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2)玻璃纸准备:
将玻璃纸剪成22mm×
30mm的小片片,浸于甘油—孔雀绿溶液(含100ml纯甘油,100ml水和1m13%孔雀绿水溶液)中,不少于24小时,使玻璃纸浸透呈现绿色即可。
使用此法需掌握粪膜的合适厚度和透明的时间,如粪膜厚,透明时间短,虫卵难以发现;
如透明时间过长则虫卵变形,也不易辨认,如检查钩虫卵时,透明时间应在30分以内。
(2)粪便直接涂片法(操作技术)
1)试剂:
0.85%氯化钠溶液(生理盐水),即0.85g氯化钠加蒸馏水至100ml.。
2)操作步骤:
取洁净的载玻片,中央滴一滴生理盐水;
用竹签挑取火柴头大小的粪便,置于生理盐水内调匀;
左右摊开,涂成薄涂片,涂片的厚薄以透过涂片隐约可辨认书上的字迹为宜,不宜过厚并防止干涸;
检查时应移动推进器,顺序观察,先用低倍镜找虫卵,再换高倍镜详细观察。
图4-1-3
蛔虫肠穿孔
3)注意事项:
检查肠道寄生虫卵,也可用自来水代替生理盐水。
常规检查每一份粪便需检查3张涂片,粪便必须新鲜、盛粪便的容器应干净,防止污染与干燥。
【作业】
绘蛔虫的受精卵与未受精卵图。
【思考题】
1、粪便检查未发现蛔虫卵是否可以排除蛔虫感染?
2、蛔虫的感染率高主要与哪些因素有关?
3、蛔虫卵的抵抗力强主要与虫卵哪些结构有关?
4、蛔虫生活史有哪些特点?
5、蛔虫感染可引起哪些并发症,如何防治?
二蠕形住肠线虫(蛲虫)
图4-1-4蛲虫成虫头部
【目的要求】
1、掌握蛲虫卵的形态特征;
2、熟悉成虫的外部形态;
3、熟悉蛲虫卵常用检查方法—透明胶纸法。
【实验内容】
1、示教标本:
(1)成虫(保藏标本):
将成虫放于标本瓶内,用福尔马林液固定保存。
肉眼观察,蛲虫灰白色。
虫体中部膨大略呈纺锤形,尾端直而尖细。
尖细部为体长的1/3,雌虫大于雄虫。
(2)成虫(染色玻片标本):
成虫经卡红或复红染色后封片保存低倍镜下观察。
虫体外被具有横纹的角皮层,前端的角皮层膨大,形成头翼,口周有三个小唇瓣,咽管末端膨大呈球形,称咽管球。
虫体中部可见充满虫卵的子宫,生殖系统为双管型。
图4-1-5
蛲虫卵
(3)蛲虫卵:
无色透明,虫卵呈不对称椭圆形,一侧扁平,一侧凸起,自虫体排出时,虫卵已发育成多细胞时期,仅需数小时即可发育为含幼虫的虫卵。
(4)、技术操作(示教)
1)透明胶纸法:
用宽2cm的透明胶剪成6cm的一段,贴于干净载玻片上,将其一端向胶面摺叠0.5cm,便于揭开胶纸。
载玻片上的一端贴上标签,并注明检查者的姓名或编号。
检查时揭下胶纸,清晨便前用纸粘贴患者肛门周围的皮肤,然后将将胶纸复位面平贴于玻片上镜检。
如胶纸有较多的气泡,可揭开胶纸加一滴生理盐水或二甲苯,覆盖胶纸后镜检。
2)棉签拭子法:
将棉签浸入试管的生理盐水中,取出拧去过多的水滴,在肛门周围擦拭,将擦拭后的棉签放人盛有饱和盐水的青霉素小瓶中,用力搅动,迅速提起棉签,并在瓶壁内挤净盐水后弃去,再加饱和盐水至略高于瓶口,覆盖一载玻片,5分钟后取下载玻片镜检。
以上两种方法于清晨解便前或洗澡前检查肛周。
2、观察标本
图4-1-6透明胶纸法蛲虫卵
(1)虫卵:
在低倍镜下查找虫卵,转换高倍镜仔细观察。
在低倍镜下观察成虫的头部及内部形态特征。
绘蛲虫卵图。
1、蛲虫感染的实验诊断应注意哪些问题?
