水产动物组织胚胎学实验指导书Word下载.docx
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3.在显微镜下,对照实物切片,如何科学地、真实地掌握生物绘图技术。
4.掌握组织切片技术的基本原理和制作一般组织学切片标本的程序。
(二)基本要求
1.能熟练掌握显微镜操作技术。
2.能按实验指导书提供的方法进行验证性实验。
三、实验考核方式及方法
1.实验前要求对实验内容先进行预习。
讲解实验内容时可采用提问的方式进行检查了解。
2.每次实验结束时,对实验的基本内容要进行实地检查。
3.每次实验要求绘2—4个图。
作为当日实验作业上交。
4.对作业图进行认真批改。
成绩计入30%的平时成绩。
5.实验前要对上次实验中发现的问题进行讲评;
不及格者要补考。
平时成绩不及格不能参加期末考试。
6.综合实验每人要求交一张自己制作的切片和一张血液涂片,并进行综合评分。
四、实验项目一览表
水产动物组织胚胎学实验项目一览表
序号实验项目名称实验类型实验要求适应专业学时
1显微镜使用及细胞、上皮组织、结缔组织的观察验证必做水产养殖4
2血液涂片制作、血细胞、肌肉、神经组织观察技能必做水产养殖4
3血管、呼吸、泌尿器官的观察验证必做水产养殖4
4消化、免疫、内分泌器官的观察验证必做水产养殖4
5生殖器官、鱼类早期胚胎发育的观察验证必做水产养殖4
五、实验课注意事项
1、实验前应认真预习实验指导书,明确实验目的、要求,了解实验内容和方法,熟悉操作环节,以提高实验效果。
2、实验前仔细清点实验材料。
实验后须经指导教师检查无误,方可离开实验室。
如有损坏,应及时报告指导老师,认真填写好损坏的物品登记。
3、实验时应按照指定方法观察、操作,培养严肃认真一丝不苟的科学态度和工作作风。
4、认真记录实验结果,按时完成实验报告。
作业力求简明扼要,清晰正确,绘图用实验报告纸,绘图要认真,不得草率和照抄。
注明绘物及其各部分的名称,实验报告不合要求者,教师有权要求重做。
5、爱护实验仪器及用具,要特别注意显微镜和解剖镜的正确使用和保护。
遇有故障或损坏时,应立即报告指导老师。
6、爱护实验材料,不得浪费和随意丢弃。
珍惜实验标本。
节约药品。
实验材料、用具等,用后要及时清整,物归原处,由值日生统一归整交还老师。
7、遵守实验秩序,保持室内安静,有事先报告,未经指导老师允许,不得擅自提前离开实验室。
8、每次实验结束后,由值日生作好清洁整理工作,要特别注意水、电等的安全检查,关好门窗,方可离开实验室。
9、实验课不认真完成,未经指导教师通过者,不得参加期末考试,成绩以“不及格”论处。
10、每次实验成绩作为平时成绩加权到课程终成绩。
第一部分课堂实验
实验一、显微镜的构造和使用、细胞、上皮组织、结缔组织的观察
(一)实验目的和要求
1、通过实验过程中的操作和观察来验证和巩固理论知识,加深学生对理论课内容的理解。
2、通过对各种组织切片的观察,逐步培养学生学会观察、比较、分析和综合各种现象的科学方法,培养学生独立思考和独立工作的能力。
3、进行本学科的基本技能训练,使学生能够熟练使用光学显微镜,了解组织和器官切片的一般制作过程,学会在光镜下正确绘图和描述观察到组织或器官的形态结构特点。
4、掌握多种细胞、被覆上皮、疏松结缔组织的结构特点。
(二)教学仪器
