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3)EscherichiacoliNCTC12923(ATCC8739)(大肠埃希菌;
E.coli)
4)CandidaalbicansNCPF3179(ATCC10231)(白色念珠菌;
C.alb)
5)PseudomonasaeruginosaNCTC12924(ATCC9027)(铜绿假单胞菌;
P.aer)
6)SalmonellaabonyACM5080(NCTC6017)(沙门氏菌;
S.abo)
(2)性能确认
1)胰蛋白胨大豆琼脂培养基[Trypticsoyagar(TSA)]
①配制
标准菌种中取E.coli,B.sub,S.aur和C.alb菌种Ampoule,开封后,各倒入平皿中。
每株试验菌平行制备2个平皿。
加灭菌的生理盐水100㎕,水化(Re-hydrate)检测菌种,30秒后,把事先灭菌的冷却后的温度约为45℃的TSA,分别倒入每个平皿约15~20ml,混匀,凝固,盖上盖儿,倒置平皿,细菌在30~35℃培养5日,C.alb在20~25℃度培养5日。
为确认检测条件,用灭菌生理盐水,在30~35℃,培养5天,做空白阴性对照实验。
培养后,琼脂平板,接种菌的出现菌落数应为标准化菌液的检测值的1/2~2倍。
标准菌种
EscherichiacoliNCTC12923(ATCC8739)
BacillussubtilisNCTC10400(ATCC6633)
StaphylococcusaureusNCTC10788(ATCC6538)
CandidaalbicansNCPF3179(ATCC10231)
菌落照片
培养前
培养后
2)沙氏葡萄糖琼脂培养基[Sabourauddextroseagar(SDA)]
①配制
标准菌种中C.alb菌种Ampoule,开封后,倒入平皿中。
每株试验菌平行制备2个平皿。
加灭菌的生理盐水100㎕,水化(Re-hydrate)检测菌种,30秒后,把事先灭菌的冷却后的温度约为45℃的SDA,分别倒入每个平皿约15~20ml,混匀,凝固,盖上盖儿,倒置平皿,在20~25℃度培养5日。
为确认检测条件,用灭菌生理盐水,在20~25℃,培养5天,做空白阴性对照实验。
3)乳糖肉汤培养基[Lactosebroth(LB)]
标准菌株E.coli,加入10ml乳糖肉汤培养基中,于培养30~35℃培养箱中培养18~24h。
用接种环蘸取培养液涂布于EMBA平板上,在30~35℃培养18~24h。
为确认检测条件,用乳糖肉汤培养基做空白实验。
培养后,培养皿出现标准菌种的特征,视为阳性。
选择培养基
伊红美蓝琼脂培养基(EMBA)
菌落特征
金属光泽菌落或透过光下出现黑青色的菌落
4)麦康凯琼脂培养基[MacConkeyagar(MCA)]
培养液涂抹于MCA平板上,在30~35℃培养18~24h,观察结果。
培养后麦康凯琼脂培养基出现标准菌种的特征,判定为阳性。
麦康凯琼脂培养基(MCA)
周围有红色的沉降线带的红色的菌落
5)伊红美蓝琼脂培养基[Eosinmethyleneblueagar(EMBA)]
标准菌株E.coli,加在10ml乳糖肉汤培养基中,于30~35℃培养18~24h。
培养液涂抹于EMBA平板上,在30~35℃培养18~24h,观察结果。
培养后伊红美蓝琼脂培养基出现标准菌种的特征,判定为阳性。
6)麦康凯肉汤琼脂培养基[MacConkeybroth(MCB)]
标准菌株E.coli放入10mlTSB中,于30~35℃培养18~24h。
吸取0.1ml培养液加入10mlMCB培养基中,在42~44℃培养24~48h。
把再菌培养液涂抹在麦康凯琼脂培养基平板,在30~35℃培养18~72小时。
为确认检测条件,用胰酶大豆蛋白肉汤及麦康凯肉汤琼脂培养基做空白实验。
培养后在平板出现标准菌种的特征,判定为阳性。
周围有红色的沉降线带的红褐色集落
7)2倍浓度的乳糖肉汤培养基[2XLB]
标准菌株E.coli接种在2倍浓度的乳糖部利用发酵管中,于35~37℃培养24~48h。
培养后2倍浓度的乳糖部利用发酵管发生气体,判定为阳性。
8)煌绿乳糖胆盐肉汤液体培养基[Brilliantgreenlactosebilebroth(BGLB)]
标准菌株E.coli接种在2倍的乳糖肉汤培养基,于35~37℃培养24~48h。
吸取培养液在煌绿乳糖胆盐肉汤液体培养基接种后,于35~37℃培养24~48h。
为确认检测条件,用2倍的乳糖肉汤培养基,做空白实验。
培养后在煌绿乳糖胆盐肉汤液体培养基发酵管发生气体,判定为阳性。
