常用培养基配方Word文档格式.docx
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47WS琼脂
48麦康凯琼脂
49伊红美蓝琼脂(EMB)
50三糖铁琼脂(TSI)
51三糖铁琼脂(换用方法)
52克氏双糖铁琼脂(KI)
53克氏双糖铁琼脂(换用方法)
54葡萄糖半固体发酵管
555%乳糖发酵管
56CAYE培养基
57Honda氏产毒肉汤
58Elek氏培养基(毒素测定用)
59氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基
60胰蛋白胨水
61Rustigian氏尿素培养液
62氯化钠结晶紫增菌液
63氯化钠蔗糖琼脂
64嗜盐菌选择性琼脂
653.5%氯化钠三糖铁琼脂
66氯化钠血琼脂
673.5%氯化钠生化试验培养基
68改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用)
69CIN-1培养基
70嗜盐性试验培养基
71改良Y培养基
72改良克氏双糖
73快速硫化氢(H2S)试验琼脂
74DNA酶甲基绿琼脂(DTA)
75Cary-Blair氏运送培养基
76Skirrow氏培养基
77TTC琼脂
78甘氨酸培养基
79改良磷酸盐缓冲液
80氯化镁孔雀绿肉汤
81胰酪胨大豆肉汤
82Baird-Parker氏培养基
837.5%氯化钠肉汤
84匹克氏肉汤
85甘露醇卵黄多粘菌素琼脂
863.8%柠檬酸钠溶液
87酪蛋白琼脂
88木糖-明胶培养基
89庖肉培养基
90卵黄琼脂培养基
91
(SPS)
亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂
92液体硫乙醇酸盐培养基(FT)
93
含铁牛奶培养基
94
动力-硝酸盐培养基(
A法)
95
动力-硝酸盐培养基
(B法)
96
血清肉汤
97
马丁氏肉汤
98明胶培养基
99察氏培养基
100高盐察氏培养基
101马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)
102马铃薯琼脂
103孟加拉红培养基
104玉米粉琼脂
105大米粉培养基
106亚硒酸盐煌绿增菌液
107煌绿肉汤增菌液
108肠毒素产毒培养基
1090.1%蛋白胨水稀释剂
110半固体琼脂
成分:
牛肉膏5g
蛋白胨10g
氯化钠3g
磷酸氢二钠(Na2HPO412H2O)2g
0.2%滇麝香草酚蓝溶液12mL
蒸馏水1000mL
pH7.4
制法:
1葡萄糖发酵管按上述成分配好后,
按0.5%加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内,
121C高压灭菌15min。
2其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶100mL,121C高压灭菌15min。
另将
各种糖类分别配好10%溶液,同时高压灭菌。
将5mL糖溶液加入于100mL培养基内,以无菌操作分装小试管。
注:
蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌。
试验方法:
从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于36C±
C培养,一般观察2〜3d。
迟缓反应
需观察14〜30d。
02ONPG培养基
邻硝基酚3-D-半乳糖昔(ONPG)60mg
(0—Nitrophenyl—3—D—galactopyranoside)
0.01mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5)10mL
1%蛋白胨水(PH7.5)30mL
将ONPG溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,以过滤法除菌,分装于10mmX75mm试管,
每管0.5mL,用橡皮塞塞紧。
自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种,于36±
1C培养1〜3h和24h观察结果。
如果
3-半乳糖苷酶产生,则于1〜3h变黄色,如无此酶则24h不变色。
氯化钠
5g
硫酸镁(MgSO47H2O)
0.2g
磷酸二氢铵
1g
磷酸氢二钾
柠檬酸钠
琼脂
20g
蒸馏水
1000mL
0.2%溴麝香草酚蓝溶液
40mL
pH6.8
先将盐类溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化。
然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121C高压灭菌15min。
放成斜面。
挑取少量琼脂培养物接种,于36±
1C培养4d,每天观察结果。
阳性者斜面上有菌落生长,培养基从绿色转为蓝色。
多胨
7g
葡萄糖
pH7.0
溶化后校正pH,分装试管,每管1mL,121C高压灭菌15min。