多媒体教学互动设备,显微镜、切片,以及相关的挂图、相关的教学课件等。
(三)实验内容
一、光学显微镜的构造、使用方法和保护
1.显微镜的主要构造:
(1)镜筒、物镜转换器、滤片槽、载物台、粗调焦手轮和细调焦手轮。
(2)照明器:
是显微镜的灯光照明系统,直接组装在镜座内部。
(3)集光器:
是一个装在载物台下可以沿着光轴方向垂直移动的透镜系统,它的主要作用时把照明光线聚集在被观察的物体上。
(4)光阑:
在集光器上装有孔径光阑,它对物像的质量和分辨力的大小有着重要的作用。
(5)物镜:
分低倍、高倍和油镜三种。
低倍镜是4×
和10×
,高倍镜是40×
,油镜是100×
。
(6)目镜:
常用放大倍数为10×
的目镜,物像的放大倍数=目镜倍数×
物镜倍数。
目镜内有一黑色指针,可作指示镜下结构。
2.显微镜的使用方法:
(1)取镜:
拿显微镜时必须一手紧握镜臂,另一手平托镜座底,切忌单手提取以免目镜脱落。
(2)放置组织切片:
将组织切片的盖玻片朝上,放在载物台上,然后用标本夹固定。
(3)调节焦距:
从侧面观察低倍镜头,旋转粗调焦手轮使镜头接近玻片为止,从目镜观察,同时旋转细调焦手轮,边旋转边观察,直到视野物像清晰为止。
(4)转换高倍镜:
需转换高倍镜头时,必须先在低倍镜下将要观察的部分移到视野正中,然后直接转换高倍镜头,此时镜下隐隐约约可见物像,再稍微转动细调焦手轮即可看清楚物像。
(5)收尾工作:
显微镜用毕,取下玻片,物镜转成“八”字形,下降镜头使之轻触载物台,最后将显微镜放入镜箱。
3.使用显微镜的注意事项:
(1)不能拆卸显微镜的任何部件或与其他显微镜调换部件,使用前后要检查各零部件是否齐全,如发现损坏应及时报告教师,以便修理。
(2)目镜、物镜和玻片要保持干净。
(3)不要随便用其它抹布或普通纸擦镜面。
必要时可用擦镜纸,蘸少许二甲苯擦去镜头的污物。
二、切片观察
(一)单层柱状上皮
取材:
鱼肠和猪的十二指肠,
染色:
HE
1.肉眼观察
切片呈长条状。
有凹凸不平突起的一面是腔面,突起称皱襞。
皱襞表面有一层蓝色结构,即为单层柱状上皮。
2.低倍镜观察
在绒毛表面找到单层柱状上皮。
上皮有两个面:
游离面即为空肠腔面,没有任何组织相连接,其对应的另一面是基底面,与结缔组织相连接。
移动切片,选择蓝色椭圆形或杆状细胞核排列整齐的部位转高倍镜观察。
3.高倍镜观察
上皮细胞呈柱状,胞质着浅红色,胞核呈椭圆形或长杆状,着紫蓝色,排列于细胞基底部(思考:
单层柱状上皮还分布在哪里?
有何主要功能?
)
(二)单层扁平上皮
单层扁平上皮正面观
动物肠系膜,铺片。
镀银
铺片为一小块方形棕黄色组织,色深的细条状结构是肠系膜中的毛细血管和结缔组织,淡黄色部位是单层扁平上皮。
可见许多不规则的黑色或棕色网格(实为细胞间质,嗜银颗粒沉积在细胞间质而形成的)。
网格内即为单层扁平上皮细胞。
单层扁平上皮细胞呈多边形,两相邻细胞交界处呈棕色锯齿状,细胞中央有一圆形或椭圆形白色结构即为细胞核的位置。
(三)复层扁平上皮
动物食管和乌鳢皮肤
1.肉眼观察
切片是食管横切面,管腔面收缩形成许多皱襞,使管腔变小而不规则。
沿管腔表面有一层紫蓝色结构,即为复层扁平上皮。
1.低倍镜观察
在管腔面找到复层扁平上皮,其细胞层数约为数十层,基底面呈波浪状以结缔组织连接。
结缔组织形成乳头(色较浅)突到基底层的凹面(为什么?