9)亚硒酸盐-胱氨酸肉汤[Selenitecystinebroth(SCB)]
标准菌株S.cho接种在10ml的乳糖肉汤培养基,于30~35℃培养18~24h。
菌培养液0.1ml喷注于亚硒酸盐-胱氨酸肉汤,30~35℃培养12~24h。
再把菌培养液涂抹于木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基及亚硫酸铋琼脂平板,于30~35℃培养24~48h。
为确认检测条件,用乳糖肉汤培养基及亚硒酸盐-胱氨酸肉汤,做空白实验。
培养后出现相关特征,判定为阳性。
SalmonellaabonyACM5080(NCTC6017)
木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基(XLDA)
亚硫酸铋琼脂(BSA)
红色,中心部显黑色或者不显
黑色或者绿色菌落
10)连四硫酸盐肉汤[Tetrathionatebroth(TB)]
菌培养液0.1ml喷注于亚连四硫酸盐肉汤,30~35℃培养12~24h。
菌培养液再涂抹于木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基及亚硫酸铋琼脂平板,30~35℃培养24~48h。
为确认检测条件,用乳糖肉汤培养基及连四硫酸盐肉汤,做空白实验。
培养后出现相关特征,判定为阳性(菌落照片跟SCB相同)。
11)木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基[Xyloselysinedeaoxycholateagar(XLDA)]
菌培养液涂抹于木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基平板,30~35℃培养24~48h。
为确认检测条件,用乳糖肉汤培养基,做空白实验。
培养基
红色、中心部可能显示黑色点,或不显示
12)亚硫酸铋琼脂[Bithmuthsulfiteagar(BSA)]
菌培养液涂抹于亚硫酸铋琼脂平板,30~35℃培养24~48h。
标准菌种
13)三糖铁琼脂[Triplesugarironagar(TSIA)]
菌培养液用铂金线涂抹于三糖铁琼脂斜面平板的深部和斜面,于35~37℃培养18~24h。
三糖铁琼脂(TSIA)
深部显黄色,斜面部维持红色
14)RVS沙門氏菌增殖培養基[RappaportVassiliadisSalmonellaenrichmentbroth(RVSB)]
标准菌株S.cho接种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤,于30~35℃培养18~24h。
0.1ml菌培养液喷注于RVSB,于30~35℃培养12~24h。
菌培养液涂抹于XLDA平板后,于30~35℃培养18~48h。
为确认检测条件,用胰蛋白胨大豆肉汤及RV沙門氏菌增殖培養基,做空白实验。
红色,中心部显示黑点或不显示
15)胰蛋白胨大豆肉汤[Trypticsoybroth(TSB)]
标准菌株S.aur及P.aer,各接种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤,于30~35℃培养18~24h。
S.aur培养液涂抹于甘露醇食盐琼脂;
P.aer培养液涂抹于溴棕三甲铵琼脂,于30~35℃培养24~48h。
为确认检测条件,用胰蛋白胨大豆肉汤,做空白实验。
StaphylococcusaureusNCTC10788
(ATCC6538)
PseudomonasaeruginosaNCTC12924
(ATCC9027)
甘露醇食盐琼脂(MSA)
溴棕三甲铵琼脂(CTA)
黄色带包围的黄色菌落
绿色荧光物质的菌落
16)溴棕三甲铵琼脂[Cetrimideagar(CTA)]
标准菌株P.aer接种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤,于30~35℃培养18~24h。
培养液涂抹于溴棕三甲铵琼脂,于30~35℃培养24~48h。
PseudomonasaeruginosaNCTC12924(ATCC9027)
17)荧光素琼脂(FRA)[Fluoresceinagar(FRA)]
培养液涂抹于荧光素琼脂(FRA),于30~35℃培养24~72h。
荧光素琼脂(FRA)
黄色荧光物质菌落
18)假单胞琼脂(PYA)[Pyocyaninagar(PYA)]
培养液涂抹于假单胞琼脂(PYA),于30~35℃培养24~72h。
假单胞琼脂(PYA)
蓝色荧光物质菌落
