化验室试剂保存注意事项Word格式.docx
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3.防风化:
晶体碳酸钠、晶体硫酸铜应进行腊封,存放在地下室中。
4.防分解:
碳酸氢铵、浓硝酸受热易分解,涂腊后,存放在地下室中。
5.活性炭能吸附多种气体而变质,(木炭亦同),应放在干燥器中。
6.黄磷遇空气易自燃,永远保存水中,每15天查水一次:
磷试剂瓶中加水、置于有水水糟中,上加钟罩封闭。
7.钾、钠保存在火油中。
8.硫酸亚铁溶液中滴几滴稀硫酸,加入过量细铁粉,进行腊封。
9.葡萄糖溶液容易霉变,稍加几滴甲醛即可保存。
10.甲醛易聚合,应开瓶后立即加少量甲醇;
乙醛则加乙醇。
四、防光:
1.硝酸银,浓硝酸及大部份有机药品应该放在棕色瓶中。
2.硝酸盐存放在地下室中既防热,又防光、防火还能防震。
3.有机试剂橱窗一律用黑漆涂染。
4.实验室用色布窗帘,内红外黑双层。
五、防毒害:
1.磷、硝酸银、氯酸钾、氯化汞等剧毒物放地下室内,双人双锁,建立档案,呈批取用,使用记载,定期检查。
2.磷化钙、磷化铝吸水后放出剧毒性磷化氢,应放在干燥器中保存,贴上红色标签。
3.由于没有通风橱,经常在地面布石灰,吸附某些毒害气相物质。
4.浓酸,浓碱、溴、酚等腐蚀的药物,使用红色标签,以示警戒。
六、防震:
1.硝酸铵震动易爆炸,放地下室中。
2.自制的大晶体明矾、大晶体硫酸铜,用软纸垫包放大口试剂瓶中,进行缓冲,并按“四位数字”进行编号入厨。
七、防火:
1.在仪器室“大门附近”、“显眼”、“顺手”的地方设置水缸、消防桶、砂缸、泡沫灭火器及四氯化碳一瓶。
泡沫灭火器药物,每年更新一次。
(如有“CCl4”或“1211”灭火器更好)
2.室内电线一律换成暗线,以防药物熏蒸,短路走火。
八、防鼠:
1.浆糊中适当多调一些苯酚。
2.对“指示剂”一橱药品,放一些易挥发的药物例如甲醛、煤酚皂等。
鼠害严重的橱中,可交替存放浓盐酸和浓氨水。
用以保护其他药品。
3.用醋酸铅调浆糊涂在鼠洞口四壁,老鼠出入时污染皮肤,舔而毙命(醋酸铅味甜而剧毒)。
1.中学化学实验室药品保存时注意下列几个方面:
(1)瓶的选择:
固体——广口瓶,液体——细口瓶。
见光易分解的物质——棕色瓶。
如:
硝酸、硝酸银、氯水等。
(2)瓶塞的选择:
碱性溶液不能用玻璃塞,应该用橡胶塞。
NaOH溶液、Na2CO3溶液等
强氧化性溶液、有机溶剂不能用橡胶塞,应该用玻璃塞。
硝酸、高锰酸钾溶液、汽油、苯等。
(3)采用液封法保存的物质:
钠——煤油;
白磷——水;
液溴——水;
四氯化碳——水等。
(4)易与空气中物质反应的物质要密闭保存。
与水反应(吸水)的物质:
CaCl2、碱石灰等
与CO2反应的物质:
NaOH、Ca(OH)2、Na2O2等
与O2反应的物质:
FeSO4、Na2SO3、C6H5OH、Na2S等
(5)特殊物质的保存:
HF——保存在塑料瓶中。
废水中酚类的测定
2010-09-01
3102
(4-氨基安替比林分光光度法)一、原理酚类化合物于pH10.0±
0.2介质中,在铁氰化钾存在下,与4-氨基安替比林反应,生
(4-氨基安替比林分光光度法)
一、原理
酚类化合物于pH10.0±
0.2介质中,在铁氰化钾存在下,与4-氨基安替比林反应,生成橙红色的吲哚酚氨基安替比林染料,其水溶液在510nm波长处有最大吸收。
用光程长为20mm比色皿测量时,酚的最低检出浓度为0.1mg/L。
二、仪器
1.500mL全玻璃蒸馏器。
2.分光光度计。
三、试剂
实验用水应为无酚水。
1.无酚水:
于1L水中加入0.2g经200℃活化0.5h的活性炭粉末,充分振摇后,放置过夜。