)。
从基底面到游离面,细胞分界不清,但可从细胞核的形态变化观察其特点。
2.高倍镜观察
从基底面到游离面观察各层上皮细胞形态特点,基底层细胞矮柱状(一层),核呈卵圆形,着色深,排列紧密,胞质很少(有些部位基底层细胞核可见2~3层,是因为切斜了;
有些部位在上皮内可见圆形或不规则形的浅色结构,是因上皮切斜,切到了深处突入基底层凹面的结缔组织乳头,乳头周围染色较深部分即为上皮基底层细胞)。
中间部有几层多边形细胞,分界清楚(细胞间的分界线实为细胞间质),胞质着色浅,胞核圆,位细胞中央。
近游离面有数层扁平细胞,胞核椭圆形,其长轴与表面平行。
(四)疏松结缔组织铺片
小鼠肠系膜铺片。
混合染色
为显示疏松结缔组织中巨噬细胞的形态特点,在活体小鼠皮下注射台盼蓝染料,存活数日后处死,取其肠系膜,用分离针分离平铺于玻片上,经固定、脱水和复合染色后即可在镜下观察。
这种铺片在光镜下可见有两种纤维(胶原纤维、弹性纤维)和两种细胞(肥大细胞、巨噬细胞)。
有时可见成纤维细胞。
1.肉眼观察:
铺片呈紫红色不规则组织块。
选择薄而较透明的部位观察。
较粗的粉红色纤维是胶原纤维。
混杂在胶原纤维之间的细如发丝的紫色纤维即为弹性纤维。
弹性纤维常为单条直行,有分支,交织成网,断端常卷曲。
网状纤维用浸银法方可显示,故此片看不到。
上述纤维之间有肥大细胞和巨噬细胞。
胞质中可见紫蓝色颗粒的是肥大细胞。
3.高倍镜观察:
选择纤维较分散、细胞较多的部位观察,可见下列细胞:
①成纤维细胞:
只见浅蓝色椭圆形细胞核,胞核中有1~2个核仁。
细胞质染色很浅,隐约可见淡紫色的细胞轮廓,有的细胞质模糊不清。
此种细胞量最多。
②巨噬细胞:
细胞轮廓清楚,形态多样,呈卵圆形或不规则形;
细胞核小着色深(注意与成纤维细胞比较),胞质中可见吞噬的紫蓝色台盼蓝染料颗粒。
③肥大细胞:
细胞三五成群分布,胞体呈圆形或卵圆形,胞质中充满着色深粗大的具有异染性的嗜碱性颗粒(因颗粒太密集而不能分辨)。
实验二、血液涂片的制作,血细胞、肌肉组织、神经组织的观察
1、掌握Giemsa染色血涂片方法,红细胞及各类白细胞的形态;
熟悉血小板的形态。
2、掌握骨骼肌、心肌、平滑肌在不同切面的形态结构。
3、掌握神经元的形态结构特点。
4、掌握有髓神经纤维的结构特点。
一、血涂片的制作
1、Giemsa染液配制
称取0.50g姬姆萨染料放入研钵中,边研磨边加入33ml丙三醇,使之研磨成
糊状,最后加33ml甲醇混匀,放56℃温箱内1~24h,即为姬姆萨贮存液。
临用前在1ml姬姆萨贮存液中加入磷酸缓冲液20ml,配成使用液。
2、血液涂片制作:
从鱼尾静脉(或牛蛙腹部静脉)取血0.01ml于载玻片上常规涂片,自然干燥。
Giemsa染色:
将涂片置于纯甲醇中固定1~3min,自然晾干;
稀Giemsa染液(10滴Giemsa染液原液+10ml磷酸缓冲液)染色15min;
用蒸馏水冲洗,干燥后,可用人工树胶封片或不封,即可进行观察。
二、血细胞的观察
人外周血液涂片
Giemsa或Wright染色
1、肉眼观察
经染色后的血涂片为淡橘红色,因制作方法不同于切片,其外观也有别于切片材料,涂片标本一般较细腻、平整,稍加注意即可辨认。
