猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗NVDCJXA1株工艺规程Word格式文档下载.docx
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4.5.批准文号
农医药便函[2007]139号
4.6.工艺流程图
猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(NVDC—JXA1株)工艺流程图
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4.7.质量控制点
工序名称
控制项目
控制标准
细胞消化
消化液
0.25%胰蛋白酶EDTA溶液;
50-100mL/转瓶
消化温度
37℃
消化时间
转动转瓶,待细胞层开始出现裂缝时终止,一般为45秒
转瓶培养
温度
37℃恒温室的控制
时间
细胞生长成单层即可结束培养,一般为24小时左右
转速
转瓶机设置为9~11转/小时
接毒
接种量
无菌控制下接种,3%
无菌检测
取样,T.G、G.P、G.A培养基培养应无菌
观察
细胞病变情况
出现混浊,可能污染,弃去。
病变≥70%时收获
收获
无菌
无菌控制下操作,不污染
灭活
灭活剂
0.2%的甲醛
灭活温度
调整灭活罐的温度为37℃
灭活时间
灭活充分,维持24小时
乳化
水相、油相比例
保证抗原含量并不分层,水相:
油相为2:
3
乳化时间
90分钟
乳化温度
保持抗原免疫效力,30±
2℃
4.8.活性物质制备工艺过程
4.8.1Marc-145传代细胞种的要求:
1.应无菌、无霉菌、无支原体、无外源病毒污染。
2.制苗的细胞代次:
第88—140代之间。
3.MARC-145细胞种应生长迅速,培养48小时应在1/2以上的瓶面出现细胞岛,并有部分相连、生长缓慢、形态不良的细胞培养物不可作种用,镜检时传代细胞的正常形态是梭状上皮细胞,明朗、轮廓清晰、胞浆内可见小颗粒,如出现肥大的圆细胞和空泡,是衰退的表现,不可留作种用。
4.8.2生产用毒种要求
4.8.2.1毒种应无
Ø
细菌
霉菌
支原体
其它外源病毒
4.8.2.2毒种保存与毒种继代
1)在-15℃以下保存,应不超过1年。
2)继代应不超过5代。
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4.8.3细胞的传代
工艺过程
选生长3-4天已形成致密单层的细胞种按常规法进行细胞分散,35~37℃培养,3-4天传代一次。
传代细胞传代时的分种率一般1:
4即1瓶分4瓶,也可1:
5。
可根据生产和试验的需要和细胞生长的情况增殖和扩大细胞。
每次传代应在细胞瓶上(中方瓶、扁瓶、圆瓶)注明细胞代次、日期。
◆生长不良、形态不好的细胞不能用。
工作条件
工作环境
洁净级别:
100级
温度:
18~26℃
相对湿度:
45~65%
压差:
大于5Pa
工作器械
121℃高温灭菌
◆高温蒸汽灭菌工艺应进行验证
4.8.4接种
选择符合要求的圆瓶细胞培养物,弃去生长液,用Hanks液洗单层3次,然后接种5-10%PRRS毒种,置35~37℃温室的转瓶机上旋转1.5小时后,加入维持液,使维持液中毒种含量为5%,维持液含犊牛血清1~2%,于35~37℃温室旋转培养。
4.8.5观察和收获
接种后每天逐瓶观察细胞病变,并做好记录,大部分圆瓶应在接种后6天内收获,应该有50%以上的细胞出现明显病变,病变细胞应为胞浆收缩,细胞萎缩变形,部分细胞脱落,收获的细胞培养物置–20℃以下冰箱冻结保存,细胞培养物需冻融1~2次,检验无菌后,将数瓶圆瓶的病毒液混合后,无菌吸取病毒液小样,进行中间检验。
4.8.6.灭活工艺过程
工艺过程
取病毒上清液导入灭活罐中,加入0.2%的甲醛
;
灭活24小时,灭活温度37℃。
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1000级
4.8.7半成品检验
应无菌生长。
