薄层色谱TLC的使用指南Word文件下载.docx

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浓度为0~40%的比较常用。

在旋转蒸发器上非常容易除去。

乙醇/己烷或戊烷：

对强极性化合物5~30%比较合适。

二氯甲烷/己烷或戊烷：

5~30%，当其他混合溶剂失败时可以考虑使用。

3）将1~2mL选定的溶剂体系倒入展开池中，在展开池中放置一大块滤纸。

4）将化合物在标记过的基线处进行点样。

我们用的点样器是买来的，此外，点样器也可从加热过的Pasteur吸管上拔下（你可以参照UROP。

在跟踪反应进行时，一定要点上起始反应物、反应混合物以及两者的混合物。

5）展开：

让溶剂向上展开约90%的薄板长度。

6）从展开池中取出薄板并且马上用铅笔标注出溶剂到达的前沿位置。

根据这个算Rf的数值。

7）让薄板上的溶剂挥发掉。

8）用非破坏性技术观察薄板。

最好的非破坏性方法就是用紫外灯进行观察。

将薄板放在紫外灯下，用铅笔标出所有有紫外活性的点。

尽管在5.301中不用这种方法，但我们将采用另一常用的无损方法--用碘染色法。

（你可以参看URO）P。

9）用破坏性方式观测薄板。

当化合物没有紫外活性的时候，只能采用这种方法。

在5.301中，提供了很多非常有用的染色剂。

使用染色剂时，将干燥的薄板用镊子夹起并放入染色剂中，确保从基线到溶剂前沿都被浸没。

用纸巾擦干薄板的背面。

将薄板放在加热板上观察斑点的变化。

在斑点变得可见而且背景颜色未能遮盖住斑点之前，将薄板从加热板上取下。

10）根据初始薄层色谱结果修改溶剂体系的选择。

如果想让Rf变得更大一些，可使溶剂体系极性更强些；

如果想让Rf变小，就应该使溶剂体系的极性减小些。

如果在薄板上点样变成了条纹状而不是一个圆圈状，那么你的样品浓度可能太高了。

稀释样品后再进行一次薄板层析，如果还是不能奏效，就应该考虑换一种溶剂体系。

11）做好TLC标记，计算每个斑点的Rf值，并且在笔记本中画出图样。

TLC显色试剂的选择

显色试剂显色剂可以分成两大类：

一类是检查一般有机化合物的通用显色剂；

另一类是根据化合物分类或特殊官能团设计的专属性显色剂。

显色剂种类繁多，本章只能列举一些常用的显色剂。

l．通用显色剂

硫酸常用的有四种溶液：

硫酸-水（1：

1）溶液；

硫酸-甲醇或乙醇（1：

1）溶液；

1.5mol／L硫酸溶液与0.5-1.5mol／L硫酸铵溶液，喷后110C烤15min,不同有机化合物显不同颜色。

0.5％碘的氯仿溶液对很多化合物显黄棕色。

中性0.05％高锰酸钾溶液易还原性化合物在淡红背景上显黄色。

碱性高锰酸钾试剂还原性化合物在淡红色背景上显黄色。

溶液I：

1%高锰酸钾溶液；

溶液5%碳酸钠溶液；

溶液I和溶液H等量混合应用。

酸性高锰酸钾试剂喷1.6％高锰酸钾浓硫酸溶液（溶解时注意防止爆炸），喷后薄层于180oC加热15~20min。

酸性重铬酸钾试剂喷5%重铬酸钾浓硫酸溶液，必要时150C烤薄层。

5%磷钼酸乙醇溶液喷后120C烘烤，还原性化合物显蓝色，再用氨气薰，则背景变为无色。

⑧铁氰化钾-三氯化铁试剂还原性物质显蓝色，再喷2mol／L盐酸溶液，则蓝色加深。

溶液I:

1%铁氰化钾溶液；

溶液2%三氯化铁溶液；

临用前将溶液I和溶液H等量混合。

2．专属性显色剂由于化合物种类繁多，因此专属性显色剂也是很多的，现将在各类化合物中最常用的显色剂列举如下:

