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3结果5
3.1新疆驴皮肤组织RNA浓度检测5
3.2提取RNA的电泳分析图5
4讨论5
4.1RNA提取质量影响因素的分析5
5结论6
致谢6
参考文献6
热孜万古丽·
米吉提
(塔里木大学动物科学学院新疆阿拉尔843300)
摘要:
Trizol法是一种从动物组织中提取总RNA的高效、便捷、可靠的方法。
本实验通过采集四岁新疆驴的不同部位皮肤组织,用Trizol法提取其中总RNA,并用分光光度计和用1%的琼脂糖凝胶甲醛变性电泳来进行RNA纯度和完整性的检测,为后续有关新疆驴皮肤组织分子生物学方面的研究奠定基础。
结果表明OD260/280值均大于1.8,所提取的RNA纯度较好。
在电泳图谱中可看到清晰的3条带,分别为5S,18S,28S,且28SrRNA条带的亮度是18srRNA的两倍,表明提取的RNA完整性较好。
关键词:
新疆驴;
皮肤组织;
Trizol法提取RNA;
RNA的检测
1前言
1.1新疆驴种质资源概况
驴隶(Donkey)属于马科,驴属。
体型比马和斑马都小,但与马属有不少共同特征:
第三趾发达,有蹄,其余各趾都已退化。
我国疆域辽阔,养驴业历史悠久。
国内的驴可分大、中、小三型,大型驴有关中驴、泌阳驴,这两种驴体高130厘米以上主要分布在陕西省关中平原和延安市南部,以兴平、礼泉、乾县、武功、咸阳、蒲城和临潼等地为中心产区。
中型驴有辽宁驴,山东省,关中驴、德州驴、佳米驴、泌阳驴、广灵驴、河西驴等,这种驴高在110-130厘米之间,小型俗称毛驴,以华北、甘肃、新疆等地居多,这些地区的驴体高在85-110厘米之间[1]。
1.1.1新疆驴的概况
新疆驴是中国比较优良的小型地方品种驴之一,属于干旱沙漠生态类型的小型驴种。
据高雪等[2]研究数据,新疆驴、凉州驴、云南驴的平均有效等位基因数较高,分别为2.96,2.85,1.99。
而关中驴、德州驴、佳米驴、庆阳驴、晋南驴的平均有效等位基因数较低,分别为1.75,1.71,1.87,1.79,1.61。
表明新疆驴、凉州驴受人工选择强度较小,而基因数多、基因型复杂,其遗传多样性好,亲缘关系较近。
也有研究表明,新疆驴(Donkey)的前身很可能是亚洲野驴(Asinushemionus)通过长期驯化而形成的地方驴种。
新疆驴主要分布于南疆塔里木盆地周围农村,以喀什、和田、阿克苏地区为中心,在吐鲁番及哈密地区也有分布[2,3]。
新疆驴体型矮小,头略偏大,耳直立,额宽,鼻短,耳壳内有毛;
髻甲低平,背平腰短,四肢较短,蹄小质坚,毛多为灰色或黑色,不同地区的新疆驴在外貌特征上略有差异,但其均具有性情温和、抗病力强、环境适应能力强,并能在马、牛、羊等草食家畜不能利用的草场上放牧,具有肉、皮、药、乳、役兼用多种经济用途。
其平均体尺,成年公驴体重约l38kg左右;
体高约120~110cm,体长105.4~105.8cm;
成年母驴体重约110kg左右,体高约99.8~101.6cm,体长102.5~102.5cm。
新疆驴性情温和、抗病力强、能适应各种环境,役用性能良好,耐粗饲、食量小,力气大、速度快、体质坚实,肌肉发达、结构紧凑、性能良好,驮重能力强,一般可达体重之半,也有接近体重的。
1周岁就有性欲,公驴2~3岁,母驴2岁就开始配种。
繁殖年龄12~15岁,产驹8~10胎,幼驹成活率90%以上。
新疆驴是比较优良的地方驴种,成年公驴体重250kg左右,成年母驴体重160kg左右,屠宰率可达44%以上,除具有良好的役用性能外,还可提供优质的肉、皮等。
