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同时,对细胞免疫的研究也取得了明显的进展,过去认为小淋巴细胞是处于衰老终末期,而现在
正常红细胞电镜图
已肯定它是免疫系统的一大类具有免疫活性的淋巴细胞,在发挥免疫功能中起着重要作用。
此后人们进一步阐明了小淋巴细胞的结构,以及个体的发生和分化过程,特别是在杂交瘤技术方面取得了突破性的成就,这不仅丰富了一般细胞学的知识,而且为获得单克隆抗体或介质物质开辟了一条新的道路。
许多学者还注意到:
当病原微生物入侵的时候,机体一方面能够获得特异性免疫,另一方面也会出现机体免疫损害。
自从德国细菌学家科赫研究结核杆菌所引起的迟发型变态反应以来,人们逐步发现不仅细菌及其产物可以引起机体免疫损害,就连异种血清蛋白甚至许多很简单的化学物质再次进入机体,也会使机体组织遭到破坏。
20世纪中期,随着组织器官移植的开展,对移植物排斥、免疫耐受性、免疫抑制、免疫缺陷、自身免疫、肿瘤免疫等进行了深入的研究,认识到胸腺、法氏囊和脾脏在机体免疫功能中的重要意义,认识到过去把免疫过程局限于抗传染免疫的片面性,也认识到免疫应答是既可防御传染和保护机体、又可造成免疫损害和引起疾病的一个生物学过程。
也就是说,免疫是生物体对一切非己分子进行识别与排除的过程,是维持机体相对稳定的一种生理反应,是机体自我识别的一种普遍生物学现象。
免疫学-免疫学应用
免疫学广泛应用于三大方面:
①传染病预防:
接种菌苗、疫苗,使机体主动产生免疫力.严重急性呼吸道综合征(SARS)及艾滋病,终将有赖于疫苗的发明。
②疾病治疗:
包括肿瘤、慢性传染病及超敏性疾病,可用抗体、细胞因子、体外扩增的免疫细
胞及治疗性抗原疫苗治疗。
③免疫诊断:
按抗原与抗体及T
细胞受体特异结合的原理;
按抗原能活化特异的适应性免疫应答,发展起多种特异敏感的免疫学诊断方法,已广泛用于ABO血型定型,传染病诊断,妊娠确诊等等。
[2]
免疫学-免疫功能
现代免疫学认为,机体的免疫功能是对抗原刺激的应答,而免疫应答又表现为免疫系统识
吞噬细胞吞噬病菌
别自己和排除非己的能力。
免疫功能根据免疫识别发挥作用。
这种功能大致有:
对外源性异物(主要是传染性因子)的免疫防御;
去除衰退或损伤细胞的免疫,以保持自身稳定;
消除突变细胞的免疫监视。
只有免疫系统在正常条件下发挥相应的作用和保持相对的平衡,机体才能维持生存。
如果免疫功能发生异常,必然导致机体平衡失调,出现免疫病理变化。
免疫系统在发挥免疫功能的过程中,识别是个重要的前提。
一切生物都具有这种能力。
单细胞生物只具有分辨食物、入侵微生物和本身细胞成分等低级的识别功能。
脊椎动物的机体免疫系统逐渐完善,不仅具有完整的免疫器官和免疫细胞,而且免疫活性细胞还能产生特异性抗体和琳巴因子,从而准确地识别自己,排除异物以达到机体内环境的相对稳定,这对保护自己、延续种族和生物进化都有重大意义。
高等生物的免疫系统充分发展,它对内外环境的各种抗原异物刺激既表现出多样性和适应性,又表现出特异性和回忆性,这对生物的进化过程、生物种系的生存和适应具有重大影响。
免疫功能是免疫系统在识别和清除“非己”抗原的过程中所产生的各种生物学作用的总称。
主要包括:
1.免疫防御(Immunologicaldefence)
是机体排斥外来抗原性异物的一种免疫保护功能。
正常时可产生抗感染免疫的作用,防御功能过强会产生超敏反应,过弱则产生免疫缺陷(后两种情况均属异常反应)。
2、免疫自稳
是机体免疫系统维持内环境相对稳定的一种生理功能。
巨噬细胞
环境总经济价值=环境使用价值+环境非使用价值
正常时:
机体可及时清除体内损伤、衰老、变性的血细胞和抗原-抗体复合物,而对自身成份保持免疫耐受;
异常时:
发生生理功能紊乱、自身免疫病等。
3、免疫监视
是机体免疫系统及时识别、清除体内突变、畸变和病毒干扰细胞的一种生理保护作用。
丧失:
机体突变细胞失控,有可能导致肿瘤发生;
或出现病毒的持续感染。
免疫学-检测方法
免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫测定。
1.