用双层中速滤纸过滤,或加入氢氧化钠使水呈强碱性,并滴加高锰酸钾溶液至紫红色,移入蒸馏瓶中加热蒸馏,收集馏出液备用。
注:
无酚水应贮于玻璃瓶中,取用时应避免与橡胶制品(橡皮塞或乳胶管)接触。
2.硫酸铜溶液:
称取50g硫酸铜(CuSO4·
5H2O)溶于水,稀释至500mL。
3.磷酸溶液:
量取50mL磷酸(密度20℃=1.69g/mL),用水稀释至500mL。
4.甲基橙指示液:
称取0.05g甲基橙溶于100mL水中。
苯酚标准贮备液:
称取1.00g无色苯酚溶于水,移入1000mL容量瓶中,稀释至标线。
至冰箱内保存,至少稳定一个月。
标定方法:
(1)吸10.00mL酚贮备液于250mL碘量瓶中,加水稀释至100mL,加,立即加入5mL盐酸,盖好瓶盖,轻轻摇匀,于暗处放置10min。
加入1g碘化钾,密塞,再轻轻摇匀,放置暗处5min。
用0.0125mol/L硫代硫酸钠标准滴定溶液滴定至淡黄色,加入1mL淀粉溶液,继续滴定至蓝色刚好褪去,记录用量。
(2)同时以水代替苯酚贮备液作空白试验,记录硫代硫酸钠标准溶液滴定溶液用量。
(3)苯酚贮备液浓度由下式计算:
苯酚(mg/mL)=15.68×
c×
(V1-V2)/V
式中:
V1——空白实验中硫代硫酸钠标准滴定溶液用量(mL);
V2——滴定苯酚贮备液时,硫代硫酸钠标准溶液滴定溶液用量(mL);
V——取用苯酚贮备液体积(mL);
c——硫代硫酸钠标准滴定溶液浓度(mol/L);
15.68——1/6C6H5OH摩尔质量(g/mol)。
6.苯酚标准中间液:
取适量苯酚贮备液,用水稀释至每毫升含0.010mg苯酚。
使用时当天配制。
7.溴酸钾-溴化钾标准参考溶液(c1/6KBrO3=0.1mol/L):
称取2.784g溴酸钾(KBrO3)溶于水,加入10g溴化钾(KBr),使其溶解,移入1000mL容量瓶中,稀释至标线。
8.碘酸钾标准参考溶液(c1/6KIO3=0.0125mol/L):
称取预先经180℃烘干的碘酸钾0.4458g溶于水,移入1000mL容量瓶中,稀释至标线。
9.硫代硫酸钠标准溶液(cNa2S2O3·
5H2O≈0.0125mol/L):
称取3.1g硫代硫酸钠溶于煮沸放冷的水中,加入0.2g碳酸钠,稀释至1000mL,临用前,用碘酸钾溶液标定。
取10.00mL碘酸钾溶液置250mL容量瓶中,加水稀释至100mL,加1g碘化钾,再加5mL(1+5)硫酸,加塞,轻轻摇匀。
置暗处放置5min,用硫代硫酸钠溶液滴定至淡黄色,加1mL淀粉溶液,继续滴定至蓝色刚褪去为止,记录硫代硫酸钠溶液用量。
按下式计算硫代硫酸钠溶液浓度(mol/L):
c(Na2S2O3·
5H2O)=0.0125×
V4÷
V3
V3——硫代硫酸钠标准溶液消耗量(mL);
V4——移取碘酸钾标准参考溶液量(mL);
0.0125——碘酸钾标准参考溶液浓度(mol/L)。
10.淀粉溶液:
称取1g可溶性淀粉,用少量水调成糊状,加沸水至100mL,冷后,置冰箱内保存。
11.缓冲溶液(pH约为10):
称取20g氯化铵(NH4Cl)溶于100mL氨水中,加塞,置冰箱中保存。
应避免氨挥发所引起pH值的改变,注意在低温下保存和取用后立即加塞盖严,并根据使用情况适量配置。
12.2%(m/V)4-氨基安替比林溶液:
称取4-氨基安替比林(C11H13N3O)2g溶于水,稀释至100mL,置于冰箱中保存。
可使用一周。
固体试剂易潮解、氧化,宜保存在干燥器中。
13.8%(m/V)铁氰化钾溶液:
称取8g铁氰化钾{K3[Fe(CN)6]}溶于水,稀释至100mL,置于冰箱内保存。
四、测定步骤
1.水样预处理