甲基红(MR)试验:
自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中,于36±
C培养2〜5d,哈夫尼
亚菌则应在22〜25C培养。
滴加甲基红试剂一滴,立即观察结果。
鲜红色为阳性,黄色为阴性。
甲基红试剂配法:
10mg甲基红溶于30mL95%乙醇中,然后加入20mL蒸馏水。
V—P试验:
用琼脂培养物接种本培养基中,于36±
1C培养2〜4d。
哈夫尼亚菌则应在22〜25C培养。
加入6%a—萘酚—乙醇溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0.2mL,充分振摇试管,观察结果。
阳性反应立刻或于数分钟内出现红色,如为阴性,应放在36±
1C下培养4h再进行观察。
3g
酵母浸膏
0.5g
单盐酸半胱氨酸
0.1g
磷酸二氢钾
0.2%酚红溶液
6mL
15g
加热溶解,分装试管,121C高压灭菌15min。
用琼脂培养物接种整个斜面,在36±
1C培养7d,每天观察结果。
阳性者培养基变为
O
06丙
硫酸铵
2g
0.6g
0.4g
丙二酸钠
12mL
先将酵母浸膏和盐类溶解于水,校正pH后再加入指示剂,分装试管,121C高压灭菌
15min。
用新鲜的琼脂培养物接种,于
36±
C培养48h,观察结果。
阳性者由绿色变为蓝色。
先将盐类和糖溶解于水内,校正
pH,再加琼脂,加热溶化,然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121C高压灭菌15min,放成斜面。
用接种针轻轻触及培养物的表面,在盐水管内做成极稀的悬液,肉眼观察不见混浊,
以每一接种环内含菌数在20〜100之间为宜。
将接种环灭菌后挑取菌液接种,同时再以同法接种
普通斜面一支作为对照。
于36±
1C培养24h。
阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长;
阴性者不生长,但在对照培养基上生长良好。
如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果。
容器使用前应用清洁液浸泡。
再用清水、蒸馏水冲洗干净,并用新棉花做成棉塞,干热灭菌后使用。
如果操作时不注意,有杂质污染时,易造成假阳性的结果。
08Hugh-Leifson培养基(0/F试验用)
蛋白胨
0.3g
4g
10g
pH7.2
将蛋白胨和盐类加水溶解后,校正pH至7.2。
加入葡萄糖、琼脂煮沸,溶化琼脂,然后
加入指示剂。
混匀后,分装试管,121C高压灭菌15min,直立凝固备用。
从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种,同时接种两支培养基,其中一支于接种后滴加溶化的1%琼脂液于表面,高度约1cm,于36±
C培养。
马尿酸钠1g
肉浸液100mL
将马尿酸钠溶解于肉浸液内,分装于小试管内,并于管壁画一横线。
以标志管内液面高度,
高压灭菌121C20min。
试剂:
三氯化铁(FeCI36H2O)12g,溶于2%盐酸溶液100mL中即成。
用纯培养物接种,于42C培养48h,观察培养液是否到达试管壁上记号处,如不足时,用蒸馏水补足至原量。
经离心沉淀,吸取上清液0.8mL,加入三氯化铁试剂0.2mL,立即混合均匀,经10〜15min,观察结果。
结果:
出现恒久之沉淀物为阳性。
牛肉膏
明胶
120g
pH6.8〜7.0
加热溶解、校正至pH7.4〜7.6,分装小管,121C高压灭菌10min,取出后迅速冷却,使其凝固。
复查最终pH应为6.8〜7.0。
用琼脂培养物穿刺接种,放在22〜25C培养,每天观察结果,记录液化时间。
或放
在36士1C培养,每天取出,放冰箱内30min后再观察结果。
酵母浸膏3g
DI—苯丙氨酸(或L—苯丙氨酸1g)2g
磷酸氢二钠1g
氯化钠5g
琼脂12g
加热溶解后分装试管,121C高压灭菌15min,使成斜面。
自琼脂斜面上挑取大量培养物,移种于苯丙氨酸琼脂,在36±
1C培养4h或18〜24h。
滴加10%三氯化铁溶液2〜3滴,自斜面培养物上流下,苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。
1.6%滇甲酚紫—乙醇溶液
1mL
L-氨基酸或DL-氨基酸
0.5或1g/100mL
除氨基酸以外的成分加热溶解后,分装每瓶100mL,分别加入各种氨基酸:
赖氨酸、精氨
酸和鸟氨酸。
L—氨基酸按0.5%加入,DL—氨基酸按1%加入。
再行校正pH至6.8。
对照培养基不加氨基酸。
分装于灭菌的小试管内,每管0.5mL,上面滴加一层液体石蜡,115C高压灭菌10min。
从琼脂斜面上挑取培养物接种,于36±
1C培养18〜24h,观察结果。
氨基酸脱羧酶
阳性者由于产碱,培养基应呈紫色。
阴性者无碱性产物,但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色。
对照管应为黄色。
13蛋白胨水(靛基质试验用)
