具体PH缓冲液配制数据文档格式.docx
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6.949
7.500
9.391
10
3.996
6.921
7.472
9.330
20
3.998
6.879
7.429
9.226
25
4.003
6.864
7.413
9.182
30
4.010
6.852
7.400
9.142
35
4.019
6.844
7.389
9.105
40
4.029
6.838
7.380
9.072
45
4.042
6.834
7.373
9.042
简便配方:
PH4.01用10.21克在105度烘过的苯二甲酸氢钾,用水稀释定容1L,即为0.05mol/l。
PH6.87,3.39克在50度烘过的磷酸二氢钾和3.53克无水磷酸氢二钾,溶于水定容1L。
即为0.025mol/l磷酸二氢钾及0.025mol/l磷酸氢二钠溶液。
PH9.18用3.80克硼砂溶于无二氧化碳的冷水中定容1L。
pH计缓冲溶液是一种能使pH值保持稳定的溶液。
若向这种溶液中加入少量的酸或碱,或者在溶液中的化学反应产生少量的酸或碱,以及将溶液适当稀释,这个溶液的pH值基本上稳定不变,这种能对抗少量酸或碱或稀释,而使pH值不易发生变化的溶液就称为pH缓冲溶液。
pH标准缓冲溶液特点:
标准溶液的pH值是已知的,并达到规定的准确度。
标准溶液的pH值有良好的复现性和稳定性,具有较大的缓冲容量,较小的稀释值和较小的温度系数。
溶液的制备方法容易。
1.PH4.00325度邻苯二甲酸氢钾可配制250ML溶液
2.PH6.86425度混合磷酸盐可配制250ML溶液
3.PH9.18225度硼酸可配制250ML溶液
1)缓冲溶液作用原理和pH值
当往某些溶液中加入一定量的酸和碱时,有阻碍溶液pH变化的作用,称为缓冲作用,这样的溶液叫做缓冲溶液。
弱酸及其盐的混合溶液(如HAc与NaAc),弱碱及其盐的混合溶液(如NH3·
H2O与NH4Cl)等都是缓冲溶液。
由弱酸HA及其盐NaA所组成的缓冲溶液对酸的缓冲作用,是由于溶液中存在足够量的碱A-的缘故。
当向这种溶液中加入一定量的强酸时,H离子基本上被A-离子消耗:
所以溶液的pH值几乎不变;
当加入一定量强碱时,溶液中存在的弱酸HA消耗OH-离子而阻碍pH的变化。
2)缓冲溶液的缓冲能力
在缓冲溶液中加入少量强酸或强碱,其溶液pH值变化不大,但若加入酸,碱的量多时,缓冲溶液就失去了它的缓冲作用。
这说明它的缓冲能力是有一定限度的。
缓冲溶液的缓冲能力与组成缓冲溶液的组分浓度有关。
0.1mol·
L-1HAc和0.1mol·
L-1NaAc组成的缓冲溶液,比0.01mol·
L-1HAc和0.01mol·
L-1NaAc的缓冲溶液缓冲能力大。
关于这一点通过计算便可证实。
但缓冲溶液组分的浓度不能太大,否则,不能忽视离子间的作用。
组成缓冲溶液的两组分的比值不为1∶1时,缓冲作用减小,缓冲能力降低,当c(盐)/c(酸)为1∶1时△pH最小,缓冲能力大。
不论对于酸或碱都有较大的缓冲作用。
缓冲组分的比值离1∶1愈远,缓冲能力愈小,甚至不能起缓冲作用。
对于任何缓冲体系,存在有效缓冲范围,这个范围大致在pKaφ(或pKbφ)两侧各一个pH单位之内。
弱酸及其盐(弱酸及其共轭碱)体系pH=pKaφ±
1;
弱碱及其盐(弱碱及其共轭酸)体系pOH=pKbφ±
例如HAc的pKaφ为4.76,所以用HAc和NaAc适宜于配制pH为3.76~5.76的缓冲溶液,在这个范围内有较大的缓冲作用。
配制pH=4.76的缓冲溶液时缓冲能力最大,此时(c(HAc)/c(NaAc)=1。
3)缓冲溶液的配制和应用
为了配制一定pH的缓冲溶液,首先选定一个弱酸,它的pKaφ尽可能接近所需配制的缓冲溶液的pH值,然后计算酸与碱的浓度比,根据此浓度比便可配制所需缓冲溶液。
以上主要以弱酸及其盐组成的缓冲溶液为例说明它的作用原理、pH计算和配制方法。
对于弱碱及其盐组成的缓冲溶液可采用相同的方法。
缓冲溶液在物质分离和成分分析等方面应用广泛,如鉴定Mg2离子时,可用下面的反应:
白色磷酸铵镁沉淀溶于酸,故反应需在碱性溶液中进行,但碱性太强,可能生成白色Mg(OH)2沉淀,所以反应的pH值需控制在一定范围内,因此利用NH3·
H2O和NH4Cl组成的缓冲溶液,保持溶液的pH值条件下,进行上述反应。
(一)溶液配制注意事项
1.药品要有较好的质量
试剂分为优级纯(保证试剂,Guaranteed
reagent,G.R.)、分析试剂(Antalytical
reagent,A.R.)化学纯(Chemical
pure,C.P.)和实验试剂(Laboratory
reagent,L.R.)等等。
工业用的化学试剂,杂质较多,只在个别情况下应用,如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。