19)甘露醇食盐琼脂[Manitolsaltagar(MSA)]
标准菌株S.aur接种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤,于30~35℃培养18~24h。
培养液涂抹于甘露醇食盐琼脂,于30~35℃培养24~72h。
StaphylococcusaureusNCTC10788(ATCC6538)
20)Baird-Parker琼脂[Baird-Parkeragar(BPA)]
标准菌株S.aur接种在10ml的胰蛋白胨大豆肉汤,于30~35℃培养18~24h。
培养液涂抹于Baird-Parker琼脂,于30~35℃培养24~72h。
Baird-Parker琼脂(BPA)
透明带包围的有光泽的黑色菌落
21)营养琼脂[Nutrientagar(NA)]
标准菌株B.sub、C.alb、E.coli、S.cho、S.aur、P.aer,每种菌株,放入两个平皿。
用100㎕灭菌生理食盐水水化(Re-hydrate)。
营养琼脂配好后,事先灭菌30秒后,冷却至45℃,倒入上述平皿中,每平皿大约倒入15~20ml。
摇匀后冷却待凝固,倒放,于30~35℃培养22~26h。
为确认检测条件,用灭菌生理食盐水,做空白实验。
培养后平板显示的菌落数应是接种菌数的1/2至2倍。
22)营养肉汁[Nutrientbroth(NB)]
标准菌株B.sub、C.alb、E.coli、S.cho、S.aur、P.aer接种在10ml的营养肉汁,于30~35℃培养18~24h。
培养液涂抹于下表的平板,于30~35℃培养18~24h。
为确认检测条件,用营养肉汁,做空白实验。
标准菌株
Bacillussubtilis
NCTC10400
(ATCC6633)
胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA)
微白色的稍微透明的菌落
Candidaalbicans
NCPF3179
(ATCC10231)
添加抗生物质的沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA)
微白色的菌落
Escherichiacoli
NCTC12923
(ATCC8739)
伊红美蓝琼脂培养基(EMBA)
金属光泽菌落或在透明逛下显黑青色的菌落
Salmonellaabony
ACM5080
(NCTC6017)
红色,中心部呈现黑点或不呈现
黑色或绿色菌落
Staphylococcus
aureus
NCTC10788
黄色带包围者的黄色菌落
Pseudomonas
Aeruginosa
NCTC12924
(ATCC9027
培养基中英文对照
Trypticsoyagar(TSA)
胰蛋白胨大豆琼脂培养基
Sabourauddextroseagar(SDA)
沙氏葡萄糖琼脂培养基
Lactosebroth(LB)
乳糖肉汤培养基
Eosinmethyleneblueagar(EMBA)
伊红美蓝琼脂培养基
MacConkeyagar(MCA)
麦康凯琼脂培养基
MacConkeybroth(MCB)
麦康凯肉汤琼脂培养基
TrypticSoyBroth(TSB)
胰蛋白胨大豆肉汤
Brilliantgreenlactosebilebroth(BGLB)
煌绿乳糖胆盐肉汤
Selenitecystinebroth(SCB)
亚硒酸盐-胱氨酸肉汤
Xyloselysinedeaoxycholateagar(XLDA)
木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基
Bithmuthsulfiteagar(BSA)
亚硫酸铋琼脂
Tetrathionatebroth(TB)
连四硫酸盐肉汤
Triplesugarironagar(TSIA)
三糖铁琼脂
RappaportVassiliadisSalmonellaenrichmentbroth(RVSB)
RV沙門氏菌增殖培養基(RVS)
Manitolsaltagar(MSA)
甘露醇食盐琼脂
Cetrimideagar(CTA)
溴棕三甲铵琼脂
Fluoresceinagar(FRA)
荧光素琼脂(FRA)
Pyocyaninagar(PYA)
假单胞琼脂(PYA)
Baird-Parkeragar(BPA)
Baird-Parker琼脂
Nutrientagar(NA)
营养琼脂
Nutrientbroth(NB)
营养肉汁
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