（1）烃类

1硝酸银/过氧化氢检出物：

卤代烃类。

溶液：

硝酸银0.1g溶于水ImL,力口2-苯氧基乙醇100ml，用丙酮稀释至200ml,再加30%过氧化氢1滴。

方法：

喷后置未过滤的紫外光下照射；

结果：

斑点呈暗黑色。

2荧光素/溴检出物：

不饱和烃。

I.荧光素0.1g溶于乙醇IOOmI;

H.5%溴的四氯化碳溶液。

先喷⑴，然后置含溴蒸气容器内,荧光素转变为四溴荧光素（曙红）,荧光消失,不饱和烃斑点由于溴的加成,阻止生成曙红而保留荧光,多数不饱和烃在粉红色背景上呈黄色。

3四氯邻苯二甲酸酐检出物：

芳香烃。

2%四氯邻苯二甲酸酐的丙酮与氯代苯（10：

1）的溶液。

喷后置紫外光下观察。

4甲醛/硫酸检出物：

多环芳烃。

37%甲醛溶液0.2ml溶于浓硫酸l0ml。

（2）醇类

3,5一二硝基苯酰氯检出物：

醇类。

I.2%本品甲苯溶液；

n.0.5%氢氧化钠溶液；

皿.0.002%罗丹明溶液。

先喷⑴，在空气中干燥过夜，用蒸气薰2min,将纸或薄层通过试液（n）30s,喷水洗，趁湿通过（皿）15s，空气干燥，紫外灯下观察。

硝酸铈铵检出物：

I.1%硝酸铈铵的0.2mol/L硝酸溶液；

n.N,N-二甲基-对苯二胺盐酸盐1.5g溶于甲醇、水与乙酸（128m1+25m1+15m1）混合液中，用前将⑴与（n）等量混合。

喷板后于105oC加热5min。

3香草醛/硫酸检出物：

高级醇、酚、甾类及精油。

溶液：

香草醛1g溶于硫酸100ml。

方法：

喷后于120C加热至呈色最深。

④二苯基苦基偕肼'

检出物：

醇类、萜烯、羰基、酯与醚类。

本品15mg溶于氯仿25ml中。

喷后于110C加热5~IOmin。

结果：

紫色背景呈黄色斑点。

（3）醛酮类

品红／亚硫酸检出物：

醛基化合物。

I.0.01%品红溶液，通入二氧化硫直至无色；

n.0.05mol/L氯化汞溶液；

皿.O.05mol/L硫酸溶液。

将I、n、皿以1：

1：

10混合，用水稀释至l00ml。

邻联茴香胺检出物：

醛类、酮类。

本品乙酸饱和溶液。

2,4-二硝基苯肼检出物：

醛基、酮基及酮糖。

I.0.4%本

品的2mol/L盐酸溶液；

本品O.1g溶于乙醇100ml中，加浓盐酸lml。

喷溶液I或H后，立即喷铁氰化钾的2mol/L盐酸溶液。

饱和酮立即呈蓝色；

饱和醛反应慢，呈橄榄绿色；

不饱和羰基化合物不显色。

绕丹宁检出物：

类胡萝卜素醛类。

I.1%-5俭丹宁乙醇溶液；

H.25%氢氧化铵或27%氢氧化钠溶液。

先喷溶液I，再喷溶液干燥。

（4）有机酸类

1溴甲酚绿检出物：

有机酸类。

溴甲酚绿0.1g溶于乙醇500ml和0.1mol/L氢氧化钠溶液5ml。

浸板。

蓝色背景产生黄色斑点。

2高锰酸钾／硫酸检出物：

脂肪酸衍生物。

见通用显色剂酸性高锰酸钾。

3过氧化氢检出物：

芳香酸。

0.3%过氧化氢溶液。

喷后置紫外光（365nm）下观察。

结果：

呈强蓝色荧光。

42，56-二氯苯酚-靛酚钠检出物：

有机酸与酮酸。

0.1%

本品的乙醇溶液。

喷后微温。

蓝色背景呈红色。

（5）酚类

1Emerson试剂（4-氨基安替比林/铁氰化钾（皿））检出物：

酚类、芳香胺类及挥发油。

I.4-氨基安替比林1g溶于乙醇100ml;