体液免疫测定主要利用抗原与相应抗体在体外发生特异性结合,并在一些辅助因子参与下出现反应,从而用已知抗原或抗体来测知未知抗体或抗原。
此外,尚包括检测体液中的各种可溶性免疫分子,如补体、免疫球蛋白、循环复合物、溶菌酶等。
2.
细胞免疫测定法是根据各种免疫细胞(T细胞、B细胞、K细胞、NK细胞及巨噬细胞等)表面所具有的独特标志和产生的细胞因子等,测定各种免疫细胞及其亚群的数量和功能,以帮助了解机体的细胞免疫水平。
体液免疫检测法
体液免疫检测法主要包括:
(1)可能造成重大环境影响的建设项目,编制环境影响报告书,对产生的环境影响应进行全面评价;
抗原抗体
1.凝集反应。
颗粒性抗原(细菌或红细胞等)与相应抗体特异性结合,在电解质参与下形成肉眼可见的凝集物,称之为凝集反应。
1)直接凝集反应。
颗粒性抗原与相应抗体直接结合所产生的凝集现象,前者多为细胞表面的结构成分,如细菌或红细胞的表面结构抗原。
(1)玻片法:
多用于抗原的定性检测。
(2)试管法:
多用于抗体的定量检测。
2)间接凝集反应。
将可溶性抗原吸附于载体颗粒(如乳胶颗粒、红细胞等)的表面,称之为致敏颗粒。
当致敏颗粒与相应抗体结合,即可出现凝集现象。
这个反应常用于测定细菌性抗体、病毒性抗体、钩端螺旋体和梅毒螺旋体抗体及某些自身抗体(如抗核抗体、抗肾抗体、抗甲状腺抗体等)。
根据凝集反应的原理,还有间接凝集抑制试验、反向间接凝集试验、协同凝集试验等。
2.沉淀反应。
可溶性抗原(外毒素、血清、细菌培养的滤液、组织浸出液等)与相应抗体特异性结合,在电解质参与下,形成沉淀物,称为沉淀反应。
沉淀反应的抗原多为多糖、类脂、蛋白质等。
1)单向扩散试验。
这是一种抗原定量试验,是可溶性抗原在含抗体的琼脂介质中扩散的沉淀反应。
此法常用于检测血清免疫球蛋白和补体各成分的含量。
2)双向扩散试验。
这是可溶性抗原与抗体在琼脂介质中相互扩散的沉淀反应。
本法常用于定性试验,如检测血清免疫球蛋白、甲胎蛋白、乙型肝炎表面抗原等。
3.不同等级的环境影响评价要求
单克隆抗体技术
综合性规划
(1)土地利用的有关规划;
3)对流免疫电泳。
对流电泳是一敏感快速的检测方法,即在电场作用下的双向免疫扩散。
此法常用于检测血清中的乙型肝炎表面抗原与甲胎蛋白等。
3.中和试验。
特异性抗体可抑制相应抗原物质的活性,抗体使相应抗原的毒性或传染性消失的反应为中和试验。
例如抗毒素中和外毒素的毒性,病毒的中和抗体可使病毒失去感染性等。
诊断风湿热的抗链球菌溶血毒素“O”试验也为一种中和试验。
乙型溶血性链球菌能产生一种溶解人、兔红细胞的溶血毒素“O”,该毒素的溶血毒性可被抗溶血毒素“O”抗体所中和而不出现溶血。
试验时将病人血清与溶血毒素“O”混合,作用一段时间后加入人红细胞,红细胞不被溶解为阳性反应,表示病人血清中存在抗溶血毒素“O”抗体。
血清抗体效价达400单位以上时提示患者曾感染乙型溶血性链球菌,有助于风湿热的诊断。
4.免疫荧光法(荧光抗体法)。
是应用荧光素染料(如异硫氰酸荧光黄等)来标记抗体,但不影响其活性,此种抗体称荧光抗体。
用已知种类的荧光抗体浸染待检的含有抗原的细胞或组织切片,如有相应抗原存在,则抗原即与此种抗体发生特异性结合,形成复合物而粘着在细胞上,不易洗脱,在荧光显微镜下成为发出荧光的可见物,可达到诊断或定位的目的。
