口腔培养细胞的取材与分离.ppt

口腔培养细胞的取材与分离.ppt

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培养培养细胞的取材与分离胞的取材与分离取材部位准确严格无菌操作，避免微生物和化学污染尽快培养，24h以内减小损伤，使用锐器，避免撕扯制备标本，以便鉴定体外体外细胞的胞的纯化化人工纯化：

酶消化法、机械刮除法、反复贴壁法、克隆法、培养基限定法、流式细胞仪分离法等自然纯化细胞胞冻存要点：

存要点：

冷冻过程要缓慢冻存细胞必须处在对数生长期细胞复胞复苏要点：

要点：

快速解冻解冻后的细胞应离心去除冷冻保护剂后再接种到培养基中细胞培养的污染、检测与控制微生物污染：

细菌，真菌，支原体等污染污染的途径：

空气、器材、操作、试剂、组织标本微生物污染的检测微生物污染的控制：

抗生素除菌法；加温处理细胞培养常用方法：

胞培养常用方法：

组织块培养法酶消化法第二节口腔医学中相关细胞培养及其特点第二节口腔医学中相关细胞培养及其特点一、牙齿相关细胞一、牙齿相关细胞牙髓细胞（DENTALPULPCELLS）培养方法：

组织块法；酶消化法细胞形态特点免疫组织化学染色体外培养细胞的生长增殖特点功能特点牙髓细胞波形丝蛋白染色波形丝蛋白染色（+）未分化未分化间充充质细胞胞成成纤维细胞胞牙髓细胞体外培养细胞的生长增殖（体外培养细胞的生长增殖（Cellproliferationinvitro）生长增殖较快传代期较短，15-20代（2-4M）可复层生长牙髓细胞功能特点功能特点碱性磷酸酶（alkalinephosphatase,ALP）活性矿化现象（VonKossa）对细胞因子的反应对盖髓剂的反应牙髓细胞培养方法：

组织块培养法；酶消化法细胞形态特点：

成纤维细胞型（与牙周膜细胞类似）免疫组织化学染色：

波形丝蛋白（+）；角蛋白（-）体外培养细胞的生长增殖特点功能特点牙周膜细胞（PERIODONTALLIGAMENTCELLS）培养方法：

组织块法；酶消化法细胞形态特点免疫组织化学染色体外培养细胞的生长增殖特点功能特点牙周膜细胞增殖分化的影响因素原代人牙周膜成纤维细胞传代人牙周膜成纤维细胞免疫免疫组织化学染色化学染色波形丝蛋白染色阳性角蛋白染色阴性牙周膜细胞成纤维样细胞，培养成功率高细胞增殖快体外存活时间长（4-12M）功能特点功能特点分泌功能：

胶原、非胶原蛋白、碱性磷酸酶。

矿化功能收缩功能再生功能根面吸附等二、唾液腺细胞二、唾液腺细胞细胞形胞形态特点特点腺泡上皮细胞：

体外培养的腺泡细胞多呈“铺路石”样排列导管上皮细胞：

导管上皮细胞呈多边形肌上皮细胞：

肌上皮细胞呈梭形或星形唾液腺细胞导管上皮细胞导管上皮细胞HSG细胞系HSG细胞系A小型猪腮腺上皮细胞原代培养（10）B小型猪腮腺上皮细胞alpha淀粉酶免疫组化染色（10）腺泡细胞上皮细胞腺泡细胞上皮细胞免疫免疫组织化学染色化学染色腺泡上皮细胞：

角蛋白、淀粉酶、对氨基水杨酸、导管上皮膜、前角蛋白、单克隆角蛋白、分泌成分阳性反应导管上皮细胞：

角蛋白、上皮膜蛋白、磷酸酐酶抗体染色阳性反应肌上皮细胞：

肌动蛋白、S-100蛋白、肌凝蛋白抗体染色阳性反应三、口腔黏膜细胞三、口腔黏膜细胞口腔黏膜口腔黏膜细胞胞培养方法：

组织块法和酶消化法形态特点：

卵圆形、多边形，呈“铺路石”样单层排列免疫组织化学染色：

波形丝蛋白阴性，角蛋白阳性功能：

分泌大量的胶原蛋白与非胶原蛋白兔口腔黏膜上皮细胞兔口腔黏膜上皮细胞AABBA无血清培养基培养条件下（10）B滋养细胞层培养条件下（4）四、颌骨相关的硬组织细胞四、颌骨相关的硬组织细胞破骨破骨细胞胞形态学特点：

多核巨细胞，体积大组织化学染色：

破骨细胞单克隆抗体呈阳性反应；降钙素反应呈蓝紫色；抗酒石酸磷酸酶反应呈棕褐色功能：

骨吸收功能影响因素：

促进：

破骨细胞激活因子、甲状旁腺素抑制：

-干扰素、降钙素成骨成骨细胞胞形态学特点：

不同培养方法所获得的成骨细胞形态各有差异免疫组织化学染色特点：

BGP、型胶原、碱性磷酸酶活性功能：

成骨作用调节破骨细胞骨吸收作用五、口腔肿瘤细胞五、口腔肿瘤细胞口腔口腔鳞癌癌细胞胞细胞系来源：

鳞状细胞癌标本原代及传代培养生物学特性：

多角形上皮样细胞核/浆比例高，多核仁高贴壁率，克隆形成率和软琼脂集落形成率Cal27cell