蛋白胨(或胰蛋白胨)20g
按上述成分配制,分装小试管,121C高压灭菌15min。
靛基质试剂
柯凡克试剂:
将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中。
然后缓慢加入浓盐酸25mL。
欧-波试剂:
将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内。
然后缓慢加入浓盐酸20mL。
挑取小量培养物接种,在36±
1C培养1〜2d,必要时可培养4〜5d。
加入柯凡克试
剂约0.5mL,轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色;
或加入欧-波试剂约0.5mL,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。
蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。
每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用。
硫酸亚铁
硫代硫酸钠
12g
加热溶解,校正pH,分装试管,115C高压灭菌15min,取出直立候其凝固。
挑取琼脂培养物,沿管壁穿刺,于36±
1C培养1〜2d,观察结果。
产硫化氢者使培
养基变为黑色。
肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生,应采用三糖铁琼脂或本培养基。
0.4%酚红溶液
3mL
20%尿素溶液
100mL
pH7.2±
0.1
将除尿素和琼脂以外的成分配好,并校正pH,加入琼脂,加热溶化并分装烧瓶。
121C高压灭菌15min。
冷至50〜55C,加入经除菌过滤的尿素溶液。
尿素的最终浓度为2%,最终pH应为7.2±
0.1。
分装于灭菌试管内,放成斜面备用。
挑取琼脂培养物接种,在36±
1C培养24h,观察结果。
尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。
0.225g
磷酸氢二钠
5.64g
0.5%氰化钾溶液20mL
pH7.6
将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶,121C高压灭菌15min。
放在冰箱内使其充分冷
却。
每100mL培养基加入0.5%氰化钾溶液2.0mL(最后浓度为1:
10000),分装于12mmXl00mm灭菌试管,每管约4mL,立刻用灭菌橡皮塞塞紧,放在4C冰箱内,至少可保
存两个月。
同时,将不加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装试管备用。
17氧化酶试验
1%盐酸二甲基对苯二胺溶液:
少量新鲜配制,干冰箱内避光保存。
1%a萘酚一乙醇溶液。
取白色洁净滤纸沾取菌落。
加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴,阳性者呈现粉红色,并
逐渐加深;
再加a萘酚溶液一滴,阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色。
阴性于两分钟内不变色。
以毛
细吸管吸取试剂,直接滴加于菌落上,其显色反应与以上相同。
18硝酸盐培养基
硝酸钾
蛋白
溶解,校正pH,分装试管,每管约5mL,121C高压灭菌15min。
硝酸盐还原试剂:
甲液:
将对氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。
乙液:
将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。
接种后在36±
1C培养1〜4d,加入甲液和乙液各一滴,观察结果。
硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色。
本试验阴性的原因有三:
细菌不能还原硝酸盐;
亚硝酸盐继续分解,生成氨和氮;
培养基不适于细菌的生长。
如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解,可再加入锌粉少许,可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色。
1%盐酸二甲基对苯二胺溶液。
1%a-萘酚一乙醇溶液。
取37C(或低于37C)培养20h的斜面培养物一支,将两种试剂各2〜3滴,从斜面上端滴下,并将斜面略加倾斜,使试剂混合液流经斜面上的培养物。
如系平板培养物,则可用试剂混合液滴在菌落上。
于2min内呈现蓝色者为阳性。
阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应,2min以
后出现微弱或可疑反应均作为阴性结果。
3%过氧化氢溶液:
临用时配制。
挑取固体培养基上菌落一接种环,置于洁净试管内,滴加3%过氧化氢溶液2mL,观
察结果。