II.铁氰化钾（皿）4g溶于水50ml,2用乙醇稀释至100ml。

先喷溶液I,3在热空气中干燥5min,4再喷溶液H,5再于热空气中干燥5min，6然后将板置含有氨蒸气（25％氨溶液）的密闭容器中。

斑点呈橙-淡红色。

挥发油在亮黄色背景下呈红色斑点。

7Boute反应检出物：

酚类、氯、溴、烷基代酚。

将薄层置有N02蒸气（含浓硝酸）的容器中3〜10min,8再用NH2蒸气（浓氨液）处理。

9氯醌（四氯代对苯醌）检出物：

酚类。

1％本品的甲苯溶液。

10DDQ（二氯二氰基苯醌）试剂检出物：

2%本品的甲苯溶液。

11TCNE（四氰基乙烯）试剂检出物：

酚类、芳香碳氢化物、杂环类、芳香胺类。

0.5%〜1%本品的甲苯溶液。

12Gibb'

s（2,136-二溴苯醌氯亚胺）试剂检出物：

溶

液：

2%本品的甲醇溶液。

⑦氯化铁检出物：

酚类、羟酰胺酸。

溶液：

1%〜5%氯化铁的0.5mol／L盐酸溶液。

酚类呈蓝色、羟酰胺酸呈红色。

（6）含氮化合物

1FCNP硝普钠/铁氰化物）试剂检出物：

脂肪族含氮化物，如氨基氰、胍、脲与硫脲及其衍生物,肌酸及肌酐。

10%氢氧化钠溶液、10%硝普钠溶液、10%铁氰化钾溶液与水按1：

3混合,在室温至少放置20min,冰箱保存数周，用前将混合液与丙酮等体积

混合

2Dragendoff（碘化铋钾试剂）试剂检出物：

芳香族含氮化合物，如生物碱类、抗心律不齐药物。

I．碱式硝酸铋0.85g溶于10ml冰醋酸及40ml水中；

碘化钾8g溶于水20ml中。

将上述溶液I及H等量混合，置棕色瓶中作为储备液，用前取储备液lml、冰醋酸2ml与水l0ml混合。

呈橘红色斑点。

4-甲基伞形酮检出物：

含氮杂环化合物。

本品0.02g溶于乙醇35ml，加水至100ml。

喷板后置25%氨水蒸气的容器中，取出后于紫外灯（365nm）下观察。

碘铂酸钾检出物：

生物碱类及有机含氮化物。

10%六氯铂酸溶液3ml与水97ml混合，加6%碘化钾溶液，混匀。

临用前配制。

硫酸高铈铵／硫酸检出物：

生物碱及含碘有机化物。

硫酸铈1g混悬于4ml水中，加三氯乙酸1g,煮沸，逐滴加入浓硫酸直至混浊消失。

喷后薄层于1l0oC加热数分钟。

阿朴吗啡、马钱子碱、秋水仙碱、罂粟碱、毒扁豆碱与有机碘化物均能检出⑥Ehrlich（对二甲氨基苯甲醛／盐酸）试剂检出物：

吲哚衍生物及胺类。

1%本品的浓盐酸溶液与甲醇按1：

1混合。

喷后板于50oC加热20min。

呈不同颜色的斑点。

（7）胺类

1硝酸/乙醇检出物：

脂肪族胺类。

50滴65%硝酸于乙醇

100ml中。

需要时120oC加热。

22,6-二氯醌氯亚胺检出物：

抗氧剂、酰胺（辣椒素）、伯、仲脂肪胺、仲、叔芳香胺、芳香碳氢化物、药物、苯氧基乙酸除草剂等。

新鲜制备的0.5%〜2%本品乙醇溶液。

喷后薄层于110oC加热10min,再用氨蒸气处理。

3茜素检出物：

胺类。

0.1%本品的乙醇溶液。

4丁二酮单肟/氯化镍检出物：

I.丁二酮单肟1.2g溶于热水35ml中，加氯化镍0.95g,冷却后加浓氨水2ml;

