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但是这些方法周期长,工作量大,方法繁琐,并且需要昂贵的仪器、试剂和具有丰富操作经验的人员,不能满足即时、现场的病原检测的要求。
本项目的科学技术要点是采用LAMP技术,通过设计特异性的引物,研制6种水生动物病毒的快速、敏感、特异、可靠的检测试剂盒,争取在国际上较早报道该方法在水生动物疫病检测上的具体应用。
三、检索课题的研究要点与检索要求
检索要点:
6种水生动物疫病的LAMP检测方法
1.鲤春血症病毒(SVCV)的LAMP检测方法
2.病毒性出血性败血症病毒(VHSV)的LAMP检测方法
3.传染性胰脏坏死(IPNV)的LAMP检测方法
4.真鲷虹彩病毒(RSIV)的LAMP检测方法
5.淋巴囊肿病毒(LCDV)的LAMP检测方法
6.海洋双RNA病毒(MABV)的LAMP检测方法
检索要求:
国内外文献检索
四、文献检索范围及检索策略
1.中文科技期刊全文数据库(维普)(1989-2010)
2.中国期刊全文数据库(CNKI)(1994-2010)
3.中国优秀博硕士学位论文全文数据库(CNKI)(1999-2010)
4.中国科技文献数据库(万方)(1990-2010)
5.中国科技成果数据库(万方)(1990-2010)
6.中国学位论文文摘数据库(万方)(1990-2010)
7.中国学术会议论文文摘数据库(万方)(1990-2010)
8.中国科技论文在线(http:
/)
9.国家知识产权局()
10.国家科技成果网()
11.美国农业文献数据库(AGRICOLA)(1990-2010)
12.美国工程索引(EI)(1990-2010)
13.美国生物学文摘(BIOSISPreviews)(1994-2010)
14.美国政府报告(NTIS)(1990-2010)
15.《美国化学文摘》网络版(SciFinderScholar)(1907-2010)
16.美国医学索引(MEDLINE)(1990-2010)
17.会议文献索引(ConferencePapersIndex)(1990-2010)
18.Elsevieronline数据库(1998-2010)
19.欧洲专利局(
20.美国专利局(http:
//www.uspto.gov/)
21.日本专利局(http:
//www.jpo.go.jp/)
22.网络资源
Google()Baidu()
维基百科全书中国大百科全书
读秀学术搜索
中国网国研网中经网
23.财经数据库
色诺芬(CCER)中国经济金融数据库
国泰安经济金融实证研究数据库
INFOBANK高校财经数据库
检索词及检索策略:
(环介导等温扩增技术+LAMP)*(鲤春血症病毒+SVCV+病毒性出血性败血症病毒+VHSV+传染性胰脏坏死病毒+IPNV+真鲷虹彩病毒+RSIV+淋巴囊肿病毒+LCDV+海洋双RNA病毒+MABV)
(Loop*mediatedisothermalamplification+LAMP)and(springviraemia*carpvirus+SVCV+Viralhemorrhagicsepticemiavirus+VHSV+infectiouspancreaticnecrosisvirus+IPNV+Redseabreamiridovirus+RSIV+Lymphocystisdiseasevirus+LCDV+Marinebirnavirus+MABV)
五、检索结果
根据检索要点和检索词,制定了上述中外文检索策略,查找了上述中外文数据库,筛选出相关文献16篇,主要摘录如下:
1.【篇名】LAMP技术及其在水生动物疫病诊断中的应用
【作者】岳志芹,梁成珠,吕朋等.
【作者单位】山东出入境检验检疫局,山东青岛,266002;
【出处】检验检疫科学,2006,16(5)
【ISSN】1671-9034
【页码】70-74
【摘要】环媒恒温扩增技术(Loop-MediatedIsothermalAmplification,LAMP)是一种新颖的核酸扩增方法,其基本原理是采用4条特异引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶,在65℃左右对核酸进行扩增,短时间扩增效率可达到109~1010个拷贝.LAMP具有高特异性、高效性、快速、简便、易检测等特点,目前已应用于人类及动植物细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的检测,预计在动植物疫病检疫,尤其是水生动物疫病诊断领域有广阔的应用前景.
2.【篇名】牙鲆弹状病毒环介导等温扩增检测方法的建立与应用
【作者】孙颖杰,岳志芹,刘荭,赵玉然,史秀杰,梁成珠,吴斌,李叶,王哲.
【作者单位】吉林大学畜牧兽医学院,长春,130062;
辽宁出入境检验检疫局,大连,116001;
山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心,青岛,266002;
深圳出入境检验检疫局,深圳,518001;
【出处】华中农业大学学报,2010,29
(2)
【ISSN】1000-2421
【页码】203-207
【摘要】建立了牙鲆弹状病毒的环介导等温扩增(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)检测方法,首先根据牙鲆弹状病毒的糖蛋白的基因保守序列,利用PrimerExplorerV3软件设计了6条引物,并对LAMP反应温度和反应时间等条件进行了优化.该方法的检测限为30fgRNA,比常规RT-PCR灵敏度高100倍,与鲤春血症病毒、传染性胰脏坏死病毒、传染性造血器官坏死病毒、海洋双RNA病毒、病毒性出血败血症病毒以及病毒性神经坏死病毒等没有交叉反应.该方法检测时间短,在1h内即可完成检测.用建立的LAMP方法对临床鱼样进行了检测,结果表明40尾石鲽鱼样品中有3尾感染HRV,与病毒分离结果一致,说明LAMP方法比较适合牙鲆弹状病毒的早期及现场诊断.