取适宜稀释度,接种96孔长好单层的ST细胞微量板,每稀释度接8孔,每孔接毒0.1ml,续加维持液,培养观察细胞病变,计算TCID50。
取灭活毒液,接种长成单层的ST细胞,换成维持液,逐日观察细胞形态,连续6天,不引起细胞病变。
4.8.8岗位定员和生产周期
岗位
人员
生产周期
制细胞
每批共7天
配液
2
接种
收获
4.8.9原材料:
ST细胞,其质量标准应符合《中华人民共和国兽用生物制品质量标准》2001年版的要求。
4.9.活性物质生产技术经济指标和原料利用率计算
原料
营养液
收获得益率
数量
Marc-145细胞
10*1000
95%
价值/元
500
10*1000*0.2
1000*10*0.95
每ml活性物质
(500+2000)/1000*10*0.95=0.2631元
4.10.油乳剂灭活疫苗制造工艺过程
4.10.1配方
灭活液93.5份
水相
2份
吐温-856.5份
白油90.6份
油相
3份
司本-858份
硬脂酸铝1.4份
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4.10.1.1油相制备
取注射用白油90.6ml,加硬脂酸铝1.4g。
边加边搅拌,直到完全透明,再加入8ml司本-80。
充分混匀,高压灭菌备用。
4.10.1.2水相制备
取6.5份吐温-80装入的容器中,高压灭菌冷却后加入水相罐内与93.5份抗原充分搅拌直到吐温-85完全溶解。
4.10.1.3乳化
取油相3份放于乳化罐内,开动电机慢速转动搅拌,同时徐徐加入水相2份,加完后再以60r/min搅拌25-30分钟。
在控制面板上开乳化罐自乳化化开关;
乳化至60分钟时;
加入1%硫柳汞溶液,使其最终浓度为0.01%。
再乳化30分钟后,取3~5ml以3000r/min离心15分钟,若有分层现象,应重复乳化1次。
4.10.3分装
4.10.3.1内包装容器
名称:
西林瓶或药用高密度聚乙烯瓶、丁基橡胶塞
药用高密度聚乙烯瓶由符合GMP要求的厂家直接提供。
丁基橡胶塞灭菌:
121℃,蒸汽灭菌20分钟。
西林瓶清洗:
用超声波清洗机清洗2-3次;
121℃,干热灭菌60分钟。
4.10.3.2分装生产:
生产好的疫苗产品,移至分装生产线上,进行分装,有4ml/瓶和20ml/瓶两种规格。
4.10.3.3工作环境
4.10.4压盖贴签装箱
压盖:
分装完毕的产品,立即进入压盖生产线,加上铝盖,进行压盖。
贴签:
贴签机调整设置好相应的产品批号及有效期限,进入贴签程序。
装盒:
每20瓶一盒,盒内放置说明书、合格证各一份,小盒用不干胶封口。
入库。
注:
批号设置、贴签印刷应符合《兽药瓶签、说明书的管理规定》
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4.10.5.岗位定员和生产周期
分装
4
1/2天
压盖
贴签装箱
2天
4.11.油乳剂剂制造技术经济指标
序号
项目及计算
指标
1
分装率(%)=实际分装瓶数/理论分装瓶数*100%
100%
(±
5%)
合格率(%)=合格瓶数/实际分装瓶数*100%
≥99%
4.12.设备一览表
编号
工序
设备名称
型号
规格
制造单位
活性成分制备
恒温培养箱
HW-2500
0-100℃
上海一恒科学仪器有限公司
恒温摇床
YC-120
0-65℃
转瓶机
SHXJ-VI
1400*650*14000
南京
-70℃冰箱
HAIER
450L
青岛海尔集团
5
2-8℃冷库
装配
40m2
上海开灵制冷有限公司
6
-20℃冰库
20m2
7
脉动真空灭菌柜
YXQ-MG-225
2200*2000*2200
华菱医疗设备制造有限公司
8
YXQ-MG-208
2415*1200*1800
11
干热灭菌柜
101A
1600*1800*2550
12
灭活
灭活罐
YJ-2005
2000L
上海永巨制药设备有限公司
13
电子天平
YH-1000
0.0001
上海一恒科技有限公司
14
乳化
乳化泵
