液质联用技术在药物杂质结构分析中应用Word格式.docx
- 文档编号:20452455
- 上传时间:2023-01-23
- 格式:DOCX
- 页数:12
- 大小:158.67KB
液质联用技术在药物杂质结构分析中应用Word格式.docx
《液质联用技术在药物杂质结构分析中应用Word格式.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《液质联用技术在药物杂质结构分析中应用Word格式.docx(12页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
吡格列酮氢化母液(附图2)
吡格列酮
滤液(含4.6min杂质A约3.6%)
二氧六环
母液样品
下层液
杂质-D提取液正己烷层(上层)含6.9min杂质-D可高达54%(附图3)
稠状物
上层为有色层(有机层)
收集下层水层
杂质-A提取液4.6min杂质-A含量可达约30%。
(附图4)
四、杂质的结构分析
分析色谱条件1:
色谱柱:
依利特HypersilODS2250×
4.6mm5µ
m
流动相:
乙腈-水-醋酸=500:
500:
1.2(用氨试液调节pH6.0)
分析色谱条件2:
乙腈-水-醋酸=420:
580:
0.9(用氨试液调节pH6.2)
LC-MS分析色谱柱均为依利特HypersilODS2250×
1、峰位的确认及分子量初步分析(LC-MS分析):
取吡格列酮样品分别于色谱条件1和色谱条件2下进样分析,并取吡格列酮样品于色谱条件2下进行LC-MS分析。
结果见下表1。
表1杂质的出峰位置的确认及分子量初步分析(LC-MS分析)
色谱条件
成分
保留时间(RT)
相对保留时间(RRT)
分子量
色谱条件1
(附图5)
杂质A
4.669min
0.57
/
杂质B
7.177min
0.88
色谱条件2
(附图6)
6.734min
0.45
12.432min
0.84
LC-MS(图7)
6.296min
298
11.563min
0.83
326
2、母液的LC-MS分析:
取吡格列酮母液于色谱条件1下进行色谱分析,在梯度条件下进行LC-MS分析,结果见下表2。
表2母液的色谱分析和LC-MS分析
(附图2)
4.694min
0.56
7.276min
0.87
杂质D
7.507min
0.90
LC-MS分析
(梯度洗脱)
(附图8)
7.186min
13.143min
1.03
杂质E
8.283min
0.65
257
11.677min
0.91
135
由于LC-MS色谱系统的变化(如调节流动相pH误差较大)会使出峰时间顺序发生变化,这在吡格列酮分析方法学研究中得到证实,所以LC-MS中分子量为326保留时间为13.143min的杂质应为图2中7.276min杂质B。
3、样品及杂质LC-MS/MS分析:
(1)对吡格列酮050602批样品的分析:
取吡格列酮050602批样品于色谱条件1下进行液相色谱分析,并进行LC-MS/MS分析,结果见下表3。
表3吡格列酮050602批样品的色谱分析和LC-MS/MS分析
(附图9)
4.688min
7.268min
6.720min
0.81
LC-MS分析(流动相为乙腈-水-冰乙酸=450:
550:
1.2(用氨试液调节pH6.0))
(附图10)
6.081min
0.62
主峰后
7.038min
0.72
根据样品图中三个主要杂质相对应,并结合前面分析可以推测出图10中7.038min质量数为257杂质即为图9中6.720minRRT=0.8072杂质E;
图10中主峰后质量数为326杂质即为图9中7.268min杂质B。
7.038min杂质E,其分子量为257,其结构可能为醚化物醛基氢化成为羟基的化合物。
C16H19NO2M=257
(2)对分子量为298的杂质A提取液的LC-MS/MS分析:
取杂质A提取液进行LC-MS/MS分析并与盐酸吡格列酮的LC-MS/MS谱图和盐酸吡格列酮26min色谱制备杂质的LC-MS/MS/MS比较,结果见下表4。
表5分子量为298的杂质A提取液的LC-MS/MS分析
一级电离m/z
二级电离m/z
三级电离m/z
6.071min
(附图11)
299.0
118.9、133.9、239.8、281.8
盐酸吡格列酮
(附图14)
356
357.2
119.2、134.1、240、241.1、286.1
盐酸吡格列酮后峰色谱制备杂质(附图15)
489
490.4
357.3
119.3、134.2、177.1、250.1
