猴子水痘带状疱疹病毒VZV酶联免疫分析Word格式文档下载.docx

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1个

酶标包被板

1×

48

96

2-8℃保存

标准品：

135pg/ml

×

1瓶

标准品稀释液

酶标试剂

3ml×

6ml×

样品稀释液

显色剂A液

显色剂B液

终止液

3ml×

6ml×

浓缩洗涤液

（20ml×

20倍）×

30倍）×

样本处置及要求：

1.血清：

室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

认真搜集上清，保留进程中如显现沉淀，应再次离心。

2.血浆：

应依照标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

认真搜集上清，保留进程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3.尿液：

用无菌管搜集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

认真搜集上清，保留进程中如有沉淀形成，应再次离心。

胸腹水、脑脊液参如实行。

4.细胞培育上清：

检测分泌性的成份时，用无菌管搜集。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

认真搜集上清。

检测细胞内的成份时，用PBS（）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。

通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。

保留进程中如有沉淀形成，应再次离心。

5.组织标本：

切割标本后，称取重量。

加入必然量的PBS，。

用液氮迅速冷冻保留备用。

标本融化后仍然维持2-8℃的温度。

加入必然量的PBS（），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。

分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6.标本搜集后及早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

假设不能马上进行实验，可将标本放于-20℃保留，但应幸免反复冻融.

7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤：

1.标准品的稀释与加样：

在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中别离加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；

然后从第一孔、第二孔中各取100μl别离加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔别离加标准品稀释液50μl，混匀；

然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl别离加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中别离加标准品稀释液50ul，混匀；

混匀后从第五、第六孔中各取50μl别离加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中别离加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中别离取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔别离加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。

（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度别离为90pg/ml，60pg/ml，40pg/ml，20pg/ml，10pg/ml）。

2.加样：

别离设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。

在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽可能不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：

用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：

将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

5.洗涤：

警惕揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：

每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：

操作同3。

8.洗涤：

操作同5。

9.显色：

每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.终止：

每孔加终止液50μl，终止反映（现在蓝色立转黄色）。

11.测定：

以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。

测定应在加终止液后15分钟之内进行。

注意事项：

1．试剂盒从冷藏环境中掏出应在室温平稳15-30分钟后方可利用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保留。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不阻碍结果。

3．各步加样均应利用加样器，并常常校对其准确性，以幸免实验误差。

一次加样时刻最好操纵在5分钟内，如标本数量多，推荐利用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。

如标本中待测物质含量太高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释必然倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×

n×

5）。

5．封板膜只限一次性利用，以幸免交叉污染。

6．底物请避光保留。

7．严格依照说明书的操作进行，实验结果判定必需以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各类废弃物都应按传染物处置。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

计算：

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，

在坐标纸上绘出标准曲线，依照样品的OD

值由标准曲线查出相应的浓度；

再乘以稀释

倍数；

或用标准物的浓度与OD值计算出标

准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值

代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释

倍数，即为样品的实际浓度。

（此图仅供参考）

试剂盒性能：

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为以上。

2.批内与批见应别离小于9%和11%

检测范围：

3pg/ml-120pg/ml

保留条件及有效期：

1.试剂盒保留：

；

2-8℃。

2．有效期：

6个月

RD

MonkeyVZV

FORRESEARCHUSEONLY

DrugNames

GenericName：

MonkeyVZVELISAKit.

Purpose

ThiskitallowsforthedeterminationofVZVconcentrationsinMonkeyserum,bloodplasma,andotherbiologicalfluids.

Principleoftheassay

ThekitassayMonkeyVZVlevelinthesample，usePurifiedMonkeyVZVantibodytocoatmicrotiterplatewells,makesolid-phaseantibody,thenaddVZVtowells,CombinedVZVantibodywhichWithHRPlabeledgoatanti-Humanbecomeantibody-antigen-enzyme-antibodycomplex,afterwashingCompletely,AddTMBsubstratesolution,TMBsubstratebecomesbluecolorAtHRPenzyme-catalyzed,reactionisterminatedbytheadditionofasulphuricacidsolutionandthecolorchangeismeasuredspectrophotometricallyatawavelengthof450nm.TheconcentrationofVZVinthesamplesisthendeterminedbycomparingthe.ofthesamplestothestandardcurve.

Materialsprovidedwiththekit

48determinations

96determinations

Storage

Usermanual

1

Closureplatemembrane

2

Sealedbags

Microelisastripplate

2-8℃

Standard：

1bottle

Standarddiluent

HRP-Conjugatereagent

Samplediluent

ChromogenSolutionA

ChromogenSolutionB

StopSolution

washsolution

20fold）

1bottle

30fold）

Specimenrequirements

1.serum-coagulationatroomtemperature10-20mins，centrifugation20-minatthespeedof2000-3000removesupernatant,Ifprecipitationappeared,Centrifugalagain.

2.plasma-usesuitedEDTAorcitrateplasmaasananticoagulant,mix10-20mins,centrifugation20-minatthespeedof2000-3000removesupernatant,Ifprecipitationappeared,Centrifugalagain.

