度他雄胺含量检测方法验证方案精Word格式.docx
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组织协调和实施验证工作
组员
4验证依据
ICHQ2QC-SMP014
5验证内容
5.1验证可接受标准
项目
指标
方法专属性
稀释剂空白实验
不干扰供试品测试
潜在杂质加入实验
主峰与相邻杂质峰间分离度大于1.5
系统适用性
盐酸厄洛替尼主峰理论塔板数
大于3000
盐酸厄洛替尼主峰峰面积相对标准偏差
≤2%
回收率
回收率在99.0%~101.0%之间
验证范围内的线性测定
相关系数大于0.999
重复性
≤2.0%
中间精密度(相对标准偏差
准确度
回收率99.0%~101.0%
溶液稳定性
RSD≤2.0%
5.2.1色谱条件
仪器:
高效液相色谱仪
色谱柱:
ZORBAXSB-CN,4.6×
250mm,5μm
流动相:
正己烷:
异丙醇=95:
5
柱流速:
1.5ml/min检测波长:
240nm
进样量:
20μl柱温:
40℃
5.2.2实验用溶剂及供试品
名称
批号
含量/级别
来源
正己烷
异丙醇
杂质A
杂质C
度他雄胺
度他雄胺对照品
5.2.3溶液的配制
5.2.3.1流动相的配制
5.2.3.2供试品溶液的配制
供试品溶液的配制:
取供试品约25mg,精密称定,置50ml量瓶中,加5ml异丙醇超声使溶解,再加正己烷稀释至刻度,摇匀,即得。
(平行配制两份)
对照溶液配制:
取对照品约25mg,精密称定,置50ml量瓶中,加5ml异丙醇超声使溶解使溶解,再加正己烷稀释至刻度,摇匀,即得。
5.2.4测定方法
测定法:
分别精密量取对照品溶液和供试品溶液20μl,注入高效液相色谱仪,理论塔板数按度他雄胺峰计算应不低于3000,按外标法以峰面积计算供试品中度他雄胺的含量。
含量计算公式:
式中:
As——供试品溶液中主峰峰响应值;
Cs——供试品质量,mg;
Ar——对照品溶液中主峰峰响应值;
Cr——对照品质量,mg;
W——供试品的水分+残留溶剂,%;
Ps——对照品的含量,%。
验证过程不考虑水分和残留溶剂。
结果判断:
若含量(按无水物)在98.0%~102.0%之间,则判为符合规定。
5.3专属性
成品含量检测方法验证和有关物质检测方法验证色谱系统相同,专属性见度他雄胺有关物质检测验证。
5.4系统适应性
5.4.1目的
确认用该仪器系统运行含量测试方法的验证是否符合要求。
5.4.2操作步骤
精密称取度他雄胺对照品约25mg,置50ml量瓶中,加5ml异丙醇超声使溶解,再加正己烷稀释至刻度,摇匀,平行配制两份分别为对照品R1溶液和对照品R2溶液。
取对照品R1溶液连续进样6次,记录色谱图,计算主峰面积的RSD%,及主峰理论塔板数;
取对照品R2溶液连续进样2次,记录色谱图,与对照品R1溶液计算回收率。
5.4.3测试结果
表1系统适应性测试数据
进样次数
主峰保留时间
(分钟)
主峰峰面积
主峰理论塔板数
对照品R1溶液
1
2
3
4
6
平均
——
RSD%
对照品R2溶液
5.4.4结论
5.5线性(50%~150%)
5.5.1目的
确定在验证范围内,供试品浓度与峰面积之间的线性关系。
5.5.2操作步骤
5.5.2.1精密称取本品对照品250mg,置50ml量瓶中,加异丙醇超声使溶解并稀释至刻度,摇匀。
精密量取该溶液各2.5ml、3.75ml、5.0ml、6.25ml、7.5ml分别置50ml量瓶中,加稀释剂稀释至刻度,依次制成线性溶液(相对标准浓度50%、75%、100%、125%、150%)。
分别取上述溶液各20μl进样,每份溶液平行测定2次,记录色谱图,计算每个浓度点的峰面积平均值。
以样品浓度对相应平均峰面积做线性回归,计算回归方程及相应的线性回归系数。
回归方程:
Y=KX+b。
5.5.3测试结果
表2盐酸厄洛替尼线性测试数据
编号
相对浓度
50%
75%
100%
125%
150%
