浙贝母的标准起草说明Word下载.docx

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珠贝为完整的鳞茎，呈扁圆形，高1～1.5cm，直径1～2.5cm。

表面类白色，外层鳞叶2瓣，肥厚，略似肾形，互相抱合，内有小鳞叶2～3枚及干缩的残茎。

浙贝片为鳞茎外层的单瓣鳞叶切成的片。

椭圆形或类圆形，直径1～2cm，边缘表面淡黄色，切面平坦，粉白色。

质脆，易折断，断面粉白色，富粉性。

　　【鉴别】

（1）本品粉末淡黄白色。

淀粉粒甚多，单粒卵形、广卵形或椭圆形，直径6～56μm，层纹不明显。

表皮细胞类多角形或长方形，垂周壁连珠状增厚；

气孔少见，副卫细胞4～5个。

草酸钙结晶少见，细小，多呈颗粒状，有的呈梭形、方形或细杆状。

导管多为螺纹，直径至18μm。

（2）取本品粉末5g，加浓氨试液2ml与三氯甲烷20ml，放置过夜，滤过，取滤液8ml，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。

另取贝母素甲对照品、贝母素乙对照品，加三氯甲烷制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法（附录ⅥB）试验，吸取上述供试品溶液10～20μl、对照品溶液10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（17:

2:

1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

【检查】水分照水分测定法（附录ⅨH第一法）测定，不得过18.0%。

　　总灰分不得过6.0%（附录ⅨK）。

　　酸不溶性灰分不得过1.0%（附录ⅨK）。

【浸出物】照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法（附录ⅩA）测定，用稀乙醇作溶剂，不得少于8.0%。

【含量测定】照高效液相色谱法（附录ⅥD）测定。

　　色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

以乙腈-水-二乙胺（70:

30:

0.03）为流动相；

蒸发光散射检测器检测。

理论塔板数按贝母素甲峰计算应不低于2000。

　　对照品溶液的制备精密称取贝母素甲对照品、贝母素乙对照品适量，加甲醇制成每1ml含贝母素甲0.2mg、贝母素乙0.15mg的混合溶液，即得。

　　供试品溶液的制备取本品粉末（过四号筛）2g，精密称定，置烧瓶中，加浓氨试液4ml浸润1小时，精密加入三氯甲烷-甲醇（4:

1）的混合溶液40ml，称定重量，混匀，置80℃水浴中加热回流2小时，放冷，再称定重量，加上述混合溶液补足减失重量，滤过，精密量取续滤液10ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

　　测定法分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液5～15μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程分别计算贝母素甲、贝母素乙的含量，即得。

　　本品按干燥品计算，含贝母素甲（C27H45NO3）和贝母素乙（C27H43NO3）的总量不得少于0.08%。

【炮制】除去杂质，洗净，润透，切厚片，干燥；

或打成碎块。

【性味与归经】苦，寒。

归肺、心经。

【功能与主治】清热散结，化痰止咳，用于风热犯肺，痰火咳嗽，肺痈，乳痈，瘰疬，疮毒。

【用法与用量】4.5～9g。

【注意】不宜与乌头类药材同用。

【贮藏】置干燥处，防蛀。

二、浙贝母质量标准起草说明

（一）概述

　　浙贝母收载于《中国药典》（2000年版），原标准中无定量方法，根据药典会有关文件的要求，对该品种质量标准进行提高。

据文献报道，浙贝母主含甾醇类生物碱：

贝母素甲（peimine，即浙贝母碱）、贝母素乙（peiminine，即去氢浙贝母碱）、浙贝宁（zhebeinine）、浙贝酮（zhebeinone）、贝母辛（peimisine）、异浙贝母碱（isoverticine）、浙贝母碱苷（peiminoside）、浙贝宁苷（zhebeininoside）、浙贝丙素（zhebeirine）等，故选定贝母素甲、贝母素乙作为浙贝母药材含量测定的指标。