新疆驴肉是典型的高蛋白、低脂肪肉类滋补食品,具有补血益气、强身壮体等保健功能,并以其肉质细嫩、味道鲜美,营养丰富而受到人们的青睐,当地有“天上龙肉,地下驴肉”的美称。
据西北农林科技大学分析,新疆驴肉蛋白质含量一般在25%以上,其中氨基酸组分齐全,人体必需的氨基酸含量占34%,高于牛、羊肉;
驴肉含瘦肉多,脂肪少(0.8%),不饱和脂肪酸占高级脂肪酸的77.2%,亦高于牛、羊肉,并具有半液体特性,食后不会因胆固醇久滞而发生血管硬化症;
驴肉不含有毒物质,有补血、补气、补虚等功能,是理想的保健食品之一。
此外,新疆驴的皮比较厚,是制革的重要原料之一,而且还可制成名贵中药阿胶,具有滋阴、补肺、补血、止血等功效[4]。
1.1.2新疆驴品种资源现状
新疆驴是中国优良的小型驴仲之一,主要分布在塔里木盆地周围的农村,现有约5000头。
其中和田、喀什、阿克苏地区为新疆驴的中心产区,在1985年新疆驴的养殖数量曾经有达到4.7万余头的历史纪录,驴在南疆少数民族贫困地区是重要的役用家畜,用于骑乘,运输和田间部分作业,在该地区生产和生活中有重要作用[8]。
但近年来随着农业机械化的普及,养驴的目的和作用已不再用于使役,因新疆驴的体格相对偏小、出肉率相对较低,经济效益偏低。
导致当地农牧民饲养新疆驴的积极性降低,造成新疆驴的市场竞争力较差,存栏数量直线下降。
目前,新疆驴已被国家列为地方品种保护名录,国家农业部已拨付了专项资金用于新疆驴的品种资源保护工作[8]。
同时,新疆驴中心产区地方政府正在主动联合地方高校共同开展新疆驴的选育、基因多肽性、饲料营养、种质资源保护研究工作,并取得了一定的成绩[4]。
新疆作为国内主要畜牧区之一,在驴业养殖方面有得天独厚的优势:
尤其是新疆驴的中心产区喀什、和田、阿克苏等地区的半干旱、半荒漠的气候特别适宜新疆驴生长;
塔里木盆地周围的农村,饲料来源比较充足,有大量的玉米、棉花等作物秸秆饲料,新疆驴作为当地原始地方驴种,虽个体矮小,但能适应恶劣的自然环境,耐粗饲、抗病力强、易管理、放牧及圈养均可。
保种的目的是为了保护优良的基因,选育的目的是为了更好被人们利用。
新疆驴的保种和选育是一项投资大、时间长的系统工程,需要几代人的共同努力。
当地政府正在加大资金的投放力度,多方筹措资金,积极吸引社会资金,积极开发利用,增加经济效益[5]。
1.2驴皮产业的发展现状
阿胶为我国药、食两用传统中药材,是使用马科动物驴(EquusasinusL.)的干燥皮或鲜皮经煎煮、浓缩制成的固体胶,系补血之上品,与人参、鹿茸并称为“滋补三宝”,享誉国内外市场。
驴皮是生产阿胶的唯一原料。
但近年来由于毛驴作为畜力的角色逐渐被机械取代,加上毛驴养殖周期长、收益慢,使我国毛驴存栏量迅速下降,因而使得市场对驴皮需求产生巨大缺口,已成为制约阿胶业发展的一大瓶颈,阿胶商业化生产陷入“等米下锅”的窘境。
针对这一问题,国家和生产阿胶的企业给予了高度关注,并制定了相应的应对策略;
作为阿胶生产的龙头企业东阿阿胶无奈的提出“以肉谋皮”的策略,宣布参与毛驴养殖,进军驴肉产业链,以此来缓解阿胶生产原材料紧缺的境遇。
故此,他们在养殖毛驴历史悠久的南疆阿克苏、和田、喀什等主要驴产业发展区投入巨资建立了多个良种驴养殖基地,初步形成了集良种驴繁育、养殖、肉乳制品及阿胶生产于一体的产业链条;
但这些措施只是在宏观数量上考虑缓解驴皮的紧缺性,如何结合现代生物学的知识,来提高驴皮的利用率和开发新的阿胶生产途径是科研上急需跟进解决的问题[6]。
驴皮具有很高的医药价值,是制作“国药瑰宝—阿胶”的主要原料。
作为具有2000多年历史的传统中药,阿胶有补血、止血、滋阴润燥之功效,能促进血中红细胞和血红蛋白的合成。
从驴肉、驴皮目前的市场需求情况看,都具有极大的市场空间。