RH-2000
上海华东制药机械有限公司
15
分装机
HD-2005
0-20ml
16
0-100ml
17
自动胶塞清洗机
CDDA-10
2370*1320*1880
上海欣丽实业有限公司
18
臭氧灭菌柜
KER-1000
1600*1800*550
康尔医药设备制造有限公司
19
包装
轧盖机
XF-2005
1375*755*1600
20
贴签机
TLJ
1650*845*1200
21
检验
恒温箱
HIHENG
650*445*550
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4.13.生物安全及劳动保护
4.13.1技术安全
1.上岗工人必须经过“生物安全及自我防护”培训。
2.生产过程中,各岗位必须严格按照工艺规程、岗位标准操作程序及设备标准操作程序操作,不得违反。
3.生产时必须在符合兽药GMP要求环境条件下进行。
4.每次生产更换批号(或品种和规格),各工序须清洗工具容器和场地,达到清场要求。
5.各工序半成品容器加盖密封存放,放至半成品贮存间规定的地方,防止异物混入,并有明显标志(有卡片),按品名、规格、批号存放或设棚栏隔开。
6.机器设备有专人管理、维护、保养。
严格执行安全用电规定,经常检查电源、线路,防止漏电短路,电源要接地线,禁止湿手开掣;
机电设备严禁带病运转,机器运行时,严禁用手伸入转动部位;
禁止用水洗电机转轴及皮带轮防护安全罩,操作时不能站在与皮带轮同一线上。
7.随时检查燃气系统,应保持完好无损,以免发生事故,设备、设施应定期检查完好情况。
8.管道标志明显:
水管涂绿色,药液管涂黄色,蒸气管涂红色,严防漏气漏液。
高压容器、管道系统等应经劳动技术安全部门检测合格方能使用。
9.各工序均应配备防火设施和其他意外应急设施,每个员工都要学会使用灭火器材。
10.各岗位操作人员须经严格岗位培训并经考核合格,凭岗位合格证才能上岗独立操作。
非本岗位人员不能顶替上班。
当班人员不能随意离开岗位,严禁窜岗,必需离开时要有本岗位人员接替方能离开。
交接班应交接清楚,认真填写交接班记录。
11.各岗位上岗须按规定穿戴工作服、帽、鞋、手套。
特别是接触强酸、强碱,要穿戴防护衣、胶手套、水鞋及防护镜,避免酸、碱液溅到身上。
万一被溅上皮肤,立即用大量水冲洗。
4.13.2劳动保护
1.上班人员均要按规定穿戴工作服、帽、鞋、防护手套等劳保用品。
2.使用显微镜的人员严格执行中休、班休制度,每年检查视力一次。
◆员工每年进行健康检查一次。
建立健康档案。
4.14.物料
4.14.1注射用水的质量标准及检验
1)性状:
本品为纯化水经蒸馏所得的无色的澄明液体;
无臭,无味。
2)检查
a
pH值
应为5.0~7.0(附录ⅥH)。
b
氨
取本品50ml,照纯化水的方法检查,
对照用氯化铵溶液改为1.0ml,应符合规定(0.00002%)。
c
细菌内毒素
取本品,依法检查(附录ⅪE),每1ml中含内毒素量应小于0.25EU。
d
氯化物、硫酸盐与钙盐、硝酸盐与亚硝酸盐、二氧二碳、易氧化物、不挥发物与重金属
照纯化水的方法检查,应符合规定。
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4.14.2牛血清
牛血清
质量标准:
中国生物制品主要原辅料质控标准,2000年版。
供应商:
南京苏邦生物技术有限公司(或经公司批准的其他符合规定的厂家)
4.14.3营养液
DMEM
中国兽药典,2005版
清大天一生物科技有限公司(或经公司批准的其他符合规定的厂家)
4.14.4磷酸钠
磷酸钠
HG31292-80
上海国药集团化学试剂有限公司(或经公司批准的其他符合规定的厂家)
4.14.5磷酸氢二钾
磷酸氢二钾
GB274-93
4.14.6磷酸氢二钠
磷酸氢二钠
GB1909—1987
4.14.7磷酸氢二钠
重铬酸钾
GB/T642-1999
4.14.8硫酸
硫酸
GB625-89
4.14.9无水氯化钙
无水氯化钙
HGB3208-60