2、蛲虫在肠道寄生,为什么不用粪便做常规检查?
3、根据蛲虫生活史特点,蛲虫的防治应注意哪些环节?
4、蛲虫的异位寄生可以造成哪些损害?
三毛首鞭形线虫(鞭虫)
图4-1-7鞭虫吸附在迴盲部
1、掌握鞭虫卵的形态特征;
2、熟悉成虫的寄生部位;
3、了解成虫的外部形态。
(1)成虫保藏标本将成虫放于标本瓶内,用福尔马林液固定保存。
肉眼观察,成虫体形似马鞭,前端尖细,约占虫体的3/5,虫体后2/5较粗。
雌虫尾端钝圆,阴门位于虫体粗大部分的前端。
雄虫尾端向腹面呈螺环状卷曲,未端具有一个交合刺。
(2)成虫寄生在肠壁上标本:
其头部钻入肠粘膜寄生,较粗的尾部悬挂于肠壁。
(1)成虫:
染色玻片标本,镜下观察。
外形同自然标本,其前部含有一条很微细的咽管,管外绕有一串较大的杆状细胞。
图4-1-8鞭虫的虫卵
(2)虫卵:
鞭虫卵较蛔虫卵小、呈腰鼓形,卵壳较厚,棕黄色,两端各有一个透明栓,卵内含有一个卵细咆,充满卵壳。
绘鞭虫卵图。
鞭虫和蛔虫的生活史有何异同点?
四十二指肠钩口线虫及美洲板口线虫(十二指肠钩虫及美洲钩虫)
1、掌握十二指肠钩虫及美洲钩虫的形态特征和鉴别要点。
2、掌握钩虫卵的形态特征。
3、熟悉诊断钩虫病的方法;
4、了解虫卵计数法及试管钩蚴培养法;
图4-1-9b
美洲钩虫(左)
十二指肠钩虫(右)成虫体态
(1)肉眼观察成虫保藏标本:
钩虫病患者经驱虫后,由粪便中收集成虫,保藏于5%福尔马林液中,可直接用肉眼观察其外部形态特征。
十二指肠钩虫及美洲钩虫,体壁皆略透明,呈乳白色,雌虫尾端尖细而直,雄虫尾端膨大成伞形。
两种虫虫体弯曲情况不同,可作为虫种鉴别特征之一。
十二指肠钩虫前端与尾端弯曲一致,似“C”字形,美洲钩虫前端与尾端弯曲相反,似“S”字形。
(2)成虫染色玻片标本(镜下观察):
1)钩虫口囊:
十二指肠钩虫囊复侧前缘有两对钩齿;
美洲钩虫口囊复侧前缘有一对板齿。
2)钩虫雄虫交合刺:
十二指肠钩虫交合刺有两刺,呈鬃状,末端分开;
美洲钩虫交合刺一刺末端形成倒钩,与另一刺末端合并包于膜内。
图4-1-10
美洲钩虫口囊(左)
十二指肠钩虫口囊(右)
3)钩虫雄虫尾部交合伞:
十二指肠钩虫交合伞略圆;
美洲钩虫交合伞略扁,似扇形。
4)背辐肋:
十二指肠钩虫背肋由远端分两支,每支又分3小支;
美洲钩虫背肋基部分两支每支又分两小支。
(3)钩蚴观察经钩蚴培养法所获得的钩蚴的形态特征:
镜下观察,可见其做蛇样运动。
(4)病理标本:
钩虫成虫寄生于小肠。
2、技术操作
(1)钩蚴培养法(示教):
此法不需用显微镜,且阳性率比粪便涂片法高7.2倍,效果较好:
常用的是小试管培养法,本法不仅可用于钩虫感染,而且还可用作虫卵计数。
操作方法如下:
图4-1-11
钩蚴培养法
1)取1cmm×
10cm的一洁净试管,加入冷开水1.5—2m1,将滤纸剪成与试管直径等宽但较试管稍长的“T”字形纸条,上端用铅笔写受检者姓名或编号受检日期;