H.盐酸羟胺0.12g溶于200ml水中。

将溶液I及H混合，放置1天,过滤。

（5）Pauly（对氨基苯磺酸）试剂检出物：

酚类、胺类和能偶合的杂环化合物。

磺酸4.5g溶于温热的12mol／L盐酸45ml中,用水稀释至500ml，取10ml于冰中冷却，加4.5%亚硝酸钠冷溶液lOml，于OoC放置15min。

用前加等体积10%碳酸钠溶液。

硫氰酸钻（II）.检出物：

生物碱、伯、仲、叔胺类。

硫氰酸

铵3g与氯化钴1g溶于水20ml。

白色至粉红色背景上呈蓝色斑点,2h后颜色消退。

若将薄层喷水或放入饱和水蒸气容器内,可重现色点。

1,2-萘醌-4-磺酸钠检出物：

芳香胺类。

本品0.5g溶于95ml水，加乙酸5ml，滤去不溶物即得。

喷后反应30min显色。

葡萄糖/磷酸检出物：

葡萄糖2g溶于85%磷酸

l0ml与水40ml混合液中,再加乙醇与正丁醇各30ml。

喷后于115C加热I0min。

8）硝基及亚硝基化合物

1a-萘胺检出物：

3,5一二硝基苯甲酸酯、二硝基苯甲酰胺。

I.O.5%a-萘胺乙醇溶液；

II.10%氢氧化钾甲醇溶液。

方法：

先喷溶液I，再喷溶液I。

呈红褐色斑点。

②二苯胺/氯化钯检出物：

亚硝胺类。

1.5%二苯胺乙醇溶液与0.1g氯化钯的0.2%氯化钠溶液lOOml，按5：

1混合。

喷后置紫外光（254nm）下观察。

显紫色斑点。

（9）氨基酸及肽类

1茚三酮检出物：

氨基酸、胺与氨基糖类。

本品O.2g溶于乙醇l00ml中。

喷后于110oC加热。

呈红紫色斑点。

2茚三酮/乙酸镉检出物：

氨基酸及杂环胺类。

茚三酮1g

及乙酸镉2.5g溶于l0ml冰醋酸中，用乙醇稀释至500ml。

喷后于120oC加热20min。

31,2-萘醌-4-磺酸钠检出物：

氨基酸。

临用前将本品O.02g溶于5%碳酸钠l00ml中。

喷后室温干燥。

不同氨基酸呈不同色点。

4靛红/乙酸锌检出物：

氨基酸与某些肽类。

靛红1g与乙酸锌1g溶于95%异丙醇l00ml中，加热至80oC,冷却后加乙酸1ml,冰箱保存。

喷后于80〜85"

C加热30min。

5茚三酮/冰醋酸检出物：

二肽及三肽。

1%茚三酮吡啶溶

液与冰醋酸按5：

喷后于l00oC加热5min。

6香草醛检出物：

氨基酸及胺类。

I．本品1g溶于丙醇50ml中;