2.药品称量要精确。
3.配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水,比电阻值在50万欧姆以上,pH在5.5~7.0之间才可应用,在组织培养等特殊用途时应注意此项要求,配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。
4.配好后的溶液,应立即除菌处理(如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质),以防杂菌生长。
(二)0.067(1/15)Mol/L磷酸缓冲液
1.1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制:
称取磷酸二氢钾(KH2PO4,A.R.)9.08g,用蒸馏水溶解后,倾入1
000ml容量瓶内,再稀释至刻度(1
000ml)。
2.1/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制:
称取无水磷酸氢二钠(Na2HPO4,A.R.)9.47g(或者Na2HPO4·
2H2O
11.87g)用蒸馏水溶解后,放入1
000ml容量瓶内,再加蒸馏水稀释至刻度(1
3.按附表的比例,配制成不同pH值的缓冲溶液。
附表1
磷酸盐缓冲液配制法(单位:
毫升)
pH
1/15Mol/L
Na2HPO4
KH2PO4
5.8
8.0
92.0
7.1
66.6
23.4
5.9
9.9
90.1
7.2
72.0
28.0
6.0
12.2
87.8
7.3
76.8
23.2
6.1
15.3
84.7
80.8
19.2
6.2
18.6
81.4
7.5
84.1
15.9
6.3
22.4
77.6
7.6
87.0
13.0
6.4
26.7
73.3
7.7
89.4
10.6
6.5
31.8
68.2
7.8
91.5
8.5
6.6
37.5
62.5
7.9
93.2
6.8
6.7
43.5
56.5
8.8
94.7
5.3
49.6
50.4
8.1
95.8
4.2
6.9
55.4
44.6
8.2
97.0
3.0
7.0
61.1
38.9
8.4
98.0
2.0
(三)0.15Mol/L
PB液
附表2
0.15Mol/LPB液配制法
0.15Mol/L
Na2HPO4(ml)
NaH2PO4(ml)
26.5
73.5
49.0
51.0
61.0
39.0
7.4
81.0
19.0
Na2HPO4·
2H2O分子量=175.05
0.15Mol/L溶液含26.7g/L。
12H2O分子量=358.22
0.15Mol/L溶液含53.7g/L。
NaH2PO4·
H2O分子量=138.00
0.15Mol/L溶液含20.7g/L。
2H2O分子量=156.03
0.15Mol/L溶液含23.4g/L。
(四)0.2Mol/L
PB缓冲液
附表3
0.2mol/L
PB缓冲液配制法
0.2
Mol/L
0.2Mol/L
12.3
87.7
18.5
81.5
2
H2O溶液35.61g/L
12
H2O溶液含71.64g/L
0.2Mol/LNaH2PO4·
H2O溶液含27.60g/L
H2O溶液含31.21g/L
欲配0.1Mol/L
PB缓冲液则在0.2Mol/L
PB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。
欲配制PBS液时,则在溶液中加0.85%的NaCl溶液即可。
(五)无钙镁离子磷酸缓冲盐水(PBS)
(0.15Mol/L
PH
7.2)
NaCl
8.0g
KCl
0.2g
1.15g
(如为Na2HPO4·
12H2O,则为2.89g)
将上述试剂依次溶于1
000ml去离子水中,完全溶解后,115℃高压灭菌10min~15min,存在4℃冰箱中备用。
此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。
(六)硼酸盐缓冲液(Borate
saline
buffer)
文章来自:
医药园
()
整理:
zfg
1.硼酸(H3BO3)
0.2Mol/L硼酸:
硼酸12.37g加水至1
000ml。
2.硼砂(Na2B4O7)
0.05Mol/L硼砂:
硼砂19.07g加水至1
附表4
不同pH的0.2Mol/L硼酸缓冲液配制法
0.05Mol/L硼砂(ml)
0.2Mol/L硼酸(ml)
1.0
9.0
3.5
1.5
4.5
5.5
8.7
4.0
(七)巴比妥缓冲液
1.pH8.2离子强度0.05Mol/L巴比妥缓冲液
巴比妥钠
47.6g
蒸馏水
3
000ml
1.17N
HCl
55.0ml
(1.17
N
HCl=193ml浓HCl加1
807ml蒸馏水)
⑴
将4.76g巴比妥钠溶于3
000ml蒸馏水。
⑵
加1.17