另对原粉末鉴别特征及薄层鉴别方法进行了修改，并增加了水分、灰分、酸不溶性灰分、浸出物等检查及测定项。

经四川省药品检验所复核，增修订项目方法基本可行，重现性较好。

（二）质量标准起草说明

1.来源

　　根据我所对浙江磐安县等生产地调查，浙贝母加工方法近年来多采用硫磺薰，而且是多次反复薰，已与传统用贝壳粉或石灰粉撞擦不同，考虑到硫磺薰后有残留，味酸易影响药材质量，故不予收入标准，而保留传统的加工方法。

2.性状

《中国药典》（2000年版）规定为味微苦，经实样比较，本品味苦同于湖北贝母，明显不同于川贝母之味微苦，认为改为味苦比较合适。

3.鉴别

（1）浙贝母的显微鉴别：

《中国药典》（2000年版）中已有收载淀粉粒，但在实验过程中发现淀粉粒层纹不明显，气孔及草酸钙结晶均较少见，故建议将其修改为淀粉粒层纹不明显，气孔及草酸钙结晶少见，显微特征图见图5-1。

（2）薄层色谱鉴别：

原标准中收载了贝母素甲、贝母素乙的薄层色谱鉴别，在实验过程发现按原提取方法中采用苯作为提取溶剂，毒性很大，现改为三氯甲烷；

另供试品溶液和对照品溶液的稀释溶剂由三氯甲烷改为挥发性较差的甲醇，结果斑点清晰，见下图5-2。

4.检查

杂质因本品杂质较少，认为不必将其列入标准。

水分取本品，照水分测定法附录ⅨH第一法测定，9批药材测定结果见表5-1。

根据测定结果，规定水分不得过18.0%。

总灰分取本品，照附录ⅨK总灰分测定法测定，9批药材测定结果见表5-1，根据测定结果，规定总灰分不得过6.0%。

酸不溶性灰分取本品，照附录ⅨK的方法进行测定，9批药材测定结果见表5-1，根据测定结果，规定酸不溶性灰分不得过1.0%。

5.浸出物

照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法（附录ⅩA）测定，用稀乙醇作溶剂，结果见表5-1，根据测定结果，规定浸出物不得少于8.0%。

表5-1浙贝母检查项汇总表

6.含量测定

　　贝母素甲、贝母素乙为本品的主要有效成分，因此两种成分紫外区吸收值很小，故现应用反相高效液相色谱蒸发光散射检测法测定其含量，经方法学验证，精密度、重复性、回收率等均符合要求。

（1）仪器与试药仪器与色谱条件（中国药科大学）：

HP1100高效液相色谱仪：

AgilentG1312A二元泵，Rheodyne7725i手动进样阀，Chemstation6.01色谱工作站，Agilent359001数模转换器；

色谱柱：

AgilentHypersilBDS-C18（4.0×

250mm，5μm）；

流动相：

乙腈-水-二乙胺（70:

0.03），流速0.8ml/min；

检测器：

Alltech2000蒸发光散射检测器（ELSD）；

漂移管温度：

85℃；

载气流速：

2.2L/min；

气源：

WYK-2型无音无油空压机（天津市蓝珂科技实业公司）。

　　仪器与色谱条件（浙江省药检所）：

HP1100系列高效液相色谱仪（G1322A脱气机、G1313A自动进样仪、G1316A柱温箱）Agilent35900E数模转换器；

AgilentZORBAXExtend-C18（4.6×

乙腈-0.1%二乙胺溶液（70:

30），流速0.8ml/min；

蒸发光散射检测器；

85℃，雾化气：

氮气，流速2.2L/min。

　　贝母素甲、贝母素乙对照品由中国药科大学提供，乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余为分析纯。