2)用竹签挑取混匀的粪便0.2~0.4g(约半粒蚕豆大小),均匀地涂纸条2/4处,(若须做虫卵计数,则必须准确地称取0.5g);
3)将涂有粪便的纸条插入试管内,使滤纸下端空白处的1/2浸入水中,但不要触及水底,同时注意勿使粪便混入水中。
置于20~30℃条件下培养。
培养过程中必须注意每天补充管内蒸发掉的水分;
4)3~5日后,将纸条取出,检查管内水中有无钩蚴。
若有钩蚴,在水中虫体透明,用肉眼或放大镜观察,可见其做蛇样运动。
若欲作虫卵计数,则加碘液少许将钩蚴杀死,取管内沉淀部分置于载玻片上,以普通放大镜(放大20~30倍即可)计数钩蚴的数目。
此法也可用于分离人体肠道内各种阿米巴滋养体及人毛滴虫滋养体,且能提高检出率。
(2)司徒尔(Stoll)法(示教)即司氏稀释虫卵计数法。
用特制的三角烧瓶(或普通三角烧瓶),容量为65m1左右,在烧瓶的颈部相当于56ml和60ml处,有两个刻度,先把0.1mol/LNaOH溶液倒入瓶内至56ml处,再慢慢地加入粪便,到液面上升到60ml处。
然后放进玻璃珠10余颗,用橡胶塞塞紧瓶口,充分摇动,使其成为十分均匀的混悬液计数市数时充分摇匀,用有刻度的小吸管吸取0.07ml或15ml粪液置于载玻片上,加盖片,在低倍镜下计数全片的虫卵数,乘以200(吸0.075m1)或100(吸0.15m1)即得出每克粪便的虫卵数:
由于粪便的性状明显影响古算结果,因此不成形的粪便的虫卵数应再乘粪便性状系数,即半成形粪便乘以1.5,软湿性粪便乘以2,粥状粪便乘以3,水泻粪便乘以4。
图4-1-12
饱和盐水浮聚法
雌虫数=每克粪便含虫卵数×
24小时粪便克数÷
已知雌虫每天排卵总数
成虫总数=雌虫总数×
2
(3)饱和盐水浮聚法(学生操作):
本法利用相对密度较大的饱和盐水,使相对密度较小的虫卵,特别是钩虫卵,漂浮在溶液上面,而达浓集的目的。
1)饱和盐水的配制:
将食盐徐徐加入盛有沸水的容器内,不断搅动,直至食盐不再溶解为止。
从粪便不同部位,取黄豆大小粪块,置于盛有少量饱和盐水的浮聚瓶内(高5cm,直径约2cm的圆形直筒瓶,常用青霉素瓶代替)。
将粪便捣碎搅匀后,再加饱和盐水,加至略高于瓶口,以不溢出为止。
取洁净载玻片一块,盖于瓶口,静止约15分钟,盖时应避免产生气泡。
将载玻片垂直向上拿起并迅速翻转,镜检。
图4-1-13钩虫卵
3、观察标本(镜下观察钩虫卵)虫卵:
取饱和盐水浮聚法所得虫卵(或取保存于福尔马林液中的虫卵悬液作直接涂片)进行观察。
镜检时光线不要太强,应先用低倍镜寻找虫卵,然后再换高倍镜详细观察,钩虫卵为长椭圆形,卵壳薄而透明,刚排出体外的虫卵,内含有2~4个细胞(如粪便搁置1—2天后,则虫卵内细胞分裂为多细胞期或发育为幼虫期)。
注意虫卵的大小、外形、颜色、卵壳及卵内容物。
十二指肠钩虫和美洲钩虫的虫卵在形态上没有区别。
【作业】绘钩虫卵图。
1、粪便检查钩虫卵时,为何常见到多细胞时期的虫卵?
2、诊断钩虫感染常用的病原学检查方法是什么?
3、钩虫与蛔虫生活史有哪些异同点?
4、钩虫致病引起哪些主要症状?
并阐明其致病机制?