2、低倍镜观察
数量众多的红细胞分散或成群附着于玻片上,在红细胞群之间可看到细胞核染色成紫蓝色的白细胞。
挑选白细胞较集中的区域,转高倍镜对各类血细胞逐一仔细观察。
3、高倍镜观察
⑴红细胞:
为镜下主要细胞,体积大小较接近,细胞无核,多数细胞周边着色较深、中央着色浅。
⑵白细胞:
观察时应根据细胞大小、胞质内特殊颗粒的类型、胞质染色特征和细胞核形态及分叶特征,区分出五种不同类型的白细胞。
中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞。
①中性粒细胞:
数量最多,细胞核呈弯曲杆状或分叶,分叶2~5叶,叶间有染色质丝相连,胞质浅红色,胞质内隐约可见数量较多、细小均匀染成淡紫红色的颗粒。
②嗜酸粒细胞:
标本上较难找到。
胞体较大,数量少于中性粒细胞,核形态较饱满,以2叶多见,核染色较中性粒细胞浅,且核外形较丰满。
胞质内充满粗大、均匀、橘红色颗粒。
③嗜碱性粒细胞:
数量少,故标本上及难找到。
细胞大小与中性粒细胞相近。
细胞核着色浅,呈S型或不规则形,轮廓模糊。
胞质内可见分布不均、形态不规则、大小不等的染成紫蓝色颗粒,常覆盖核。
④淋巴细胞:
可以观察到中、小淋巴细胞两种。
小淋巴细胞数量较多,小淋巴细胞圆形,一侧常可见到凹痕,体积大小与红细胞相近,核大圆形,核因异染色质多聚集成块而染成深蓝色,少量天蓝色胞质环绕胞核。
中淋巴细胞体积较大,以卵圆形多见,核染色质略稀疏,染色较浅,胞质较小淋巴细胞多,胞质内可见少量嗜天青颗粒。
大型淋巴细胞在血涂片中不易看到。
⑤单核细胞:
体积较大,细胞形态卵圆、椭圆多见,细胞核呈肾形或马蹄形,但核内异染色质量较少,染色较浅,呈网格状。
胞质较丰富,染色灰蓝,胞质内可见少量嗜天青颗粒。
⑶血小板:
体积较小,形态多样,在制作血涂片时,常发生凝集,造成分布上的不均等和成群现象,观察时应注意。
4.高倍镜观察:
三、骨骼肌、心肌、平滑肌
(一)骨骼肌
兔骨骼肌
HE
1.肉眼观察
切片上有两块标本,长条形的为纵切面,椭圆形的为横切面。
纵切面:
重点观察骨骼肌纤维的结构。
2.低倍镜观察
骨骼肌纤维呈长带状,相互平行排列。
肌纤维之间有少量结缔组织、成纤维细胞核及毛细血管。
3.高倍镜观察(适当将视野调暗)
每条肌纤维有许多椭圆形的核,位于肌纤维的周边。
注意与周围结缔组织细胞核相区别,骨骼肌纤维的核位于肌膜内侧。
肌浆丰富。
每条肌纤维上可见明暗相间的横纹。
色深的是暗带(A带),暗带中间有色浅的H带。
明带(I带)色浅,其中央有—条细线为Z线。
横切面:
重点观察骨骼肌做为器官的结构。
1.低倍镜观察
标本为一块肌肉器官的横切面,表面有致密结缔组织包绕为肌外膜(即深筋膜);
肌外膜伸入肌肉内,形成隔,包裹着每一束肌纤维形成肌束膜;
肌束的大小不等,形状不规则。
每条肌纤维周围有薄层结缔组织为肌内膜。
(不易分辨)
2.高倍镜观察
肌纤维的横切面呈多边形,大小不一。
核位于肌膜下,呈圆形或卵圆形。
肌纤维内有许多红色点状的肌原纤维,肌原纤维之间是肌浆,呈粉红色。
(二)心肌
动物心脏
1.肉眼观察:
标本为心脏壁的一部分,绝大部分着色较红为心肌。
