显微镜的使用及保养Word格式.docx
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显微镜的使用及保养Word格式.docx
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是移动标本的机械装置,它是由一横一纵两个推进齿轴的金属架构成的,好的显微镜在纵横架杆上刻有刻度标尺,构成很精密的平面座标系。
如果我们须重复观察已检查标本的某一部分,在第一次检查时,可记下纵横标尺的数值,以后按数值移动推动器,就可以找到原来标本的位置。
(6)粗动螺旋
粗动螺旋是移动镜筒调节接物镜和标本间距离的机件,老式显微镜粗螺旋向前扭,镜头下降接近标本。
新近出产的显微镜(如Nikon显微镜)镜检时,右手向前扭载物台上升,让标本接近物镜,反之则下降,标本脱离物镜。
(7)微动螺旋
用粗动螺旋只可以粗放的调节焦距,要得到最清晰的物象,需要用微动螺旋做进一步调节。
微动螺旋每转一圈镜筒移动0.1毫米(100微米)。
新近出产的较高档次的显微镜的粗动螺旋和微动螺旋是共轴的。
2、显微镜的光学系统
显微镜的光学系统由反光镜,聚光器,接物镜,接目镜等组成,光学系统使物体放大,形成物体放大像。
见图1—2。
(1)反光镜
较早的普通光学显微镜是用自然光检视物体,在镜座上装有反光镜。
反光镜是由一平面和另一凹面的镜子组成,可以将投射在它上面的光线反射到聚光器透镜的中央,照明标本。
不用聚光器时用凹面镜,凹面镜能起会聚光线的作用。
用聚光器时,一般都用平面镜。
新近出产的较高档次的显微镜镜座上装有光源,并有电流调节螺旋,可通过调节电流大小调节光照强度。
(2)聚光器
聚光器在载物台下面,它是由聚光透镜、虹彩光圈和升降螺旋组成的。
聚光器可分为明视场聚光器和暗视场聚光器。
普通光学显微镜配置的都是明视场聚光器,明视场聚光器有阿贝聚光器、齐明聚光器和摇出聚光器。
阿贝聚光器在物镜数值孔径高于0.6时会显示出色差和球差。
齐明聚光器对色差、球差和慧差的校正程度很高,是明视场镜检中质量最好的聚光器,但它不适于4倍以下的物镜。
摇出聚光器能将聚光器上透镜从光路中摇出满足低倍物镜(4×
)大视场照明的需要。
聚光器安装在载物台下,其作用是将光源经反光镜反射来的光线聚焦于样品上,以得到最强的照明,使物象获得明亮清晰的效果。
聚光器的高低可以调节,使焦点落在被检物体上,以得到最大亮度。
一般聚光器的焦点在其上方1.25mm处,而其上升限度为载物台平面下方0.1mm。
因此,要求使用的载玻片厚度应在0.8—1.2mm之间,否则被检样品不在焦点上,影响镜检效果。
聚光器前透镜组前面还装有虹彩光圈,它可以开大和缩小,影响着成像的分辨力和反差,若将虹彩光圈开放过大,超过物镜的数值孔径时,便产生光斑;
若收缩虹彩光圈过小,分辨力下降,反差增大。
因此,在观察时,通过虹彩光圈的调节再把视场光阑(带有视场光阑的显微镜)开启到视场周缘的外切处,使不在视场内的物体得不到任何光线的照明,以避免散射光的干扰。
(3)物镜
安装在镜筒前端转换器上的接物透镜利用光线使被检物体第一次造像,物镜成像的质量,对分辨力有着决定性的影响。
物镜的性能取决于物镜的数值孔径(numerical
apeature简写为NA),每个物镜的数值孔径都标在物镜的外壳上,数值孔径越大,物镜的性能越好。
物镜的种类很多,可从不同角度来分类:
根据物镜前透镜与被检物体之间的介质不同,可分为:
①干燥系物镜
以空气为介质,如常用的40×
以下的物镜,数值孔径均小于1。
②油浸系物镜
常以香柏油为介质,此物镜又叫油镜头,其放大率为90×
—100×
,数值孔值大于1。
根据物镜放大率的高低,可分为:
①低倍物镜
指1×
—6×
,NA值为0.04—0.15;
②中倍物镜
指6×
—25×
,NA值为0.15—
0.40;
③高倍物镜
指25×
—63×
,NA值为0.35—0.95;
④油浸物镜
指90×
,NA值为1.25—1.40。
根据物镜像差校正的程度来分类可分为:
①消色差物镜