五班氏吴策线虫和马来布鲁线虫
图4-1-14
班氏微丝蚴
1、掌握两种丝虫微丝蚴的形态特征。
2、熟悉厚血膜法检查微丝蚴的技术操作。
(1)丝虫成虫(保藏标本):
虫体细长线状,乳白色,表面光滑。
雌虫较长,尾端钝圆,略向腹面弯曲。
雄虫较短,尾端向腹面卷曲可达2~3圈。
(2)微丝蚴:
1)未染色微丝蚴(玻片标本)。
2)班氏微丝蚴(染色玻片标本)。
3)马来微丝蚴(染色玻片标本)。
4)中间宿主(媒介蚊种):
淡色库蚊、致倦库蚊和中华按蚊(形态特征参见实验指导医学节肢部分)成虫针插标本。
5)晚期丝虫病人象皮肿照片和病理标本。
图4-1-15
马来微丝蚴
2、观察标本
(1)未染色微丝蚴玻片标本:
在低倍镜下,观察未染色的厚血片,微丝蚴呈丝状,粗细均匀一致,无色透明,折光性强,体前端钝园,后端尖细,观察时应注意棉花纤维和其它杂物的区别。
棉花纤维粗细长短不等,两端平齐或尖削梭角,内呈网状构造。
(2)班氏微丝蚴染色玻片标本:
班氏微丝蚴经染色后,可观察到详细的形态结构。
先用低倍镜在染色片中找到班氏微丝蚴,微丝蚴细长、无色透明、头端钝园、尾端尖细、呈不同弯曲的虫体。
然后将虫体移至视野的的中心,换高倍镜观察其内部构造。
班氏微丝蚴弯曲比较自然柔和,前端钝园后端尖细,体披有一层鞘膜,鞘膜在虫体前后端最为明显。
体内充满蓝色细胞核,称体核。
体核大小均匀,排列整齐,间隔清晰。
体前端有一无核的空隙,为头隙,班氏微丝蚴的头隙较短,长宽之比为1:
1或1:
2。
头隙下方约为虫体前1/5处有一小段无色透明的无核区,为神经环。
神经环下方有一不明显的排泄孔,排泄孔下方有一较小的排泄细胞,二者相距甚近。
在虫体后端1/5处有一肛门,小而不明显。
排泄孔、排泄细胞、肛门等构造,因染色关系在标本中常见不到。
体核分布到后端略前处为止,尾端有一小段无色透明区,无尾核。
(3)马来微丝蚴染标玻片本:
用同样的方法观察马来微丝蚴。
马来微丝蚴较班氏微丝蚴略小,体外也披有鞘膜,可清楚观察到,虫体弯曲不自然,比较僵硬并有小的曲折,体核大小形态不一,排列不整齐,往往重叠在一起,间隔不清楚。
头隙较长,长宽之比约为2:
1。
尾部有2个膨大区,前后排列,其内各有1个尾核。
排泄细胞较大,距排泄孔远,肛孔较大。
两种微丝蚴的主要区别要点见表4-1-1。
表4-1-1班氏微丝蚴与马来微丝蚴的主要区别要点
班氏微丝蚴
大小
(224~296×
5.3~7.0μm)
较小(177~230×
5~6μm)
体态
柔和,弯曲较大
僵硬,大弯上有小弯
头间隙
较短,长宽之比约为1:
2
较长,长宽之比约为2:
1
体核
圆形,较小,大小均匀,排列整齐,相互分离,清晰可数
卵圆形,大小不均,排列紧密,相互重叠,不易分辨尾
尾核
无
有两个尾核
图4-1-16阴囊象皮肿图4-1-17下肢象皮肿
厚血膜制作。
(1)器材、试剂:
采血针、载玻片、洁净磨边玻片(推片)、玻璃棒、酒精棉球、姬氏染液。
(2)操作方法:
用70%酒精棉球消毒耳垂,待干后以采血针迅速刺耳垂,挤出三滴血,滴于洁净的载玻片中央,用推片的一角将血滴自内向外螺旋形摊开,使之成为直径约为0.8~1cm,厚薄均匀的厚血膜。
待血膜充分晾干后,用滴管滴清水于血膜上溶血,待血膜呈灰白色时,将水倒去,晾干,再用小玻棒蘸甲醇或无水酒精在血膜上轻轻抹过以固定血膜,然后染色镜检。
在稀释各种染液和冲洗血膜时,如用缓冲液则染色效果更好。
缓冲液的配制如下:
①M/15磷酸氢二钠液:
无水磷酸氢二钠(Na2HPO4)9.64g或Na2HPO4·
2H2O11.867g或Na2HPO4·
7H2O17.872g或Na2HPO4·
2H2O23.877g,蒸馏水1000ml。
