品或内标物质峰的保留时间tR和半峰宽Wh/2,按n=5.54(tR/Wh/2)2计算出理论板数,符合具体品种项下规定的理论板数。
bHE2,;
8.1.2分离度(R),按下式计算,应大于1.5GVGlVAo|@
R=(tR1-tR2)/(W2+W1)oUZoj2G1
tR1——相邻后一峰的保留时间;
D{8PQ2x>
tR2——相邻前一峰的保留时间;
C1kYl0zR[
W1、W2——此相邻二峰的宽度。
yLE7>
48
8.1.3拖尾因子(T)按下式计算,应在0.95~1.05之间tBbOY}.VD
T=W0.05h/2d1Mj#-j/{x{5
W0.05h——0.05峰高处的峰宽-VKS~{
d1——峰极大对峰前沿之间的距离8Me:
Yp_Xt
理论板数、分离度、拖尾因子测试结果`]Fx.)C#
品种名称理论板数(n)分离度(R)拖尾因子(T)2WX7nK;
规定值实测值规定值实测值规定值实测值gI^oU4mq
>1.50.95~1.05c\B|KhDk
附原始记录及图谱CYYkzcc^
测试人日期r.3/F[.
8.2定量重复性试验pyLRgD0g
相对标准差:
取对照品溶液连续进行5次,峰面积相对标准差应≤2.0%。
试验结果如下:
3vcO!
6Z5
品种进样次数峰面积平均峰面积偏差相对标准差5N%93{L
13a.kBzus
2G}&
Sle]
30-~\W(
4CPNL94x
5zZVfj:
i8
附原始记录及图谱\&
HnKhI
测试人日期6Cn+e.j@
8.3性能确认结论及批准(附件5)(V4~`i4V
9.拟订再验证项目及周期liXdN
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- 高效 色谱仪 验证 方案