由于心肌纤维排列方向不一致,有纵、横、斜等切面,故要全面观察标本,熟悉各种切面的部位。
肌纤维之间有结缔组织和毛细血管。
3.高倍镜观察:
注意与骨骼肌相区别。
心肌纤维较骨骼肌纤维细而短,有分枝,相互吻合成网。
细胞核卵圆形,位于肌纤维的中央。
有时可见双核。
细胞核周围肌浆丰富,故着色浅。
有暗带和明带构成的横纹,但不如骨骼肌明显。
相邻肌纤维的连接处深暗的线条即闰盘。
横切面:
心肌纤维呈圆形或不规则,大小不等。
肌原纤维呈点状,着红色,分布在肌纤维的周边。
细胞核位于肌纤维中央,呈圆形,有的未见核。
肌浆着色甚浅,由于肌浆在核的周围较多,故在末切到核的细胞中央往往可见浅染区。
(三)平滑肌
动物空肠
小肠壁光滑面一侧,染成红色的是平滑肌。
平滑肌分两层。
纵切面平滑肌纤维呈长梭形,横切面平滑肌纤维呈大小不一圆点形。
平滑肌呈梭形,相邻的肌纤维彼此交错相互嵌合,肌浆染色红呈均质性;
核位于细胞的中央,呈杆状,由于细胞收缩使核变形而呈螺旋形或边缘为锯齿形,染色质较少,故核着色较浅。
平滑肌纤维呈大小不等的圆形,有的切面中央有圆形的核,有的切面不见核。
四、多极神经元、有髓神经纤维和神经、运动终板、环层小体
(一)多极神经元
猫的脊髓
脊髓横切面为椭圆形。
周围浅红色的是白质。
灰质居中,着色较红,呈蝴蝶形,两个较短粗的突起为前角,两个较细长的突起为后角。
光镜辨认灰质和白质及灰质的前角和后角。
前角中有许多体积很大的细胞,着紫蓝色,为前角的神经元的胞体。
后角的神经元较小。
神经元之间可见许多小而圆的细胞核是神经胶质细胞的核。
选择一个切面结构完整的神经元置于高倍镜下观察。
前角多极神经元属于运动神经元。
①胞体:
大,呈多角形,伸出数个突起。
核位于细胞中央,大而圆;
常染色质多,染色浅,呈空泡状;
核仁明显,圆而大,着红色。
胞质中含许多蓝紫色块状或颗粒状的尼氏体。
②树突:
可观察到一个或数个树突的根部,树突从胞体发出时较粗大,逐渐变细,内含尼氏体。
③轴突:
只有一个(不易切到)。
轴突自胞体发出处的胞质呈圆锥形,为轴丘。
轴丘、轴突均不含尼氏体。
(二)有髓神经纤维和神经
猫的坐骨神经
1.肉眼观察:
切片上有两块标本,长条状的是神经的纵切面。
圆形的是横切面。
神经的纵切面:
2、低倍镜观察:
许多神经纤维平行排列,由于排列较紧密,故每条神经纤维界限不易辨认。
神经纤维之间有极薄结缔组织。
3、高倍镜观察:
轴突:
神经纤维的中央一条呈紫红色的线。
髓鞘:
位于轴突两侧,呈粉红色稀疏网状结构(因制片时,髓鞘的类脂质被溶解,仅残留蛋白质)。
神经膜:
位于髓鞘两侧,为红色的细线。
某些部位含长椭圆形的施万细胞核,染色较浅。
郎飞结:
每条神经纤维的一定距离上,髓鞘中断,形成一缩窄,呈十字状。
神经纤维之间尚有少量结缔组织,此即神经内膜,内含成纤维细胞,核小且染色较深,可与神经膜细胞相区别。
神经的横切面:
神经为神经纤维与结缔组织组成的器官。
神经外包裹的致密结缔组织为神经外膜;
神经内有多个圆形的神经束,神经束周围的致密结缔组织形成神经束膜;
神经束膜的结缔组织伸入神经束内,分布在每条神经纤维周围即是神经内膜(低倍镜下不易辨认)。
3、高倍镜观察
着重观察有髓神经纤维的横切面。