是最常用的物镜,外壳上标有“Ach”字样,该物镜可以除红光和青光形成的色差。
镜检时通常与惠更斯目镜配合使用。
②复消色差物镜
物镜外壳上标有“Apo”字样,除能校正红、蓝、绿三色光的色差外,还能校正黄色光造成的相差,通常与补偿目镜配合使用。
③特种物镜
在上述物镜基础上,为达到某些特定观察效果而制造的物镜。
如:
带校正环物镜,带视场光阑物镜,相差物镜,荧光物镜,无应变物镜,无罩物镜,长工作距离物镜等。
目前在研究中常用的物镜还有:
半复消色差物镜(FL),平场物镜(Plan),平场复消色差物镜(Plan
Apo),超平场物镜(Splan,超平场复消色差物镜(SplanApo)等。
(4)目镜
目镜的作用是把物镜放大了的实像再放大一次,并把物像映入观察者的眼中。
目镜的结构较物镜简单,普通光学显微镜的目镜通常由两块透镜组成,上端的一块透镜称“接目镜”,下端的透镜称“场镜”。
上下透镜之间或在两个透镜的下方,装有由金属制的环状光阑或叫“视场光阑”,物镜放大后的中间像就落在视场光阑平面处,所以其上可安置目镜测微尺。
普通光学显微镜常用的目镜为惠更斯目镜(Huygens
eyepiece),如要进行研究用时,一般选用性能更好的目镜,如补偿目镜(K)、平场目镜(P)、广视场目镜(WF)。
照相时选用照相目镜(NFK)。
(二)光学显微镜的成像原理
显微镜的放大是通过透镜来完成的,单透镜成像具有像差,影响像质。
由单透镜组合而成的透镜组相当于一个凸透镜,放大作用更好。
图1—4是显微镜的成像原理模式。
AB为标本
(三)显微镜的性能
显微镜分辨能力的高低决定于光学系统的各种条件。
被观察的物体必须放大率高,而且清晰,物体放大后,能否呈现清晰的细微结构,首先取决于物镜的性能,其次为目镜和聚光镜的性能。
1、数值孔径也叫做镜口率(或开口率),简写为N.A,在物镜和聚光器上都标有它们的数值孔径,数值孔径是物镜和聚光器的主要参数,也是判断它们性能的最重要指标。
数值孔径和显微镜的各种性能有密切的关系,它与显微镜的分辨力成正比,与焦深成反比,与镜象亮度的平方根成正比。
数值孔径可用下式表示:
N.A=n.sin
α
2
式中:
n—物镜与标本之间的介质析射率
α—物镜的镜口角
所谓镜口角是指从物镜光轴上的物点发出的光线与物镜前透镜有效直径的边缘所张的角度,见图1—5。
镜口角α总是小于180°
。
因为空气的折射率为1,所以干燥物镜的数值孔径总是小于1,一般为0.05—0.95;
油浸物镜如用香柏油(折射率为1.515)浸没,则数值孔径最大可接近1.5。
虽然理论上数值孔径的极限等于所用浸没介质的折射率,但实际上从透镜的制造技术看,是不可能达到这一极限的。
通常在实用范围内,高级油浸物镜的最大数值孔径是1.4。
几种物质的介质的折射率如下:
空气为1.0,水为1.33,玻璃为1.5,甘油为1.47,香柏油为1.52。
介质折射率对物镜光线通路的影响见图1—6。
2、分辨力
D可用下式表示:
D=λ/2N.A.
可见光的波长为0.4—0.7微米,平均波长为0.55微米。
若用数值孔为0.65的物镜,则D=0.55微米/2×
0.65=0.42微米。
这表示被检物体在0.42微米以上时可被观察到,若小于0.42微米就不能视见。
如果使用数值孔径为1.25的物镜,则D=2.20微米。
凡被检物体长度大于这个数值,均能视见。
由此可见,D值愈小,分辨力愈高,物象愈清楚。
根据上式,可通过:
(1)减低波长;
(2)增大折射率;
(3)加大镜口角来提高分辨力。
紫外线作光源的显微镜和电子显微镜就是利用短光波来提高分辨力以检视较小的物体的。
物镜分辨力的高低与造象是否清楚有密切的关系。
目镜没有这种性能。
目镜只放大物镜所造的象。
3、放大率:
显微镜放大物体,首先经过物镜第一次放大造象,目镜在明视距离造成第二次放大象。
放大率就是最后的象和原物体两者体积大小之比例。
因此,显微镜的放大率(V)等于物镜放大率(V1)和目镜放大率(V2)的乘积,即:
V=V1×
V2
比较精确的计算方法,可从下列公式求得
M=
△
×
D