据不完全统计,目前全国各类阿胶企业达30余家,驴皮产值达近五十亿元。
但是,目前却出现了“有市无货”的尴尬局面[6]。
以山东为例,1995年有驴150万头;
2009年,山东的驴仅剩13.4万头,仅是1995年驴数量的9%。
由于驴皮产量的急剧减少,市场上出现很多以次充好、以假乱真用牛皮、马皮制作的假阿胶,对市场产生了极坏的影响。
山东东阿阿胶公司作为我国阿胶业的龙头老大,从2002年至今,分别在新疆、甘肃、内蒙古、辽宁等完成9个原料基地的建设;
相继在辽宁阜新市、新疆喀什地区、内蒙古赤峰市投资建设了3条活驴屠宰及深加工生产线,这将会推进我国驴皮、驴肉产业的集约化发展。
1.3动物组织中提取RNA的研究现状
从动物组织中提取总RNA是现代分子生物学研究中经常使用的重要实验技术,目前已有多种方法、试剂和商业化产品用于总RNA提取和纯化。
尽管商业化产品具有方法简单、RNA质量可靠的优点,但RNA产品中伴有大分子量染色体DNA污染,特别是以复杂的动物组织为原料时,这一问题显得特别突出[9]。
对某一生物组织进行性状研究,首先要获得该性状基因,从组织细胞中分离纯粹完整的RNA分子克隆和基因表达分析等实验是至关重要的。
完整RNA的提取和纯化,是进行RNA方面的研究工作,如Nothern杂交、mRNA分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。
目前,一些提取RNA的方法均存在着一定的缺陷和不尽人意之处,如一些试剂公司提供的RNA提取试剂盒,不但价格昂贵,而且RNA的产量较低。
所以研究RNA的提取方法以及影响因素可以获得高产量、高纯度的总RNA,以满足cDNA的克隆、Northen印迹及杂交分析、cDNA文库的构建等研究。
提取RNA的技术在国内外都得到迅速发展而且应用非常广。
细胞中的RNA可分为信使RNA、转运RNA和核糖体RNA三大类,不同组织总RNA提取实质就是将细胞裂解,释放出RNA,并通过不同方式去除蛋白、DNA等杂质,最终获得高纯RNA产物的过程[7]。
目前提取RNA的方法较多,有异硫氰酸胍法,热硼酸法,CTAB法,Trizol法等。
CTAB法是一种广泛应用于DNA的提取方法,后来被应有到RNA的提取。
在CTAB提取缓冲中的温育时间以及机械摇动力是影响所提RNA质量质量。
我们用Trizol法提取新疆驴真皮组织中的RNA[12]。
由于RNA样品易受环境因素特别是RNA酶的影响而降解,提取高质量的RNA样品在生命科研中具有相当的挑战性。
RNA提取对样品的新鲜性要求非常高,获取样品后最好立即提取RNA,若无条件立即实验,应于-80℃或液氮中保存样品,提取时取出样品后立即在低温下研磨裂解细胞,以防RNA降解[10,13]。
提取得到RNA溶液后,我们需要对RNA进行相关的质量检测,以确定它是否符合后续实验的要求。
RNA用于不同的后续实验,对其质量要求不尽相同。
cDNA文库构建要求RNA完整且无酶等抑制物残留;
Northernblot实验对RNA完整性要求较高,对酶反应抑制物残留要求较低;
RT-PCR实验对RNA完整性要求不太高,但对酶反应抑制物残留要求严格。
因此在进行不同的实验时应选择不同的方法纯化RNA,以达到最佳的实验效果[11]。
随着现代生物技术的快速发展和功能基因组学研究的不断深入,寻找与驴真皮用性状相关的基因及其功能验证已经成为当前研究的核心和趋势。
因此,从驴皮肤组织中获取纯度高、完整性好的总RNA是后续RT-PCR、Northern、差异显示分析、转录组测序等分子生物学研究的基础。
2材料与方法
2.1实验材料
2.1.1实验动物
本实验用驴来自阿克苏驴肉屠宰场,采集健康成年的四岁新疆驴背部、腿部、颈部和腹部皮肤组织。