（2）条件的优化以贝母素乙为考察对象，配制一较低浓度溶液，以信噪比（S/N）为指标，对ELSD条件进行优化。

优化漂移管温度固定载气流速为2.1l/min，对漂移管温度进行优化。

结果见表5-2和图5-3。

优化载气流速：

于最佳漂移管温度（85℃）处，对载气流速进行优化。

结果见表5-3和图5-4。

　　结果表明，最佳ELSD条件为漂移管温度85℃，载气流速2.2l/min，此时可以获得最佳的信噪比。

（3）提取条件的优化以象贝（60目，60℃烘2h）进行考察。

提取溶剂的选择采用氨水浸润1h后，冷浸过夜，超声提取1h的提取方法，对乙醚、三氯甲烷、混合溶剂三氯甲烷-甲醇（4:

1）和甲醇四种提取溶剂进行了比较优化。

结果见表5-4。

结果表明，乙醚提取杂质最少，但含量稍低；

三氯甲烷-甲醇提取含量最高，但杂质稍多；

三氯甲烷提取含量低；

甲醇提取不仅含量低，而且杂质很多。

因此考虑用乙醚和三氯甲烷-甲醇作进一步的考察。

提取方式的选择对乙醚索氏提取，乙醚加热回流（80℃）4h，三氯甲烷-甲醇（4:

1）加热回流4h进行了考察。

结果见表5-5。

结果表明，三氯甲烷-甲醇（4:

1）回流提取最完全。

提取时间的选择采用三氯甲烷-甲醇（4:

1）加热回流（80℃），对提取1h、2h、3h、4h进行了考察。

结果见表5-6。

结果表明，2h即已提取完全。

综上，确定最佳提取条件为氨水浸润1h后，混合溶剂氯仿-甲醇（4:

1）加热回流（80℃）提取2h。

（4）不同色谱柱的考察采用Agilent1100系列高效液相色谱仪，考察了三种不同的C18柱对本品分离的影响，结果均能得到较好分离，但因流动相pH值较高，建议采用耐高pH值的色谱柱，考察结果见图5-5。

（5）对照品溶液及供试品溶液制备同正文。

（6）线性关系考察精密量取贝母素甲（0.2038mg/ml）及贝母素乙（0.2212mg/ml）混合对照品溶液5、10、15、20、30ml注入液相色谱仪，测定峰面积（见表5-7、5-8），以进样量（mg）的对数（X）为横坐标，峰面积的对数（Y）为纵坐标，作标准曲线（见图5-6、5-7），并以最小二乘法分别计算得回归方程：

Y=1.5728X＋2.6517（r=0.9995），Y=1.5430X＋2.6202（r=0.9999），结果显示贝母素甲进样量在1.0190-6.1140ng范围内，贝母素乙进样量在1.1060-6.1140ng范围内与峰面积呈有良好的线性关系。

（7）精密度试验取对照品溶液，按以上色谱条件，重复进样6次，测定峰面积，结果见表5-9。

（8）重复性试验分别称取浙贝母药材粉末（象贝，60目，60℃烘2h）6份，精密称定，按正文中“供试品溶液的制备”项制备供试品溶液并测定峰面积，以外标法计算贝母素甲和贝母素乙的含量（%），计算测定结果的RSD值。

结果见表5-10。

（9）稳定性试验取“重复性试验”项下一份供试品溶液，分别于0，2，4，6，8小时进样，测定其中贝母素甲和贝母素乙的含量（%），计算测定结果的RSD值。

结果见表5-11。

（10）加样回收率试验取已知含量的浙贝母药材粉末（象贝，60目，60℃烘2h）1.0g，平行6份，等量分别精密加入贝母素甲和贝母素乙对照品适量，按正文中“供试品溶液的制备”项制备供试品溶液并测定峰面积，计算加样回收率。

结果见表5-12。

（11）样品测定

原起草单位中国药科大学计算采用外标一点法,根据蒸发光散检测器的原理,浓度与峰面积并非直接成线性关系,后改为对数外标两点法计算,故正文中改为对数外标两点法计算,并经我所得复核,方法可行。

按正文方法测定了23批样品（其中有3批系两起草单位重复测定），结果见表5－13、表5－14。

根据17批样品的检测结果，将限度定为“本品以干燥品计算，含贝母素甲C27H45NO3和贝母素乙C27H43NO3的总量不得少于0.08%”