(1)量取250mL水样置蒸馏瓶中,加数粒小玻璃珠以防暴沸,再加二滴甲基橙指示液,用磷酸溶液调节至pH4(溶液呈橙红色),加5.0mL硫酸铜溶液(如采样时已加过硫酸铜,则补加适量)。
如加入硫酸铜溶液后产生较多量的黑色硫化铜沉淀,则应摇匀后放置片刻,待沉淀后,再滴加硫酸铜溶液,至不产生沉淀为止。
(2)连接冷凝器,加热蒸馏,至蒸馏出约225mL时,停止加热,放冷。
向蒸馏瓶中加入25mL水,继续蒸馏至馏出液为250mL为止。
蒸馏过程中,如发现甲基橙的红色褪去,应在蒸馏结束后,再加1滴甲基橙指示液。
如发现蒸馏后残液不呈酸性,则应重新取样,增加磷酸加入量,进行蒸馏。
2.标准曲线的绘制:
于一组8支50mL比色管中,分别加入0、0.50、1.00、3.00、5.00、7.00、10.00、12.50mL酚标准中间液,加水至50mL标线。
加0.5mL缓冲溶液,混匀,此时pH值为10.0±
0.2,加4-氨基安替比林1mL,混匀。
再加1mL铁氰化钾,充分混匀后,放置10min立即于510nm波长,用光程为20mm比色皿,以水为参比,测量吸光度。
经空白校正后,绘制吸光度对苯酚含量(mg)的标准曲线。
3.水样的测定:
分取适量的馏出液放入50mL比色管中,稀释至50mL标线。
用与绘制标准曲线相同的步骤测定吸光度,最后减去空白实验所得吸光度。
4.空白试验:
以水代替水样,经蒸馏后,按水样测定步骤进行测定,以其结果作为水样测定的空白校正值。
五、计算
挥发酚(以苯酚计,mg/L)=1000×
m/V
m——由水样的校正吸光度,从标准曲线上查得的苯酚含量(mg);
V——移取馏出液体积(mL)。
注意事项
如水样含挥发酚较高,移取适量水样并加至250mL进行蒸馏,则在计算时应乘以稀释倍数。
细菌鞭毛染色的方法
2011-01-13
468
介绍了细菌鞭毛染色的几种方法以及个人的实验心的
目前,细菌鞭毛染色方法根据染色剂的不同,可分为碱性复红法、副品红法、结晶紫法、维多利亚蓝B法、镀银染色法和荧光蛋白染色法6类,前5类方法的媒染剂成分中均含有单宁酸,染色原理通常是采用不稳定的胶体溶液做媒染剂,并使其沉淀于鞭毛上而使“鞭毛肿胀(tarandfeather)”,鞭毛直径加粗,进一步染色后即可在油镜下观察。
1.碱性复红法和副品红法
1926年由Gray首创,其媒染液成分包括20%丹宁酸水溶液2.0ml,硫酸钾铝饱和水溶液5ml,饱和氯化汞水溶液2ml,3%碱性复红乙醇(95%)溶液0.4ml,临用前混合,且需过滤后方可使用。
染片时,媒染剂染色约6min,具体时间尚需在试验中摸索确定,染色液是抗酸染色Ziehl-Neelsen石碳酸复红染液,染片时需要1小片吸水纸盖在涂片上,染色3min。
由于该方法媒染剂混合物不稳定、操作复杂、经验性强。
Leifson于1930年建立了副品红法,并于1938年和1951年两次对该方法进行了改良,称为Leifson方法。
染色试剂由3种溶液组成:
A为1.5%NaCl水溶液,B为3%单宁酸水溶液,C为乙酸副品红0.9g,碱性副品红0.3g溶解于100ml95%乙醇溶液中。
使用时把等体积A和B混合,然后再加2体积C与之相混。
该试剂冷藏可保存1~2个月。
2.结晶紫法,又称Ryu法
1937年由Ryu建立,1982年由Kodaka等进行了改良。
媒染剂:
5%石碳酸10ml,2g单宁酸和10ml饱和硫酸钾铝。
染色剂:
饱和结晶紫乙醇溶液,即12g结晶紫溶于100ml无水乙醇中。
使用时把10份媒染剂与1份染色剂混合,染色5min。
1989年,Heimbrook等使用改良的Ryu染色试剂,采用湿片技术进行鞭毛染色,虽然可以观察到细菌鞭毛,但效果不好。
Ryu染色方法优点是试剂比较稳定,目前Difco公司已经研制出该方法的商品试剂盒,但染色效果亦不甚理想.