包括直接法和间接法。
5.酶联免疫吸附试验。
本法的原理是利用酶(常用辣根过氧化物酶)标记的抗原或抗体,以测定被检标本中有无相应的抗原或抗体。
有间接法、双抗体法、竞争法三种。
6.溶血空斑试验。
7.免疫印迹技术。
免疫印迹或免疫转印技术(immunoblotting或Westernblot)是在Southern(1975)
1.环境影响评价依据的环境标准体系
抗体抗原反应
一、环境影响评价的发展与管理体系、相关法律法规体系和技术导则的应用创建的DNA印迹术(Southernblotting)基础上发展起来的新型免疫生化技术。
四、安全预评价细胞免疫检测法
近代免疫学广泛采用了细胞生物学、免疫血清学、免疫标记、免疫组化等多方面技术,不断发展和完善了一系列细胞免疫检测技术,用于检测各类免疫细胞的表面标志(包括抗原及受体)、细胞的活化、增殖、吞噬、杀伤功能、各种细胞因子的活性或含量等方面。
这些技术为深入研究和认识机体免疫系统的生理、病理改变,阐明某些疾病的发病机制和临床诊治提供了有用的手段。
随着细胞免疫学的迅猛发展,时有新的细胞免疫检测技术出现。
近年来,新发展的项目集中在对有关细胞因子以及细胞受体方面的检测。
1.淋巴细胞转化试验。
人类淋巴细胞在体外与特异性抗原(如结核菌素)或非特异性有丝分裂原(如植物血凝素,PHA)等一起孵育,T细胞即被激活而向淋巴母细胞转化。
T细胞转化过程可伴随有DNA、RNA、蛋白质的合成增加,最后导致细胞分裂。
在光学显微镜下可计数转化后的淋巴母细胞数,也可用氚标记的胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入正在分裂的淋巴细胞,用液闪测定仪来确定掺入量以确定淋巴细胞转化率。
最近有一种不用同位素,又可用仪器测量的淋巴细胞增殖反应的检查法,称为MTT检测法。
MTT是一种甲氮唑盐,它是细胞线粒体脱氢酶的底物,细胞内的酶可将MTT分解产生蓝黑色成分。
该产物的多少与活细胞数成正比,结果可用酶标仪(595nm)测量光密度,作为MTT法的指标。
2.E-花环法。
人类T细胞表面有羊细胞受体(CD2)能与羊红细胞结合形成玫瑰花样结构。
即将分离液分离出的外周的单个核细胞悬液与羊红细胞在体外混合,经37℃培养5~10分钟后放4℃过夜,取细胞悬液计数,外周血淋巴细胞中约70%~80%淋巴细胞结成花环即为T细胞,此法可用来分离T细胞。
3.T细胞亚群检测。
4.细胞毒试验。
Tc细胞、NK细胞、LAK细胞、TIL细胞等对其靶细胞有直接的细胞毒(杀伤)作用。
抗体制备
常用的检测方法是51Cr(铬)释放法,将51Cr-Na2CrO4盐水溶液与靶细胞(不同的细胞需不同的靶细胞,如NK细胞的靶细胞为K562),于37℃培养1小时左右,51Cr即进入靶细胞,与胞浆结合,洗去游离的51Cr后,即可得到51Cr标记的靶细胞,将待测细胞毒的细胞与51Cr标记的靶细胞混合(比例约为50:
1或100:
1),靶细胞杀伤越多,释放到上清液中的游离51Cr就越多,且不能再被其他细胞吸收,用γ射线测量仪检测上清液中的cpm值,可计算出待检细胞杀伤活性高低。
细胞毒的检测对肿瘤免疫有较大价值。
5.巨噬细胞吞噬功能的测定。