F1
F2
F1=接物镜焦距,F2=接目镜焦距
△=光学筒长,D=明视距离(=250毫米)
=接物镜的放大倍数
=接目镜放大倍数
M=显微镜放大倍数
设△=160毫米
F1=4毫米
D=250毫米
F2=150毫米
则M=
=
160
250
=40×
16.7=668倍
4
15
4、焦深:
在显微镜下观察一个标本时,焦点对在某一象面时,物象最清晰,这象面为目的面。
在视野内除目的面外,还能在目的面的上面和下面看见模糊的物象,这两个面之间的距离称为焦深。
物镜的焦深和数值孔径及放大率成反比:
即数值孔径和放大率愈大,焦深愈小。
因此调节油镜比调节低倍镜要更加仔细,否则容易使物象滑过而找不到。
二、显微镜的使用操作及注意事项
显微镜结构精密,使用时必须细心,要按下述操作步骤进行。
(一)观察前的准备
1、显微镜从显微镜柜或镜箱内拿出时,要用右手紧握镜臂,左手托住镜座,平稳地将显微镜搬运到实验桌上。
2、将显微镜放在自己身体的左前方,离桌子边缘约10cm左右,右侧可放记录本或绘图纸。
3、调节光照
不带光源的显微镜,可利用灯光或自然光通过反光镜来调节光照,但不能用直射阳光,直射阳光会影响物像的清晰并刺激眼睛。
将10×
物镜转入光孔,将聚光器上的虹彩光圈打开到最大位置,用左眼观察目镜中视野的亮度,转动反光镜,使视野的光照达到最明亮最均匀为止。
光线较强时,用平面反光镜,光线较弱时,用凹面反光镜。
自带光源的显微镜,可通过调节电流旋钮来调节光照强弱。
4、调节光轴中心
显微镜在观察时,其光学系统中的光源、聚光器、物镜和目镜的光轴及光阑的中心必须跟显微镜的光轴同在一直线上。
带视场光阑的显微镜,先将光阑缩小,用10×
物镜观察,在视场内可见到视场光阑圆球多边形的轮廓像,如此像不在视场中央,可利用聚光器外侧的两个调整旋钮将其调到中央,然后缓慢地将视场光阑打开,能看到光束向视场周缘均匀展开直至视场光阑的轮廓像完全与视场边缘内接,说明光线已经合轴。
(二)低倍镜观察
镜检任何标本都要养成必须先用低倍镜观察的习惯。
因为低倍镜视野较大,易于发现目标和确定检查的位置。
将标本片放置在载物台上,用标本夹夹住,移动推动器,使被观察的标本处在物镜正下方,转动粗调节旋钮,使物镜调至接近标本处,用目镜观察并同时用粗调节旋钮慢慢升起镜筒(或下降载物台),直至物像出现,再用细调节旋钮使物像清晰为止。
用推动器移动标本片,找到合适的目的像并将它移到视野中央进行观察。
(三)高倍镜观察
在低倍物镜观察的基础上转换高倍物镜。
较好的显微镜,低倍、高倍镜头是同焦的,在正常情况下,高倍物镜的转换不应碰到载玻片或其上的盖玻片。
若使用不同型号的物镜,在转换物镜时要从侧面观察,避免镜头与玻片相撞。
然后从目镜观察,调节光照,使亮度适中,缓慢调节粗调节旋钮,使载物台上升(或镜筒下降),直至物像出现,再用细调节旋钮调至物像清晰为止,找到需观察的部位,并移至视野中央进行观察。
(四)油镜观察
油浸物镜的工作距离(指物镜前透镜的表面到被检物体之间的距离)很短,一般在0.2mm以内,再加上一般光学显微镜的油浸物镜没有“弹簧装置”,因此使用油浸物镜时要特别细心,避免由于“调焦”不慎而压碎标本片并使物镜受损。
使用油镜按下列步骤操作:
1、先用粗调节旋钮将镜筒提升(或将载物台下降)约2cm,并将高倍镜转出。
2、在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油。
3、从侧面注视,用粗调节旋钮将载物台缓缓地上升,(或镜筒下降),使油浸物镜浸入香柏油中,使镜头几乎与标本接触。
4、从接目镜内观察,放大视场光阑及聚光镜上的虹彩光圈(带视场光阑油镜开大视场光阑),上调聚光器,使光线充分照明。
用粗调节旋钮将载物台徐徐下降(或镜筒上升),当出现物像一闪后改用细调节旋钮调至最清晰为止。
如油镜已离开油面而仍未见到物象,必须再从侧面观察,重复上述操作。
5、观察完毕,下降载物台,将油镜头转出,先用擦镜纸擦去镜头上的油,再用擦镜纸蘸少许乙醚酒精混合液(乙醚2份,纯酒精3份)或二甲苯,擦去镜头上残留油迹,最后再用擦镜纸擦拭2—3下即可,(注意向一个方向擦拭)。