3.维多利亚蓝B法
1990年由Inoue等报道日本制药株式会社ShionogiSeiyaku研制出一种细菌鞭毛染色商品试剂盒。
其试剂组成包括维多利亚蓝B、苯酚、单宁酸和硫酸钾铝,染色约需7min。
该试剂保存期约为6个月,关于其染色效果虽然有过一篇文献评述,但却没有采用评分法进行评价,很难判断其染色效果。
4.镀银染色法
1958年Rhodes根据Fontana的螺旋体改良镀银染色法,建立了一种细菌鞭毛镀银染色法。
试剂分为媒染剂和银染剂。
媒染液:
10%单宁酸10ml加5ml饱和硫酸钾铝水溶液,再加1ml苯胺饱和水溶液形成沉淀,通过摇动又能重新溶解,加入5%FeCl3水溶液1ml形成黑色溶液,稳定10min后使用。
银染液:
配制5%AgNo3水溶液100ml取出10ml备用,再缓慢加入浓氨水(比重0.880)使形成的沉淀刚好重新溶解,最后把备用的10mlAgNo3溶液向其中逐滴加入,直到摇动后呈现轻微而稳定的薄雾状溶液为止,避光保存,可稳定数周。
用媒染液染片3~5min,蒸馏水充分洗涤后,再把银染液滴加至涂片上。
加热至接近沸腾,染色3~5min。
由于Rhodes镀银染色法媒染液成分复杂、操作繁锁,所以1965年Blenden等改良了细菌鞭毛镀银染色法的配方。
试剂A:
100ml蒸馏水中加入5g单宁酸,1.5gFeCl3,15%福尔马林2ml,1%NaOH溶液1ml。
试剂B:
使用2%AgNo3,其他同于Rhodes,但试剂不稳定,要求在4h内使用,并用要用氨水调pH至10。
试剂A染片2~4min,试剂B染色30s,不需加热。
由于以上两种镀银染色方法都要使用营养琼脂斜面培养物,并且需用无菌蒸馏水悬浮菌液制片,未采用评分法评价镀银染色方法。
因此1977年,West等对镀银染色法进一步改良,制备涂片时直接使用血平板,评价染色效果首次使用5分制,通过该评价方法证明了加热银染液染片可以提高染色效果。
试剂配方:
媒染液为饱和硫酸钾铝水溶液25ml,10%单宁酸50ml,5%FeCl3水溶液5ml,5℃保存,染色液配制同Rhodes,但需避光5℃保存。
媒染液染片4min,银染液滴加至涂片上加热至微冒蒸汽,染色4min。
同时West等还对使用不同培养基进行染色效果评价,包括半固体动力培养基、血琼脂平板、TSA(trypticasesoyagar)斜面,其中半固体动力培养基和TSA斜面25℃,培养18~24h;
血琼脂平板35~37℃,培养18~24h。
评价结果血琼脂平板35~37℃,培养18~24h不适于细菌鞭毛染色,而半固体动力培养基和TSA斜面25℃,培养18~24h适合于细菌鞭毛染色,同时也证明了使用福尔马林处理标本制备涂片并不能有效阻止鞭毛脱落。
由于镀银染色法媒染液不稳定,需避光5℃保存,1992年Porter等继续改良该方法,其试剂配方同West等的方法,只是媒染剂避光室温可保存数月,延长媒染剂染色时间为8min,染色液不需加热,只染30s,制备涂片程序略有不同。
使用TSA平板,36℃培养24h,但遗憾的是Porter等只使用了1种细菌(奇异变形杆菌)进行研究。
于是1994年Finegan等进一步证实使用过期媒染剂进行镀银染色可以增强鞭毛染色效果,并使用4种细菌(绿脓假单胞、奇异变形杆菌、黏质沙雷菌、枯草芽孢杆菌),用trypitcasesoy肉汤及其琼脂平板,26℃培养24h。
试剂配方仍不变,媒染液放置1、2、4、8、16周后进行染色,媒染液染色8min,银染液染色30~60s,不需加热。