2.1.2样本的采集与处理
将待屠宰的驴在头部击晕后,颈动脉放血处死,用刀片将背部、腿部、颈部和腹部被毛剔除,用肥皂水清洗,75%酒精消毒后,用取皮器采集直径为1cm2的皮肤组织,装入1.5mL的冻存管内后,迅速投入液氮罐中进行速冻保存,每个部位采集3个样本,运回实验室后,置于-80℃冰箱冷冻保存。
2.1.3主要实验仪器
电子天平,超净工作台,高速冷冻离心机(Sigma3K30型,德国),高压锅(YX280B上海三申),恒温干燥箱(ZRD-A7140),微波炉,恒温水浴锅,微量紫外分光光度计,可调微量移液枪,电泳槽、电泳仪(DYY-12),凝胶样品梳,琼脂糖凝胶成像仪,研钵,枪头盒,1.5ml离心管,量筒等。
2.1.4主要的实验试剂
Tirzol分装瓶(Sigma,德国),75%乙醇,0.1%DEPC水:
氯仿,异丙醇,液氮,TBE,EB,超纯水;
2.1.5实验试剂的配制
1)0.1%DEPC水的配置:
1000mL超纯水+1mLDEPC
2)无RNA酶灭菌水:
用将高温烘烤的玻璃瓶装蒸馏水,然后加入0.1%的DEPC(体积/体积),处理过夜后高压灭菌。
3)75%乙醇:
75mL无水乙醇+25mL无RNA酶灭菌水,装入高温烘烤的玻璃瓶中,存放于低温冰箱。
4)琼脂糖凝胶的配置:
0.25g琼脂糖粉+25mL0.5×
TBE缓冲液在微波炉内加热使琼脂糖完全溶解。
5)电泳缓冲液(5×
TBE)的制备:
Tris碱54g+硼酸27.5g+0.5mol/ulEDTA20mL用无RNA酶灭菌水定容至1000mL,用时稀释至1x。
2.2方法
2.2.1实验前的准备
1)配置0.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡试验用玻璃瓶器皿、不锈钢器具和研钵等过夜,再用蒸馏水冲洗干净,置于干燥烘箱中烘干后,用干净报纸或锡箔纸包装后高压灭菌2次。
2)塑料容器如离心管、枪头等用0.1%的焦碳酸二乙酯(DEPC)水溶液浸泡过夜取出RNA酶,再装入玻璃瓶或枪头盒内,用报纸包装后高压灭菌1次。
3)凡RNA提取用到的试剂,必须用无RNA酶灭菌水配置。
4)实验前把实验室用84消毒液对实验室桌面,窗台,地面进行消毒;
用75%酒精擦拭超净工作台面,离心机内外表面,用含有84消毒液将门口铺垫洗涤,一直保持打湿状态。
将实验时所用的高压灭菌的器皿放入超净工作台,并把干净的实验服、帽子和口罩等也提前放入操作室,打开紫外线灯照射一个晚上。
5)操作前再次用75%酒精擦拭台面或用灭菌报纸铺与操作台上,操作人员必须戴无RNA酶手套、口罩和帽子,操作时经常更换一次性手套和口罩。
2.2.2Trizol法提取RNA的操作步骤
1)液氮研磨:
向研钵中加入液氮降温研钵,反复预冷研钵3次。
然后加入液氮,在液氮中将组织敲碎后用力研磨,待组织变软时,再加少量液氮,再研磨,如此三次,按每50-100mg组织加入1.5mLTrizol,继续研磨后轻轻混匀,转移入1.5mL离心管。
2)室温裂解:
室温放置5min,使其充分裂解。
3)4℃,12000rpm离心10min,取上清液于另一离心管。
4)按300ul氯仿/1.5mLTrizol加入氯仿,盖紧离心管,漩涡振荡混匀离心管15秒,室温放置5分钟。
5)4℃,12000rpm离心15min。
6)管子倾斜45度,用移液管吸取上层水相,至另一新的离心管中,注意千万不要吸取中间界面。
按0.75ml异丙醇/1.5mLTrizol加入异丙醇混匀,室温放置5-10min。
7)4℃,12000rpm离心10min,弃上清,RNA沉于管底。
8)按1mLTrizol加入1.5mL75%乙醇,温和振荡离心管,悬浮沉淀。