6、将各部分还原,转动物镜转换器,使物镜头不与载物台通光孔相对,而是成八字形位置,再将镜筒下降至最低,降下聚光器,反光镜与聚光器垂直,用一个干净手帕将接目镜罩好,以免目镜头沾污灰尘。
最后用柔软纱布清洁载物台等机械部分,然后将显微镜放回柜内或镜箱中。
显微镜是精密的光机电一体化的仪器。
为充分发挥其功能,避免发生故障,延长其使用寿命,就应注意显微镜的维护保养。
显微镜的维护、保养及常见故障排除
1.1防高热
显微镜是由精密的机械和光学镜头组成的,由于各种材料热膨胀系数不同,所以显微镜不能在阳光下曝晒,也不能放在靠近火炉和暖气的地方。
只能室温存放,其工作的温度范围一般为5~40℃。
1.2防潮
如果长期受潮,透镜很容易发霉,表面还会腐蚀,所以应在干燥环境下保存。
在31℃时湿度不得大于80%,温度每升高3摄氏度,相对湿度要设法降低10%。
1.3防尘
灰尘不仅会影响成像质量,而且灰尘中往往也带有含酸、碱等腐蚀l生的尘粒,容易腐蚀镜面。
而硬度大的尘粒还可能在擦拭镜头时在镜面上划出伤痕,损坏镜头。
此外,灰尘掉进机械活动部分时容易造成机械部分转动不灵活,甚至损坏。
1.4防腐蚀
显微镜不能接触酸类和碱类物质,也不要与挥发性很强的化学药品及其它有害药品放在一起,
以免腐蚀镜头
1.5防震
显微镜是精密仪器,剧烈的震动会造成精密度的降低。
要轻拿轻放,搁置要平稳,使用时动作应轻柔。
1.6擦拭
(1)机械装置的擦拭
机械装置如有污渍,可用干净的柔软细布擦拭;
如果擦不掉,可用擦镜纸或细绸布蘸点二甲苯擦拭。
应注意不能用酒精、乙醚等化学品,
以免腐蚀装置表面的油漆。
(2)光学镜头的擦拭
一般采用先吹,后刷,再擦拭的方法。
吹,就是用吹气球(或用洗耳球)吹掉镜头表面的附着物。
但不能用口直接吹气。
吹不掉时,可用干净的专用清洁毛刷轻轻地刷。
经上述两种方法处理后镜头表面仍有污物时,用擦镜纸稍蘸一点二甲苯轻轻擦拭。
如果发现镜头发霉长雾时,可用擦镜纸蘸少许无水酒精和乙醚的混合液擦拭,但液体不能太多,停留时间要短,以免渗入镜头内部造成腐蚀。
油镜头每次用过后要及时擦拭,先用干擦镜纸擦一两次,把大部分介质油去掉,再用二甲苯滴湿擦镜纸擦两次,最后再用干擦镜纸擦一次。
1.7其它
光学镜头表面不可用手触摸,
以免污染。
具有张力作用的器件使用完毕后要让它回到自然松弛状态。
任何可调节的部位最好都不要让它处于极端位置。
电源开关不要短时内频繁开关。
显微镜使用间歇中要调低照明亮度。
决不可把标本长时间留放在载物台上,特别是有挥发性物质时更
应注意这一点。
2.1镜头成像质量低
由于镜片膜层损坏,或者是镜片表面生雾生霉,致使成像质量下降。
对于生霉的镜头宜分别用水杨酸甲脂等化学药品熏蒸杀死霉菌的孢子,并擦净之。
对膜层破坏的镜头需更换。
2.2视场中的光线不均匀
首先检查物镜、目镜、聚光镜等光学面是否受污受损,若受污,可用擦镜纸擦净;
若受损,则按前面所述修理。
然后检查物镜是否正在光路中,视场光阑是否聚中、是否太小。
故障原因确定后一般经调整便可解决。
2.3图像模糊不清
如不是因镜头等元件损坏造成的,则检查物镜是否在正确位置,各个光学面是否变脏,根据情况按前面所述处置。
若使用浸液物镜,则有可能浸液使用不当或浸液中混有气泡或杂质
2.4调焦后自动下滑
调焦后自动下滑的原因多数是夹在手轮与齿杆套端面之间的垫圈因长期使用而磨损,引起端面静摩擦力减小所致。
修理时可根据不同结构形式采取相应方法排除。
对于有粗调钮张力调节环的显微镜,有可能是由于张力调节环过松引起的,可调节张力大小来排除。
2.5定位不稳定
这种故障多半是由于定位槽磨损或钢珠松动所致,也有因长期使用后转轴配合松弛引起,若要彻底修复必须换用新的零部件。
以上是作者对显微镜维护、保养及常见故障排除方面的若干体会。
长期使用显微镜的经验告诉我,只有科学正确地使用显微镜,才能发挥它的功能,并延长其使用寿命。
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