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4.14.10苯酚红
苯酚红
GB/T15351-94
4.14.11吐温-85
吐温80
中国药典,2000年版。
美国CRODA公司(或经公司批准的其他符合规定的厂家)
4.14.12司本-85
4.14.13硫柳贡
硫柳汞钠
Q/CYDZ-220-2004。
4.14.14白油
注射用白油(轻质矿物油)
中华人民共和国兽医生物制品规程,2000版。
美国埃克森美孚石油公司(或经公司批准的其他符合规定的厂家)
4.14.15甲醛
甲醛
中国药典,2000版。
4.15.成品质量标准
4.15.1物理性状
本品为乳白色乳状液,为水包油包水型,静置后,下层略带淡红色。
用1ml吸管(出口内径1.2mm),吸取25℃左右的疫苗1ml,令其垂直自然流下,记录流出0.4ml所需的时间。
在2秒以内为合格。
37℃放置21日,不破乳。
4.15.2无菌检验
4.15.3安全检验
用猪瘟中和抗体、猪细小病毒HI抗体阴性猪2头,各深部肌肉注射疫苗10ml。
观察21日,应无不良临床反应。
用2-4日龄同窝乳鼠至少5只,各皮下注射0.1ml,观察7日,应健活。
如有死亡,可重检一次。
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4.15.4效力检验
用体重350g以上的HI抗体阴性豚鼠4只,各肌肉注射疫苗0.5ml。
28日后,连同条件相同的对照豚鼠2只,采血,测定抗体。
对照抗体阴性,注射豚鼠应有3只出现抗体反应,其HI加应≥64。
4.16.贮藏和有效期
2-8℃保存,7个月
4.17.包装材料要求
4.17.1标签
猪细小病毒病灭活疫苗标签
80克铜板纸,内容符合《兽药瓶签、说明书的管理规定》
尺寸:
20mm×
60mm,25mm×
65mm
上海郑盛印务有限公司(或经公司批准的其他符合规定的厂家)
4.17.2玻璃瓶
冷冻瓶
符合《中华人民共和国药品管理法》和《药品包装用材料和容器管理办法》
7ml
东营力诺玻璃制品有限公司(或经公司批准的其他符合规定的厂家)
4.17.3塑料瓶
外用液体药用高密度聚乙烯瓶
20mm
杭州美坚华医药包装材料有限公司(或经公司批准的其他符合规定的厂家)
4.17.4铝塑盖
铝塑盖
d:
2cm,h:
1cm
洛阳豫洛瓶盖有限公司(或经公司批准的其他符合规定的厂家)
4.17.5胶塞
药用丁基橡胶塞(抗生素瓶、冷冻瓶)
Φ20mm
湖北应城市恒天药业包装有限公司(或经公司批准的其他符合规定的厂家)
4.17.6外包装箱
冷藏箱
405mm×
175mm,600mm×
340mm;
370mm×
285mm,140mm×
320mm
上海御风包装材料有限公司(或经公司批准的其他符合规定的厂家)
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4.17.7保温箱
泡沫保温箱
365×
280×
295,600×
345×
385
上海正泰泡塑厂、上海琅轩企业发展有限公司(或经公司批准的其他符合规定的厂家)
4.17.8内包装盒
小彩盒
90mm×
100mm×
53mm
上海金伴印刷有限公司(或经公司批准的其他符合规定的厂家)
4.17.9说明书
猪细小病毒病灭活疫苗说明书
105克铜板纸,内容符合《兽药瓶签、说明书的管理规定》
145mm×
103mm
4.18.标签、说明书
见样张。
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文件接收名单
接收部门人员名单
接收日期
接收份数
接收人
(签名)
总经理:
文鸣旭
生产总监:
孙国宝
生产部经理:
钮雪根
灭活苗车间主任:
李斌
质管部经理:
陶洪明
种子室主任:
张玉云
QA主任:
史素云
技术研发部经理:
赵有淑
1
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