将中药(10%斑蝥)乙醇浸出液浸渍的滤纸(1cm2大小)置于受试者前臂屈侧皮肤上,4~5小时后取下滤纸。
48小时内皮肤局部可水泡,内含巨噬细胞。
取水泡液0.5ml加鸡红细胞悬液0.01ml,37℃经30分钟后作涂片、染色与镜检,计算吞噬百分率及每个巨噬细胞吞噬鸡红细胞的平均数。
本试验有助于肿瘤病情及疗效的观察。
6.移动抑制试验。
致敏淋巴细胞与其特异性抗原再次接触时,可以产生移动抑制因子(MIF)。
这种因子可以抑制巨噬细胞和中性粒细胞的移动,使之定位于局部而增强其免疫作用。
本试验用来观察受检者淋巴细胞在体外受特异性抗原刺激后,有无MIF产生,以测定机体对某种抗原的特异性细胞免疫反应的功能。
7.时间分辨荧光测量技术。
时间分辨荧光测量技术(time-resolvedfluorometry,TrF)是一项新型的超微量非放射性分析技术。
该技术的敏感性和特异性与放射性核素测量技术相仿,但无放射测量的弊端,故问世虽短,进展却极为迅速,有取代放射测量之势。
8.细胞因子检测技术。
细胞因子的检测,近年来在中医临床及实验室中已广泛应用。
9.细胞受体的检测。
受体是细胞表面标志之一,通过对受体的检测,可以了解细胞的功能,并为某些疾病的发病机制提供一定的理论依据。
免疫学-应用
B.可能造成重大环境影响的建设项目,应当编制环境影响报告书新中国成立以来,免疫学在医学上的应用已经有了很大进展。
防治传染病的生物制品
2)购买环境替代品。
免疫学
不仅满足国内的需要,而且支援其他一些国家。
近年研制的新疫苗如化学疫苗、乙型肝炎疫苗等,已经接近世界先进水平。
中国已经消灭天花,并且基本上消灭和控制了人间鼠疫和真性霍乱等烈性传染病。
脊髓灰质炎、麻疹、白喉、百日咳、破伤风等常见传染病的发病率已经大大降低。
现代免疫学逐步发展成为既有自身的理论体系、又有特殊研究方法的独立学科。
它为生物学的研究提供了一些新的手段。
早在20世纪初,人们已经利用免疫学来区分人类的血型。
植物分类学很早就应用免疫学的方法。
在研究植物和动物的毒素时也采用了免疫学技术。
例如,1889~1890年,人们用免疫学技术研究白喉毒素和破伤风毒素,随后又用它来研究植物毒素,如蓖麻毒素、巴豆毒素和动物毒素中的蛇毒、蜘蛛毒。
另外,人们很早就利用沉淀反应鉴别动物的血迹。
近年发展起来的一些新技术,如放射免疫、免疫荧光和酶免疫等,都为生物学提供了实用的研究手段。
[答疑编号502334050102]免疫学-分支学科
从实质上说,现代免疫学不过是生物-医学的一个分支。
但是,随着科学技术的发展,
多克隆抗体制备
它本身又派生出许多独立的分支学科,例如,与现代生物学有密切关系的分子免疫学、免疫生物学和免疫遗传学,与医学有密切关系的免疫血液学、免疫药理学、免疫病理学、生殖免疫学、移植免疫学、肿瘤免疫学、抗感染免疫学、临床免疫学等。
现在,对免疫学的研究已经达到细胞水平和分子水平,人们正在努力探讨生物的基本生理规律——免疫的自身稳定机制。
医学中的许多重要问题,如自身免疫、超敏反应、肿瘤免疫、移植免疫、免疫遗传等,必将得到更好的解决。
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- 整理 免疫学 医学 中的 应用