②M/15磷酸二氢钾液:
磷酸二氢钾(Na2HPO4)9.073g,蒸馏水1000ml。
使用时将上述原液按下页表配成不同的pH缓冲液
表4-1-2缓冲液配制
pH值
M/15KH2PO4
M/15Na2HPO4
蒸馏水
6.8
4.9
5.1
90
7.0
6.3
3.7
7.2
7.3
2.7
染色时临时配成pH7.0或7.2的缓冲液。
(3)染液配制:
姬氏染剂粉1g,甲醇50ml,纯甘油50ml。
将姬氏染粉置于研钵中(最好用玛瑙研钵),加小量甘油充分研磨,加甘油再磨,直至50ml甘油加完为止,倒入棕色玻瓶中。
然后分几次用少量甲醇冲洗钵中的甘油染粉,倒入玻瓶,直至50ml甲醇用完为止,塞紧瓶塞,充分摇匀,置65℃温箱内24小时或室温内一周过滤。
(4)姬氏染色法:
用pH7.0或7.2的缓冲溶液,将姬氏染液稀释,比例约为15~20份缓冲液加1份姬氏染液。
将蜡笔划出范围,将稀释的染液滴于已固定的血膜上,染色半小时(室温),再使用上述缓冲液冲洗。
血片晾干后镜检。
此法染色效果良好,血膜褪色较慢,保存时间较久,但染色需时较长。
(5)快速姬色染色法:
姬氏染液1ml,加缓冲液5ml,如前法染色5分钟后用缓冲液冲洗,晾干后镜检。
(6)注意事项:
①取血时间于晚上9时以后至次晨2时为宜;
②载玻片必须洁净,不带油迹,否则血膜容易脱落;
③血膜要充分晾干,否则染色时也易脱落;
④采血针和采血部位皮肤作75%酒精消毒后方可采血。
【作业】绘制两种微丝蚴图。
1、简述两种微丝蚴的区别点。
2、丝虫生活史有何特点?
微丝蚴的“夜现周期性”可能与哪些因素有关?
3、丝虫病有哪些临床表现?
并阐明其致病机制。
4、诊断丝虫病有哪些常用的病原学方法?
5、如何防治丝虫病?
六旋毛形线虫(旋毛虫)
图4-1-18肌肉压片所见旋毛虫囊包
1、掌握旋毛虫囊包的形态结构。
2、熟悉旋毛虫囊包活组织检查法的技术操作。
(1)旋毛虫成虫(染色玻片标本):
低倍镜观察,虫体丝状,前端稍细,雌虫长3~4mm,宽0.06mm;
雄虫长1.4~1.6mm,宽0.04。
咽管毛细管状,约占虫体的1/3~1/2。
生殖器为单管型。
(2)旋毛虫幼虫(囊包蚴)染色玻片标本:
虫体细长,约124μm×
6μm,在横纹肌内形成囊包。
2、观察标本:
旋毛虫囊包染色玻片标本(低倍镜观察):
囊包多见于横纹肌内,有两层囊壁,囊包和肌肉纤维平行排列。
囊包呈梭形,内含幼虫1~2条,多可达6~7条,囊内幼虫细长卷曲。
用外科手术从患者疼痛的肌肉(常为腓肠肌或肱二头肌)摘取米粒大小组织块,置玻片上,滴加50%甘油酒精1滴,覆以另一载玻片,均匀压紧,低倍镜下观察。
取下的肌肉须立即观察,否则幼虫会变得模糊,不易观察。
【作业】绘制旋毛虫囊包图
1、试述旋毛虫对宿主可造成哪些组织器官的损害,如何进行防治?
2、如何诊断旋毛虫感染?
七粪类圆线虫
图4-1-19粪类圆线虫各期形态
(1虫卵;
2杆状蚴;
3丝状蚴;
4成虫)
了解自生和寄生世代成虫及虫卵的特征。
1、示教标本(玻片标本,镜下观察)
椭圆形,略透明,卵壳薄,与钩虫卵形态相似,但较小。
(2)自生世代成虫(染色玻片标本):
虫体小,长约0.7~1.0mm,雄虫尾端向腹面卷曲,具两根交合刺。
雌虫尾端尖细。
(3)寄生世代雌虫(染色玻片标本):
雌虫约2.2mm,虫体半透明,角皮具横纹,尾端尖细,咽管细长,约占虫体长的1/3~2/5。
虫卵(玻片标本,镜下观察):
同示教标本。
【作业】绘粪类圆线虫虫卵(注意与钩虫卵的区别)。
1、试述粪类圆线虫生活史的特点。
2、试述粪类圆线虫成虫的病原学诊断方法,在检查中应注意什么事项?