根据对分子量为298的杂质A进行的LC-MS/MS分析(附图11),与盐酸吡格列酮(附图14)含有共同的m/z118.9、m/z134、m/z240碎片离子峰,这与盐酸吡格列酮及其后峰色谱制备杂质的裂解(附图15)一致,都有m/z118.9、m/z134碎片离子峰,证明有极为相似的结构,由于m/z134碎片离子中含有一个N原子,分子量为偶数,根据氮规则不可能只含一个N原子,应该至少还含有一个N原子;
又根据m/z281.8的碎片离子峰的裂解,丢失碎片推测可能是含一个氨基。
根据吡格列酮结构与氢化工艺的分析,其可能结构为吡格列酮氢化脱去硫和羰基后的产物,
C18H22N2O2M=298
其可能裂解如下:
m/z118.9碎片离子可能为氢重排后的碎片离子[
]。
(3)对母液中RRT=0.9023杂质-D提取液的LC-MS/MS分析:
取杂质-D提取液进行LC-MS/MS分析,结果见下表5。
表5杂质-D提取液的LC-MS/MS分析(附图12、图13)
9.329min
327.0
133.9、281.0、282、298.9
杂质-D
9.835min
135.9
120.8、346.8、525.6
据对母液中RRT=0.9023杂质-D提取液的LC-MS/MS分析,该杂质-D分子量为135,[M+H]=135.9,有可能为2,5-二乙基吡啶,裂解可丢失一个甲基自由基,得到[M+H]+=120.8的碎片离子,裂解后可能形成聚合物而得到m/z346.8、m/z525.6的碎片离子。
结构可能为
C9H13NM=135
可能由于裂解过程中形成自由基而发生聚合(附图13)。
表6杂质-B的峰位置确认
样品来源
附图
相对吡格列酮保留时间(RRT)
相对杂质-D保留时间(RRT)
目标样图
图1
7.550min
母液
图2
0.97
杂质-D提取液
图3
6.602min
0.89
0.96
LC-MS/MS
图12
9.392min
根据其9.329min杂质-B的LC-MS/MS分析,可以确认该杂质即为目标样图1中所需研究相对保留时间(RRT)为0.87的杂质,其分子量为326,其裂解与分子量为298的杂质A极为相似,有共同的碎片离子峰m/z133.9、m/z282、m/z298.9再根据吡格列酮与其氢化工艺的分析,推测其结构可能为吡格列酮氢化脱硫化合物。
C19H22N2O3M=326
附:
吡格列酮结构如下:
吡格列酮26min杂质结构如下:
五、盐酸吡格列酮合成工艺路线:
根据工艺分析,结合盐酸吡格列酮合成技术人员的分析,在合成工艺氢化反应中中是有可能产生杂质A和杂质B的。
六、4.6min(RRT=0.56)杂质详细可能裂解过程分析:
(1)
(2)
(3)
根据4.6min杂质A的裂解途径分析,杂质A的分析结构是有合理性。
裂解途径以
(1)、
(2)占优势,裂解途径(3)几率很小,几乎不可能。
七、结论:
1、样品中杂质:
根据分析吡格列酮中4.69min(RRT=0.56)杂质A结构为
7.27min(RRT=0.87)杂质B结构为
2、母液中杂质:
样品及母液中6.7min(RRT=0.81)杂质E结构为
母液中7.51min(RRT=0.90)杂质D结构为
八、讨论
(1)本文选择了适当的溶剂有效地对复杂成分母液样品进行了提取,大大提高了杂质的含量,有利于杂质的研究;
(2)本文对杂质进行了多级裂解,并对裂解过程进行了详尽的分析,确证了其结构;
(3)本文结合了合成工艺路线的分析,证实了合成反应过程中生成该杂质的可能;
(4)本文利用液质联用技术成功地对多个杂质成分进行了分析。
[参考文献]
1、汪正范、杨树民等.色谱联用技术.北京,化学工业出版社,2001
2、于世林、李寅蔚.波谱分析.重庆大学出版社,1999
3、盛龙生、何丽一、徐连连等.药物分析.北京,化学工业出版社,2004
4、王光辉、熊少祥.有机质谱解析.北京,化学工业出版社,2005
5、赵瑶兴、孙祥玉.有机分子结构光谱鉴定.北京,科学出版社,2004
6、宁永成.有机化合物结构鉴定与有机波谱学.北京,科学出版社,2005
附:
图1杂质研究要求样图
图2母液HPLC分析图谱
图3母液中杂质-D提取液的HPLC分析图谱
图4分子量为298的杂质A提取液的HPLC分析图谱
图5吡格列酮色谱条件1的HPLC分析图谱
图6吡格列酮色谱条件2的HPLC分析图谱
图7杂质A、B分子量初步分析的LC-MS图谱
图8母液的LC-MS分析图谱
图9吡格列酮050602批样品的HPLC分析图谱
图10吡格列酮050602批样品的LC-MS图谱
图11杂质A提取液的LC-MS/MS图谱
图12杂质-D提取液的LC-MS/MS图谱-1
图13杂质-D提取液的LC-MS/MS图谱-2
图14吡格列酮的LC-MS/MS图谱
图15盐酸吡格列酮26min色谱制备杂质的LC-MS/MS/MS图谱
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 联用 技术 药物 杂质 结构 分析 应用