55ml。
⑶
用HCl调节pH到8.2,并加蒸馏水至4
265ml。
2.pH8.4
0.06Mol/L巴比妥缓冲液
巴比妥
1.84g
10.30g
加蒸馏水至
1
000.00ml
3.pH8.6
1.66g
12.76g
加蒸馏水
(八)0.2Mol/L醋酸盐缓冲液
见表附表5
附表5
0.2Mol/L醋酸盐缓冲液配制法
0.2Mol/L
Tris(ml)
0.1Mol/L
HCl(ml)
23℃
37℃
9.10
8.95
8.06
7.90
27.5
8.92
8.76
7.96
7.82
30.0
8.75
8.60
10.5
7.87
7.73
32.5
8.62
8.48
12.5
7.77
7.63
35.0
8.50
8.37
15.5
7.66
7.52
8.40
8.27
17.5
7.54
7.40
40.0
8.32
8.18
20.0
7.36
7.22
42.5
(九)三羟甲基甲烷—盐酸缓冲液(Tris—HCl缓冲液)
不同pH,0.05Mol/L
25ml0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷加хml0.1NHCl,加水稀释至100ml(见下表)
附表6
Tris—HCl缓冲液配制法
0.1NHCl
(ml)
8.96
8.05
8.78
8.74
10.0
15.0
8.23
8.10
22.5
7.20
7.05
45.0
8.14
8.00
25.0
三羟甲基氨基甲烷(Tris)
分子量=121.14
0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷:
Tris24.23g,加水至1
0.1NHCl:
取HCl8.6ml,加水至1
(十)0.5Mol/L
pH9.5碳酸盐缓冲液
NaHCO3
3.70g
Na2CO3
0.60g
溶于600.00ml蒸馏水中即得。
不用时塞紧瓶塞,以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。
最好小量配制。
(十一)甘油磷酸缓冲液
1.配制pH8.0磷酸缓冲液
0.1Mol/L
94.50ml
0.1N
NaH2PO4
5.50ml
混合即可
2.9份甘油与1份pH8.0磷酸缓冲液混合,即为甘油磷酸缓冲液。
用途:
用于免疫荧光试验。
(十二)Hank’s液
1.贮存液
80.00g
4.00g
H2O
1.52g
葡萄糖
0.4%酚红液
50.00ml
双馏水加至
100.00ml
115℃高压灭菌15min,冰冻保存。
2.工作液
贮存液
1份
双馏水
9份
115℃高压灭菌15min。
临用时用灭菌的5.6%NaHCO3液调pH值至7.2左右(溶液呈橙红色)。
(十三)萘(钠)氏试剂(Nessler’s
reagent)
配方1:
氯化汞
6.0g
碘化钾
12.4g
20%NaOH
30ml
100ml
配方2:
碘化汞
11.5g
8g
50ml
(完全溶解后)过滤,加20%NaOH
50ml。
检测溶液中氨离子。
(十四)阿氏(Alsever’s)液
2.05g
柠檬酸钠
0.80g
氯化钠
0.42g
溶解后,以10%柠檬酸调节pH至6.1,过滤,分装,10磅10min灭菌,4℃保存。
(十五)青、链霉素混合液(简称S.P.液或双抗液)
青霉素(40万U)
5支
链霉素(200万μg)
1支
分别溶于100ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中,混合后分装小瓶,置-10℃~-20℃冰箱保存备用(1万单位μg/ml)。
临用时,按1%的量加入营养液或其他溶液中,最后浓度是青霉素100U/ml,链霉素100ug/ml。
(十六)洗液(清洁液)
重铬酸钾
150g
300ml
浓硫酸
将重铬酸钾加入蒸馏水中,使之自然溶解或水浴溶解,亦可在大坩埚中加热溶解,然后慢慢加入浓硫酸,边加边搅拌,见发热过剧则稍停,冷却后再继续加。
此为强洗液。
盛清洁液的容器要坚固,上加厚玻璃盖,操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套,以保安全。
洗液一旦变绿,表示铬酸已经还原,失去了氧化能力,不宜再用。
如将这样洗液加热,再加适量重铬酸钾,又可重新使用。
50%
5%
此为中等强度洗液。
配方3:
100g
加热溶解,冷却后缓慢加入
工业硫酸
此液为弱洗液,为棕红色。
使用此液时,必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净,经自来水冲洗,沥干然后才能浸入,否则该洗液很快失效
缓冲溶液(英文:
buffersolution)是一种能在加入少量酸或碱和水时大大减低p
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