这4种细菌均染色成功,从而证明媒染液可至少放置16周。
5、鞭毛的负染
具体操作:
菌悬液,直接滴在铜网上,1-2分钟后,吸去多余的菌液(似干非干的程度),再滴上0.1%的磷钨酸溶液,1分钟后,吸去多余的染液,然后就可以在电镜下观察了。
一般染色后十五天之内看电镜。
时间太长效果不好。
这是我试验用的方法。
曾做过一段时间的细菌鉴定,以下是一些染色心得:
首先染色用玻片一定要干净,洗液泡过之后蒸馏水冲洗干净。
涂片的时候菌千万别涂得太多。
第一部染色时,可将玻片置于水浴锅内,温度保持在35度,盖上盖(主要是保持一定的湿度,防止染色液变干不利于冲洗,这步非常有用)。
一定要将第一步使用的媒染液冲洗干净,否则影响染色效果,背景可能非常脏。
其他的步骤参考书上的资料进行,一般没什么问题。
我用这种方法染单鞭毛的弧菌,效果非常好。
注意事项:
1.要注意培养条件和培养时间:
①用点接法在新配制的牛肉膏蛋白胨半固体平板上接种。
一般一个平板点接3~4处。
经比较用半固体培养基培养出来的菌体活动度大,鞭毛长且多,易于染色,这可能与半固体培养基更适于菌体运动、鞭毛生长较好有关。
用点接种法在平板上接种更易于挑取边缘幼龄的菌体。
②培养时间要严格掌握,一般培养9~12h较好,菌龄超过15h,鞭毛染色效果较差,这可能与老龄菌体活动度降低、鞭毛易脱落有关。
2.染色过程中的细节也应充分注意:
①取菌要取菌落边缘的幼龄菌体。
②取菌后的接种环在载片上的蒸馏水中轻轻沾几下即可,不要用力太猛,更不能用接种环大幅度涂开;
将载片稍倾斜,使菌液散开即可,否则鞭毛易脱落,造成染色失败。
③鞭毛染色的玻片只能自然干燥,不能用热风吹干,不能热固定,这是由于加热后菌体易变形,鞭毛易脱落,影响观察。
④A染液染3~5min,其后用蒸馏水(自来水效果差)冲洗时一定要充分,否则加B染液后,背景很脏,鞭毛不易被观察到,影响实验效果。
⑤加B染液后,将玻片稍加热(但不能太热,更不能沸腾或蒸干)使其微冒蒸汽,30~60s,染色效果较不加热为好。
⑥B染液染完后,用蒸馏水冲洗比用自来水冲洗效果好。
原代细胞复苏的基本操作方法
中国生物器材网
406
原代细胞复苏的基本操作方法
一、实验准备
(1)仪器:
净化工作台、离心机、恒温水浴箱、倒置相差显微镜、培养箱、液氮冰箱
(2)玻璃器皿:
吸管(弯头、直头)、培养瓶、玻璃瓶(250ml、100ml)、废液缸
(3)塑料器皿:
吸头、枪头、胶塞、移液管(10ml)、15ml离心管、冻存管(1~2ml)
(4)其他物品:
微量加样枪、红血球计数板、记号笔、医用橡皮膏、移液枪
(5)试剂:
PBS、小牛血清、培养液、双抗(青霉素、链霉素)、胰蛋白酶(0.08%)
二、操作步骤
(1)从液氮容器中取出冻存管,直接浸入37℃温水中,并不时摇动令其尽快融化。
(2)从37℃水浴中取出冻存管,75%酒精消毒后,打开盖子,用吸管吸出细胞悬液,加到离心管中。
PriCells推荐接种培养瓶,37℃培养箱静置培养。
(3)离心,1000rpm,5min。
PriCells推荐不离心。
(4)弃去上清液,加入含10%小牛血清培养液重悬细胞,计数,调整细胞密度,接种培养瓶,37℃培养箱静置培养。
PriCells推荐小牛血清浓度依据原代细胞种类。
(5)次日更换一次1/2培养液,继续培养。
三、注意事项
(1)将冻存管从液氮容器中取出时,要做好防护工作,以免冻伤。
(2)取出冻存管后立即放入水浴中,使其尽快融化(在1-2分钟内)。
(3)复苏最好用新配制的培养液。
糖酵解试验
2010-12-30