神经纤维呈圆形,粗细不一;
中央紫红色小点为轴突;
轴突的周围是髓鞘,呈红色网状结构;
髓鞘外面是神经膜,很薄,染成红色,有的尚有施万细胞的胞核,呈弯月形。
(三)、运动终板
蛇肋间肌
氯化金浸染压片
镜下观察:
骨骼肌纤维呈淡紫色,其上面可见染成黑色的神经纤维。
神经纤维末端呈扣状或爪状紧贴肌膜,形成运动终板。
(四)、环层小体
猫趾枕皮
H-E
在皮下组织内,圆形或椭圆形的结构。
环层小体中央有一条均质状的圆柱体,圆柱体周围有许多扁平细胞同心圆排列。
实验三、血管、呼吸、泌尿器官的观察
1.掌握大、中、小动脉的管壁组织结构,熟悉动脉与静脉的组织结构区别,掌握毛细血管管壁的组织结构。
2掌握肺、鳃的组织结构。
3.掌握肾的组织结构
一、动脉、静脉、毛细血管
(一)大动脉
猪的主动脉
管壁厚,凹面为腔面,凸面为外膜面。
2.低倍镜观察:
可分为三层,但分界不明显。
(1)内膜:
最薄,由内皮和内皮下层构成。
内皮下层较厚,内弹性膜与中膜的弹性膜相连,故与中膜分界不明显。
(2)中膜:
最厚,主要由数十层环行排列的弹性膜组成,在标本上为红色发亮呈波纹状走行,在弹性膜之间夹有平滑肌纤维。
(3)外膜:
较厚,主要由结缔组织构成,其中有小血管和神经,外弹性膜不明显。
3.高倍镜观察
分为三层。
内皮:
仅见核突向管腔。
内皮下层:
较中动脉厚,含胶原纤维、弹性纤维及平滑肌纤维。
内弹性膜:
有数层,与中膜的弹性膜相连,故与中膜无明显的界限。
可见40~70层平行排列的弹性膜,呈波浪形,着粉红色,折光性强。
其间夹有梭行的平滑肌纤维,其核呈杆状。
外弹性膜与中膜分界不明显,结缔组织中含营养血管和神经的断面。
(二)中动脉和中静脉
人中动脉和中静脉
标本中有两个较大的血管横切面。
管壁较厚,管腔较小而圆是中动脉。
管壁较薄,管腔较大而不规则的是中静脉。
中动脉
管壁分三层,界限清楚。
由腔面向外观察。
很薄,以一层亮红色波浪状的内弹性膜与中膜分界。
最厚,主要由环行平滑肌组成。
厚度近似中膜,着色较浅,主要由结缔组织组成。
外膜与中膜交界处有外弹性膜。
由内皮、内皮下层和内弹性膜构成。
一层内皮细胞核排列在腔面,并突向管腔,胞质不清楚。
位于内皮下方,由于内皮下层的结缔组织很薄,看似内皮与波浪状的内弹性膜直接相帖。
呈波浪状(血管收缩所致),红色、折光性强。
最厚。
主要由几十层环行排列的平滑肌纤维构成,核呈杆状或椭圆形。
肌纤维之间有少量弹性纤维和胶原纤维。
与中膜一样厚,由结缔组织构成。
在肌组织与结缔组织交界处有许多纵行的弹性纤维,在标本上多为横切,染色较淡,为外弹性膜。
外膜的结缔组织中所含纤维多为纵行,还有营养小血管的断面和神经。
中静脉
低倍镜观察:
注意与中动脉相区别。
很薄,由于内弹性膜不明显,故与中膜分界不清。
内皮细胞核突向管腔。
较薄,主要由稀疏的环行平滑肌束组成,肌束间有结缔组织。
较中膜厚,由结缔组织组成,无外弹性膜,有时含成束纵行平滑肌的横切面,还有营养小血管的横断面。
(三)小动、静脉
动物血管的外膜
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- 水产 动物 组织 胚胎学 实验 指导书