八结膜吸吮线虫
1、熟悉成虫的形态特征。
2、了解结膜吸吮线虫的生活史。
(1)成虫封片标本(镜下观察):
取自患者眼部,卡红染色。
细线状,体表具微细横纹,纹缘呈锯齿状。
1)雌虫:
发育到产蚴时雌虫较大,为14.0~20.0mm×
0.5~0.75mm,尾部圆锥状。
生殖器双管型,阴门位于虫体前端,子宫内充满虫卵,近阴门处有发育成熟的盘曲幼虫。
2)雄虫:
成熟的雄虫大小为10.0~17.0mm×
0.3~0.7mm,尾端自腹面作明显的弯曲或卷曲。
交合刺两支,形态各异,可自虫体末端腹侧泄殖腔伸出。
(2)初产蚴:
呈发条样盘曲,全身被有鞘膜,在尾部的鞘膜形成一个大囊泡。
(3)感染期蚴(丝状蚴):
细长,约3.0mm×
7.0mm,口囊、体表横纹具成虫的特征。
(4)中间宿主:
为变色纵眼果蝇,属小型蝇类,多为麻灰色,有的略带棕黄色,腹部背面有三排呈锯齿状的黑斑。
3、观察标本
成虫(玻片标本,镜下观察):
认识雌雄虫的主要形态特征。
1、简述结膜吸吮线虫的生活史。
2、人体是如何感染结膜吸吮吸虫的?
如何做好防治工作?
九猪巨吻棘头虫
1.了解猪巨吻棘头虫成虫的形态。
2.掌握猪巨吻棘头虫虫卵的形态。
1.示教标本
成虫(大体标本,肉眼观察):
雌虫20~65cm,尾端钝圆。
雄虫5~12cm,尾端有一钟形交合伞。
虫体乳白色或淡红色,圆柱形,体具横皱,前端为可伸缩的球形吻突,吻突上有5~6排吻钩。
2.观察标本:
椭圆形,棕褐色,有卵盖,卵壳厚,一端呈隆脊的嵌接处容易破裂。
内含一条具有小钩的棘头蚴。
绘猪巨吻棘头虫虫卵图。
猪巨吻棘头虫感染有何危害?
怎样诊断猪巨吻棘头虫感染?
实验二吸虫
一华枝睾吸虫(肝吸虫)
图4-2-1华枝睾吸虫成虫和卵
1、掌握华枝睾吸虫卵的形态特征。
2、熟悉成虫的一般形态和内部结构。
3、了解肝吸虫生活史的各期形态,认识第一、第二中间宿主。
(1)成虫活体标本(肉眼观察):
解剖猫从其肝胆管内取得,外形如葵花子,扁平、半透明,大小20~25mm×
3~5mm,口吸盘不清楚,虫体后1/3处可见分枝睾丸,体前中部可见盘绕的子宫,体两侧有肠管。
活时呈肉红色并可见到虫体蠕动。
(2)幼虫(镜下观察):
生活史各期幼虫标本,10%甲醛固定,酸性卡红染色的玻片标本。
1)胞蚴:
为长袋状结构,内含许胚细胞、胚团或正在发育的雷蚴。
2)雷蚴:
亦呈长袋状结构,但在一端有一肌性的咽和一个不长的原始消化管,内含胚细胞、胚团和正在发育的尾蚴。
3)尾蚴:
分体、尾两部。
体部呈椭圆形,有一对黑色的眼点,并可见到口、腹吸盘和排泄囊等构造,有尾,尾部较长,约为体部的2~3倍,有鳍。
图4-2-2
华枝睾吸虫囊蚴
4)囊蚴:
取鱼肉压片镜检,囊蚴椭圆形,淡黄色,大小120~140μm,有两层囊壁,囊中幼虫可见口,腹吸盘及含有黑色颗粒的排泄囊。
(3)病理标本:
肝脏剖面,了解成虫寄生在肝胆管内情况。
(4)华枝睾枝虫中间宿
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