4℃,7500rpm离心5min。
此步骤重复两次。
9)小心弃去上清液,再用小离心机离心数秒,用20uL的枪移走剩余的水,然后室温或真空干燥5-10分钟,注意不要干燥过分,否则会降低RNA的溶解度。
10)用无酶水20uL吹打几次,溶解RNA,并用封口胶封住EP管的口,必要时可55℃-60℃水溶10-15分钟。
2.3RNA的纯度检测
取1uL用无酶水溶解的RNA,用微量紫外分光光度计测定了所提皮肤组织RNA样品的浓度和纯度。
2.4RNA完整性鉴定
用1%的琼脂糖凝胶电泳,来检测所提总RNA的质量。
1)制胶:
准确称取0.25g琼脂糖放入经高压灭菌的锥形瓶中,加入25mL0.5×
TBE缓冲液,微波炉加热溶解,待液体温度降到50℃左右时,将凝胶溶液轻轻倒入电泳凝胶板上,除去气泡;
待凝胶凝固后,小心取出点样梳。
2)在电泳槽中加入1×
TBE电泳缓冲液,将胶板放入电泳槽中(点样孔一端靠近电泳槽的负极),使电泳缓冲液没过胶面。
3)点样:
取用无酶水溶解的RNA样品6uL,2×
的loadingbuffer3uL于另一离心管,用移液枪枪头吹打混合均匀,取4uL加样于凝胶点样孔内。
4)电泳:
连接电泳槽与电泳仪之间的电源线,正极为红色,负极为黑色。
打开电泳仪在80—110的电压下开始电泳,为了使离子混合均匀,在点样前,可让电泳仪空跑几分钟。
当指示剂跑过胶板的2/3,可终止电泳;
切断电源后,将电泳凝胶块放在凝胶成像仪中观察,拍照。
3结果
3.1新疆驴皮肤组织RNA浓度检测
表一四岁新疆驴皮肤组织不同部位RNA浓度检测结果
SampleID
NucleicAcidConc./ng/µ
l
A260
A280
260/280
260/230
背部
396.8
8.419
4.505
1.869
2.20
腿部
239.6
5.389
2.909
1.852
2.11
颈部
335.7
6.992
3.889
1.815
2.05
腹部
338.7
7.067
3.906
1.826
1.95
由表一可以看出,四岁新疆驴皮肤组织不同部位RNA浓度在239.6~396.8ng/µ
L,OD260/280值在1.82~1.87之间,OD260/230值在1.95~2.20之间,表明本次实验所提取的RNA的纯度较好,蛋白质、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等杂质的含量低,可以做cDNA和荧光定量等后续实验。
3.2提取RNA的电泳分析图
28sRNA
18sRNA
5sRNA
图1四岁驴腹部皮肤组织图2四岁驴腿部皮肤组织
图3四岁颈部皮肤组织图4四岁驴背部皮肤组织
结果表明,RNA完美提出来的话应该是三条带:
28SrRNA,18SrRNA和5SrRNA。
在琼脂糖凝胶电泳图1和图3看到28SrRNA条带不清晰,比18SrRNA条带暗,说明完整性不太好。
在图2和图4上可以清晰地看到28S和18SrRNA,说明RNA完整性和质量较好。
5S基本很模糊。
4讨论
4.1RNA提取质量影响因素的分析
RNA的提取和纯化是构建DNA文库,RT-PCR,RNA序列分析以及northernblot等实验的基础,所得的总RNA质量高低会直接影响到后续实验的结果。
研究表明,RNA提取完美的状态是:
1)RNA浓度应不小于500ng/µ
l;
2)微量分光光度计检测OD260/280在1.9-2.1之间,大于1.8就认为RNA的纯度较好;
OD260/280值小于1.8,则表明蛋白杂质较多;
OD260/280值大于2.2,则表明RNA已经降解。
OD260/230值小于2.0,则表明裂解液中有异硫氰酸胍和β-巯基乙醇残留。