3.Urine-collectsueasterilecontainer,centrifugation20-minatthespeedof2000-3000removesupernatant,Ifprecipitationappeared,Centrifugalagain.TheOperationofHydrothoraxandcerebrospinalfluidReferencetoit.

4.cellculturesupernatant-detectsecretorycomponents,collectsueasterilecontainer,centrifugation20-minatthespeedof2000-3000removesupernatant,detectthecompositionofcells,DilutcellsuspensionwithPBS（）,Cellconcentrationreached1million/ml,repeatedfreeze-thawcycles,damagecellsandreleaseofintracellularcomponents,centrifugation20-minatthespeedof2000-3000removesupernatant,Ifprecipitationappeared,Centrifugalagain.

5.Tissuesamples-Aftercuttingsamples,checktheweight,addPBS（）,Rapidlyfrozenwithliquidnitrogen,maintainsamplesat2-8℃aftermelting,addPBS（）,HomogenizedbyhandorGrinders,centrifugation20-minatthespeedof2000-3000removesupernatant.

6.extractassoonaspossibleafterSpecimencollection,andaccordingtotherelevantliterature,andshouldbeexperimentassoonaspossibleaftertheextraction.Ifitcan’t,specimencanbekeptin-20℃topreserve,Avoidrepeatedfreeze-thawcycles.

7.Can’tdetectthesamplewhichcontainNaN3,becauseNaN3inhibitsHRPactive.

Assayprocedure

andaddsampletoStandard:

set10StandardwellsontheELISAplatescoated,addStandard100μltothefirstandthesecondwell,thenaddStandarddilution50μltothefirstandthesecondwell,mix;

takeout100μlformthefirstandthesecondwellthenaddittothethirdandtheforthwellseparately.thenaddStandarddilution50μltothethirdandtheforthwell,mix;

thentakeout50μlfromthethirdandtheforthwelldiscard,add50μltothefifthandthesixthwell,thenaddStandarddilution50μltothefifthandthesixthwell,mix;

takeout50μlfromthefifthandthesixthwellandaddtotheseventhandtheeighthwell,thenaddStandarddilution50μltotheseventhandtheeighthwell,mix;

takeout50μlfromtheseventhandtheeighthwellandaddtotheninthandthetenthwell,addStandarddilution50μltotheninthandthetenthwell,mix,takeout50μlfromtheninthandthetenthwelldiscard（addSample50μltoeachwellafterDiluting,（density:

90pg/ml，60pg/ml，40pg/ml，20pg/ml，10pg/ml）

sample：

Setblankwellsseparately（blankcomparisonwellsdon’taddsampleandHRP-Conjugatereagent,othereachstepoperationissame）.testingsamplewell.addSampledilution40μltotestingsamplewell,thenaddtestingsample10μl（samplefinaldilutionis5-fold）,addsampletowells,don’ttouchthewellwallasfaraspossible,andGentlymix.

:

AfterclosingplatewithClosureplatemembrane,incubatefor30minat37℃.

liquid:

30-fold（or20-fold）washsolutiondiluted30-fold（or20-fold）withdistilledwaterandreserve.

：

UncoverClosureplatemembrane,discardLiquid,drybyswing,addwashingbuffertoeverywell,stillfor30sthendrain,repeat5times,drybypat.

enzyme：

AddHRP-Conjugatereagent50μltoeachwell,exceptblankwell.

Operationwith3.

Operationwith5.

AddChromogenSolutionA50ulandChromogenSolutionBtoeachwell,evadethelightpreservationfor15minat37℃

thereaction：

AddStopSolution50μltoeachwell,Stopthereaction（thebluecolorchangetoyellowcolor）.

takeblankwellaszero,Readabsorbanceat450nmafterAddingStopSolutionandwithin15min.

Importantnotes

1.Thekittakesoutfromtherefrigerationenvironmentshouldbebalanced15-30minutesintheroomtemperature,ELISAplatescoatedifhasnotuseupafteropened,theplateshouldbestoredinSealedbag.

2.washingbufferwillCrystallizationseparation,itcanbeheatedthewaterhelpsdissolvewhendilute.Washingdoesnotaffecttheresult.

3.addSamplewithsamplerEachstep,Andproofreaditsaccuracyfrequently,avoidstheexperimentalerror.addsamplewithin5mins,ifthenumberofsampleismuch,recommendtouseVolley.

4.ifthetestingmaterialcontentisexcessivelyhigher（ThesampleODisbiggerthanthefirststandardwell）,pleasediluteSample（n-fold）,Pleasediluenteandmultipliedbythedilutionfactor.（×

5）.

5.Closureplatemembraneonlylimitsthedisposableuse,toavoidcross-contamination.

6.Thesubstrateevadethelightpreservation.

7.Pleaseaccordingtouseinstructionstrictly,Thetestresultdeterminationmusttakethemicrotiterplatereaderasastandard.

8.Allsamples,washingbufferandeachkindofrejectshouldaccordingtoinfectivematerialprocess.

9.Donotmixreagentswiththosefromotherlots.

Calculate

Assayrange

Storageandvalidity

1．Storage：

2-8℃.

2．validity：

sixmonths.