I．1mol／L氢氧化钾溶液lml,用乙醇稀释至lOOml。

先喷溶液I后于110oC干燥lOmin，再喷溶液于110oC再干燥

lOmin，于紫外光（365nm）下观察。

（10）甾类

1香草醛/硫酸检出物：

甾体激素。

1%香草醛浓硫酸溶液。

喷后于105C加热5min。

2氯化锰检出物：

雌激素类。

氯化锰O.2g溶于含硫酸2ml的甲醇60ml中。

喷后置紫外光（365nm）下观察。

3高氯酸检出物：

5%高氯酸甲醇溶液。

喷后于110C加热5min,置紫外光（365nm）下观察。

4三氯化锑/乙酸检出物：

甾类与二萜类。

三氯化锑20g溶于乙酸20ml与氯仿60ml混合液中。

喷后于100oC加热5min,紫外光长波下观察。

二萜类斑点呈红黄-蓝紫色。

5对甲苯磺酸检出物：

甾族化合物、黄酮类与儿茶酸类。

20%本品的氯仿溶液。

喷后于100C加热数分钟，紫外光长波下观察。

斑点呈荧光。

6氯磺酸/乙酸检出物：

三萜、甾醇与甾族化合物。

氯磺酸5ml在冷却下加乙酸l0ml溶解。

喷后于130oC加热5~l0min,置紫外光长波下观察。

结果；

斑点显荧光。

（11）糖类

①茴香胺、邻苯二酸试剂检出物：

碳氢化合物。

1.23g茴香胺及1.66g邻苯二酸于l00ml95%乙醇中的溶液。

喷雾或浸渍。

己糖呈绿色、甲基戊糖呈黄绿色、戊糖呈紫色、糖醛酸

呈棕色

②四乙酸铅／2，7一二氯荧光素检出物：

甙类、酚类、糖酸类溶液：

I.2%四乙酸铅的冰醋酸溶液；

H.1%2,7一二氯荧光素乙醇

溶液。

取溶液I各5ml混匀，用干燥的苯或甲苯稀释至200ml,试剂溶液只能稳定2h。

3邻氨基联苯/磷酸检出物：

糖类。

O.3g邻氨基联苯加85%磷酸5ml与乙醇95ml。

喷板后llOoC加热15~20min。

斑点呈褐色。

4苯胺/二苯胺/磷酸检出物：

还原糖。

4g二苯胺、4ml苯胺与20ml85%磷酸共溶于200ml丙酮中。

喷后于85C加热l0min。

产生各种颜色。

1,4-己醛糖、低聚糖呈蓝色。

5双甲酮/磷酸检出物：

酮糖。

双甲酮（5,5-二甲基环己烷-1,3-二酮）10.3g溶于90ml乙醇与l0ml85%磷酸中。

喷板后于110oC加热15〜20min。

日光下观察，白色背景上呈黄色斑点，紫外光长波下呈蓝色荧光。

6联苯胺/三氯乙酸检出物：

0.5g联苯胺溶于l0ml乙酸，再加10ml40%三氯乙酸水溶液，用乙醇稀释至100ml。

喷后置紫外光下照射15min。

斑点呈灰棕-红褐色。

7对二甲氨基苯甲醛/乙酰丙酮检出物：

氨基糖类。

I.5ml50%氢氧化钾溶液与20ml乙醇混匀，取此溶液0.5ml，加乙酰丙酮0.5ml与正丁醇50ml的混合液l0ml,此两种溶液均需新鲜配制,临用前混合；

II.1g对二甲氨基苯甲醛溶于30ml乙醇中，再加30ml

浓盐酸，需要时此溶液可用正丁醇180ml稀释。

先喷I后于

105oC加热5min,再喷然后于90C干燥5min。

斑点呈红

论坛问答：

1在薄层层析中,展开剂的选择很重要,我从事合成时间不长,每次选展开剂的时候都不是很恰当,请各位经验丰富的老师赐教!

一种简单的办法是根据你产的溶解性选择一种极性最强的溶剂学（如醇类,乙氰等）,再根据你实际展开的情况慢慢加入极性弱的溶剂（如四氯化碳、石油醚、二氯甲烷等）调节体系的极性。

以得到最好的展开效果。

把我的祖传秘方告诉你吧

PE（60-90）

EtAc/PE=1:

2

EtAc/PE/AcOH=15:

5:

1

EtAc/AcOH/n-Butanol/H2O=2:

1:

8年来我用这四种体系,没有出现过什么问题.我一直在用的是乙酸乙酯：

环已烷,不断调节比例,直到有满意的Rf值,有拖尾时可能要加酸或碱,我一般乙酸和三乙胺。

我用了好几年了,都还好。

不妨一试

从展开的角度上来看,确实能行,如果是分离就不一定行了

分离的话只好调低一点Rf,还是可以的