于半分钟内发生气泡者为阳性,不发生气泡者为阴性。
2%儿茶酚溶液。
3%过氧化氢溶液。
挑取固体培养基上菌落一接种环,置于洁净试管内,滴加2%儿茶酚溶液1mL及3%
过氧化氢溶液1mL。
静置于室温(20C)中30〜60min,观察结果。
阳性反应,细菌变为黑褐色;
阴性反应,细菌不变色。
过氧化物酶的作用可受氰化钾的抑制。
储存液
磷酸二氢钾34g
1mol/L氢氧化钠溶液175mL
蒸馏水825mL
先将磷酸盐溶解于500mL蒸馏水中,用1mol/L氢氧化钠溶液校正pH后,再用蒸馏水稀
释至1000mL。
稀释液:
取储存液1.25mL,用蒸馏水稀释至1000mL。
分装每瓶100mL或每管10mL,121C高压灭菌15min。
明胶2g
磷酸氢二钠4g
pH6.2
制法
:
加热溶解,校正pH,121C咼压火菌15min。
24乳酸-苯酚溶液
成分
苯酚
乳酸(比重1.21)
甘油
10mL
将苯酚在水中加热溶解,
然后加入乳酸及甘油。
用途
检验真菌形态时用。
25肉浸液肉汤
绞碎牛肉
500g
将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL,混合后放冰箱过夜,除去液面之浮油,隔水煮沸半小时,使肉渣完全凝结成块,用绒布过滤,并挤压收集全部滤液,加水补足原量。
加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐,溶解后校正pH7.4〜7.6煮沸并过滤,分装烧瓶,121C高压灭
菌30min。
肉浸液肉汤(PH7.4)1000mL
琼脂17〜20g
加热溶化琼脂,分装烧瓶或试管,121C高压灭菌30min。
根据需要,倾注平板或放成斜面。
绞碎牛肉(或牛心)
1000g
15%氢氧化钠溶液
27mL
胰蛋白酶
三氯甲烷
2000mL
1称取碎牛肉,加蒸馏水,隔水加热到80C,维持15min。
2加氢氧化钠溶液,对pH试纸呈弱碱性,冷至40C。
3加胰蛋白酶、氯仿,在36±
1C放置4〜5h,每小时摇动一二次。
44h后,吸取上层液5mL于试管中,加5%硫酸铜溶液0.1mL、4%氢氧化钠溶液5mL,混合之。
若呈红色,则不须再消化,可由温箱取出。
5加入15%乙酸溶液45mL,对pH试纸呈酸性。
6煮沸15min,使胰蛋白酶破坏,冷后,放冰箱内一夜。
7次日吸取上层清液,加氯化钠10g,并加水补足原量,煮沸。
8校正pH7.4〜7.6(加15%氢氧化钠溶液约10mL),加热,用滤纸过滤,分装烧瓶,121C高压灭菌20min。
①此培养基可作为琼脂培养基的基础,不需加蛋白胨。
②胰蛋白酶之配制:
称取去脂绞碎的猪胰500g,加入乙醇500mL、蒸馏水1500mL,混合之,装人玻塞瓶内。
每日摇匀三次。
3d后,用绒布过滤挤出其汁,加盐酸至0.05%,放冰箱内保存备用。
绞碎猪胃
100g
绞碎猪血块
浓盐酸
1洗涤猪胃,除去油脂,保留胃粘膜,用绞肉机绞碎。
2用绞肉机将猪血块绞碎。
3将蒸馏水加热至55C,加入猪胃、猪血块和盐酸,置55C水浴中24h,时常加以摇动。
4从水浴内取出,加入1moL/L碳酸钠溶液5mL,煮沸10min,置于冰箱内一夜。
5吸取上层清液,加磷酸氢二钾1g,加热至75C,加入1mol/L碳酸钠溶液45mL,煮沸,
校正pH7.2〜7.4。
6用滤纸过滤,分装烧瓶,121C高压灭菌20min。
牛心消化汤(PH7.4〜7.6)1000mL
琼脂20g
黄豆粉浸液50mL
将琼脂加在牛心消化汤内,加热溶解,过滤。
加入豌豆粉浸液,分装每瓶100mL,121C
高压灭菌15min。
豌豆粉浸液制法:
取豌豆粉5g、氯化钠10g,加入蒸馏水100mL。
置100C水浴内加热1h,放于冰箱中过夜。
吸取上清液即为豌豆浸液。
pH7.4〜7.6豆粉琼脂100mL
脱纤维羊血(或兔血)5〜10mL
加热溶化琼脂,冷至50C,以灭菌手续加入脱纤维羊血,摇匀,倾注平板。
亦可分装灭菌试管,置成斜面。
亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂。
牛肉膏3g
琼脂15〜20g
将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内,加入15%氢氧化钠溶液约2mL,校正pH至7.2〜
7.4。
加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化。
分装烧瓶,121C高压灭菌15min。
此培养基可供一般细菌培养之用,可倾注平板或制成斜面。
如用于菌落计数,琼脂量为1.5%;
如作成平板或斜面,则应为2%。
32营养肉汤
蛋白陈
按上述成分混合,溶解后校正
pH,分装烧瓶,每瓶225mL,121C高压灭菌15min。
将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,分装每管10mL,并放入一个
小倒管,115C高压灭菌15min。
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