用TE溶解或洗脱RNA时,OD260/280值偏高,用无酶水溶解或洗脱RNA时,OD260/280值偏低。
3)琼脂糖凝胶电泳图上可显示清晰的28SrRNA和18SrRNA条带,模糊的5SrRNA条带,且28SrRNA的亮度和宽度为18SrRNA的两倍。
本实验结果中,RNA的总浓度(239.6~396.8ng/µ
l)低于逆转录需求的500ng/µ
l,主要原因是稀释用无酶水量过大(20µ
l),后续实验减用10µ
l的无酶水稀释;
OD260/280值虽没达到完美状态值(1.9-2.1),但所测部位值均大于1.8,OD260/230值除腹部外,均大于2.0,说明可以进行后续分子实验。
在琼脂糖凝胶电泳RNA完整性检测结果中,腹部和颈部图一和图三28SrRNA条带不清晰,比18SrRNA条带暗,表明在提取过程中出现了RNA酶和DNA的污染,使部分28SrRNA片段进行了降解,降解为更小的18SrRNA片段,从而使电泳图中18S条带反而比28S条带明亮。
因此,在RNA提取过程中,要严格按照操作指南,防止内源性和外源性因素对RNA的降解和污染。
所有器材必须进行高压灭菌,只有在使用时才打开。
试剂必须用高压灭菌的DEPC处理水配置,并且小瓶分装,提一次用一瓶。
实验过程必须带手套,口罩,保持台面清洁,避免外源RNA酶的污染。
组织研磨必须在液氮或裂解液的作用进行,研磨要迅速,用液氮研磨必须及时添加液氮,保持低温。
样品量不宜太多,裂解液的裂解能力有限,样品量过多的话,裂解液不能有效地把所有RNA酶抑制。
造成RNA降解另外一个因素是电泳槽中缓冲液使用次数过多,缓冲能力下降,TBE缓冲液最多可使用10次。
5结论
本实验结果表明在RNA提取整个实验过程中,必须在低温,无酶条件下快速进行。
本实验用Trizol法,从健康成年的新疆驴不同部位皮肤组织提取的RNA,纯度和完整性均比较好,可以进行后续的基因荧光定量和基因克隆等分子生物学实验。
致谢
本论文是在王艳萍老师的亲切关怀指导和同学们的热心帮助下完成的。
从整个实验的进程及论文写作与修改都疑聚着王老师的心血。
在整个实验中,老师的严肃认真的态度使我受用终生。
渊博的学习知,务实的工作风也使我毕业生难忘。
在生活中也给予了莫大的关怀和帮助。
为此,谨向王艳萍老师致以崇高敬意和衷心的感谢。
此外要特别感谢最敬爱父母与家人,使他们在我身后默默的支持和关爱着我,使我能够有信心和力量去面对对学习和生活中的困难。
最后衷心感谢塔里木大学动物科学学院的老师们在我的学习及生活中给予的帮助。
在大学五年期间,各任课老师在学习上给予了很大的帮助,如果不是他们的悉心教导,我就不会取得优异的成绩,在此向各位曾经传授我知识的老师们表示感谢。
祝你们工作顺利。
参考文献
[1]高雪.中国驴种来源的遗传学研究[D].西北农林科技大学,2001,4;
4~5.
[2]高雪,史明艳.中国主要驴品种亲缘关系研究[J].陕西:
杨陵西北农林科技大学,2001:
10~11.
[3]杨虎.新疆驴三个地方类群的微卫星遗传分析及与体尺性状的关系[D];
石河子大学,2007,04.
[4]陈荣.新疆驴种质资源研究进展[J].畜牧兽医,2007,(4):
79~80.
[5]巴特尔.发展新疆驴产业,培育增收新亮点[J].新疆畜牧业,2011,(4);
6~10.
[6]王培基,赵芸君,王文奇,等.新疆驴的现状、品种特性及发展对策[J].中国电力教育,2007,28(4):
15~16.
[7]林玲,杨燕凌,何海福,等.总RNA提取方法的比较与分析[J]
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