《食品微生物》
265
本文介绍了常见的细菌生化鉴定实验之一——糖酵解实验的原理
不同的微生物可对各种糖类、醇类、糖昔类等进行分解,但其分解能力和分解产物均因不同的微生物而不同(见表)。
如大肠杆茵能分解乳糖和葡萄糖,而沙门氏茵只能分解葡萄糖,不能分解乳糖。
大肠杆菌有甲酸解氢酶,能将分解糖所生成的甲酸进一步分解成二氧化碳和氢气.故产酸又产气,而沙门氏茵无甲酸解氢酶,分解葡萄糖仅产酸而不产气。
在进行大肠茵群测定时,就是根据这一原理而采用乳糖发酵试验。
当大肠茵群分解乳糖而产酸时,可使培养基内的溴甲酚紫指示剂由蓝色变成黄色,产生的气体可在倒置的小管内观察,
表常用于糖发酵试验的糖类、醇类和糖苷类
试验方法:
以无菌操作,用接种针或环移取纯培养物少许,接种于发酵液体培养基管中,若为半固体培养基,则用接种针作穿刺接种。
接种后,置36±
1.0°
C培养,每天观察结果,检视培养基颜色有无改变(产酸),小倒管中有无气泡,微小气泡亦为产气阳性,若为半固体培养基,则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡,有时还可看出接种菌有无动力,若有动力,培养物可呈弥散生长。
本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力,从而进行各种细菌的鉴别,因而每次试验,常需同时接种多管。
一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫,溴百里蓝和An-drade指示剂。
标准菌验收、制备、保藏、传代、使用、销毁的管理
2010-12-31
616
介绍了微生物实验中使用的标准菌的验收、制备、保藏、传代、使用、销毁的管理规程规定了质量管理部门实验用标准菌种的验收、制备、储管、使用、以及销毁等的相关规定。
适用于微生物限度检查、无菌检查、抗生素微生物(效价)测定、评价防腐剂和抗菌剂的抑菌效果和确认灭菌效果、检验方法的验证、培养基的适用性检查,样品检验时的阳性对照等。
依据:
中国药典2010年版二部及菌种使用说明书
1.标准菌的来源
标准菌株由中国药品生物制品检定所医学菌种保藏中心(ChinaMedicalculturecollection,CMCC)提供的冷冻干燥菌种(0代)或由上级药检部门已接种好的菌种斜面(3代)。
黑曲霉的0代菌种为保存于含15%甘油的0.9%无菌氯化钠溶液中的孢子悬液冷存管。
中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌种的标签CMCC(B)代表细菌(bacteria),CMCC(F)代表真菌(fungi)每种菌具有固定的代号。
2.标准菌的验收
从菌种保藏中心购买的原始菌种管是玻璃安瓿装的冻干菌,接收同时应检查是否有随菌种附有的相关资料。
接收菌种时应检查安瓿的数量和名称,和每一支安瓿的完整性。
在相应的菌种接收记录上记上所有的关于菌种的信息,如名称、数量和接收日期等。
在菌种安瓿及菌种管上粘贴标签,内容包括:
菌种名称、菌种代号、代次、接收日期、接收人、贮存条件、有效期至。
新购入的0代原始菌种储存于-20℃,有效期为三年。
从上级药检部门购买的已接种好的菌种斜面(3代)应检查菌种管是否完好。
储存于2~8℃,有效期为3个月。
3.标准菌的复苏、复壮及标准储备菌株的制备
3.1物品及
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