浓度(µ
g/ml)
峰面积
平均值
回归方程
相关系数r
5.5.4结论
5.6重复性
5.6.1目的
确定对于相同供试品多次称样测定结果的重现程度。
5.6.2操作步骤
对照品溶液A:
精密称取本品对照品约25mg置50ml量瓶中,加稀释剂溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
对照品溶液B:
80%样品溶液配制:
取本品约20mg,精密称定,置50ml量瓶中,加5ml异丙醇超声使溶解,再加正己烷稀释至刻度,摇匀,即得(平行配制3份)。
100%样品溶液配制:
取本品约25mg,精密称定,置50ml量瓶中,加5ml异丙醇超声使溶解,再加正己烷稀释至刻度,摇匀,即得(平行配制3份)。
120%样品溶液配制:
取本品约30mg,精密称定,置50ml量瓶中,加5ml异丙醇超声使溶解,再加正己烷稀释至刻度,摇匀,即得(平行配制3份)。
取对照品溶液A、对照品溶液B及各样品溶液进样,记录色谱图,计算含量及RSD。
5.6.3测试结果
表3重复性测试数据
对照品溶液1浓度(μg/ml)
峰面积平均值
峰面积RSD%
对照品溶液2浓度(μg/ml)
单位浓度峰面积
平均单位浓度峰面积
样品溶液
称样量(mg)
浓度(μg/ml)
含量(%)
RSD(%)
平均值(%)
80%
120%
5.6.4结论
5.7中间精密度
5.7.1目的
为考察随机变动因素对精密度的影响。
5.7.2操作步骤
不同时间不同检验人员分别按照标准称量的80%、100%和120%配制供试品测试溶液及100%对照溶液(2份)。
每个浓度的供试品溶液各配制3份,计算每份供试品溶液中含量值及RSD%。
5.7.3测试结果
表4中间精密度测试数据
表5两人数据汇总
操作者
5.7.4结论
5.8方法准确度
5.8.1目的
5.8.2操作步骤
对照溶液:
配制100%对照溶液2份,进样。
加标前样品溶液的配制:
精密称取度他雄胺样品25mg,置50ml量瓶中,加5ml异丙醇超声使溶解,再加正己烷稀释至刻度,摇匀;
再取此溶液2.0ml,置20ml量瓶中,平行移取10份。
加标溶液的配制:
精密称定度他雄胺对照品250mg,置50ml量瓶中,加异丙醇超声使溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
供试液的配制:
分别移取加标溶液1.6ml、2.0ml、2.4ml各3份加入加标前样品溶液中,用稀释剂稀释至刻度,另外剩余一份直接用稀释剂稀释至刻度。
测定方法:
将上述对照品溶液和供试液注入液相色谱仪,记录色谱图,计算样品的加标回收率,
实际检出量=
5.8.3测试结果
表6方法准确度测定结果
单位峰响应值
第二份标准品:
μg/ml
回收率%
---
平均单位峰响应值
p
加标前峰面积
加入标准
理论量(μg/ml)
加标后峰面积
加入标准峰面积
实际回收量(μg/ml)
所有值RSD%
5.8.4结论
5.9溶液稳定性
5.9.1目的
确认溶液的稳定性情况。
5.9.2操作步骤
取本品约25mg,精密称定,置50ml量瓶中,加5ml异丙醇超声使溶解,再加正己烷稀释至刻度,摇匀。
分别在不同时间点进样20µ
l,记录色谱图。
5.9.3测试结果
表7溶液稳定性测试数据
时间(h)
RSD(%)
5.9.4结论
5.10偏差讨论
验证小组成员应对验证出现的偏差进行偏差讨论:
参与讨论者:
讨论日期:
5.11综合分析评价与结论
验证小组成员对检测过程及记录进行综合分析后作出评价与结论:
结论人:
结论日期:
6最终批准
6.1负责人审阅上述所有测试及分析评价,最后批准。
6.2检验方法经验证合格后才能用于实际检测。
7再验证
当分析仪器、色谱柱型号和品牌、工艺等发生变更时应进行再验证。
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- 含量 检测 方法 验证 方案