3.申请号:
200810160607.0申请日:
2008.11.19
名称:
传染性胰脏坏死病毒的快速检测试剂盒及其检测方法
公开(公告)号:
CN101457260公开(公告)日:
2009.06.17
主分类号:
C12Q1/70(2006.01)I分案原申请号:
分类号:
C12Q1/70(2006.01)I;
C12Q1/68(2006.01)I
颁证日:
优先权:
申请(专利权)人:
山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心
地址:
266002山东省青岛市瞿塘峡路70号
发明(设计)人:
岳志芹;
李琼;
梁成珠;
朱来华;
邓明俊;
张太翔;
辛学谦;
刘荭;
肖西志;
凌宗帅;
郑小龙;
张健国际申请:
国际公布:
进入国家日期:
专利代理机构:
青岛海昊知识产权事务所有限公司代理人:
张中南
摘要:
本发明公开一种传染性胰脏坏死病毒的快速检测试剂盒及其检测方法。
本发明包括由BstDNA聚合酶、逆转录酶、反应缓冲液、环介导等温扩增混合液、引物混合液和荧光显色剂共6种试剂组成的试剂盒,以及使用该试剂盒检测鱼类样品中传染性胰脏坏死病毒的一套检测操作程序,以实现对传染性胰脏坏死病毒快速检测的标准化,为鱼类的健康养殖和国际鱼类贸易的发展提供科学依据。
本发明具有特异性好、灵敏度高、操作简便、高效等优点,可广泛的应用于水产养殖场以及进出口鱼类贸易中的现场即时检测,并可以为相关基础研究提供技术支持,具有广泛应用前景。
4.【篇名】淋巴囊肿病毒环介导等温扩增检测方法的建立与应用
【作者】李琼,岳志芹,凌宗帅等.
【作者单位】华中农业大学水产学院,武汉430070;
山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心,青岛266002;
【出处】华中农业大学学报,2009,28(3)
【页码】341-345
【摘要】根据淋巴囊肿病毒的主要衣壳蛋白(majorcapsidprotein,MCP)基因保守序列,利用PrimerExplorer3软件设计了5条引物,对LAMP反应温度和反应时间等参数进行了优化.与流行性造血器官坏死病毒、虎纹蛙病毒、蛙虹彩病毒、新加坡石斑虹彩病毒、鳜传染性脾肾坏死病毒、真鲷虹彩病毒等其它虹彩病毒及对虾白斑综合症病毒都没有交叉反应.将LAMP检测方法与常规PCR进行灵敏度的比较分析,结果显示LAMP的检测灵敏度约为15fg,比常规PCR灵敏度高一个数量级.该方法检测时间短,在1h内即可完成检测.用建立的LAMP方法对临床鱼样进行了检测,结果表明12尾外观有淋巴囊肿病症状的牙鲆样品中都含有淋巴囊肿病毒,而10尾外观正常牙鲆鱼苗则没有检测到淋巴囊肿病毒(与预期结果一致),说明LAMP方法比较适合淋巴囊肿病毒的早期及现场诊断.
5.申请号:
200810160300.0申请日:
淋巴囊肿病毒的快速检测试剂盒及其检测方法
CN101550456公开(公告)日:
2009.10.07
陈晓;
贾俊涛;
张健;
赵巍;
辛学谦
本发明公开一种淋巴囊肿病毒的快速检测试剂盒及其检测方法。
本发明包括由BstDNA聚合酶、反应缓冲液、环介导等温扩增混合液、引物混合液和荧光显色剂共5种试剂组成的试剂盒,以及使用该试剂盒检测鱼类样品中淋巴囊肿病毒的一套检测操作程序,以实现对淋巴囊肿病毒快速检测的标准化,为鱼类的健康养殖和国际鱼类贸易的发展提供科学依据。
6.TI:
Developmentandevaluationofaloop-mediatedisothermalamplificationassayforrapiddetectionoflymphocystisdiseasevirus
利用LAMP方法检测淋巴囊肿病毒
AU:
Li,Qiong;
Yue,Zhiqin;
Liu,Hong;
Liang,Chengzhu;
Zheng,Xiaolong;
Zhao,Yuran;
Chen,Xiao;
Xiao,Xizhi;
Chen,Changfu
AF:
TechnicalCenterofShandongEntry-ExitInspectionandQuarantineBureau,No.70QutangxiaRoad,Qingdao266002,China
SO:
JournalofVirologicalMethods[J.Virol.Methods].Vol.163,no.2,pp.378-384.Feb2010.
AB:
Aloop-mediatedisothermalamplification(LAMP)assaywasdevelopedforthedetectionoflymphocystisdiseasevirus(LCDV).Asetoffivespecificprimers,twoinnerandtwoouterprimersandaloopprimer,weredesignedonthebasisofthemajorcapsidproteingeneofLCDV.Thereactiontimeandtemperatureswereoptimizedfor60minat63AdegreeC,respectively.LAMPamplificationproductsweredetectedbyaladder-likeappearanceonagarosegelelectrophoresisoranaked-eyeinspectionofacolorchangeinthereactiontubebyadditionofSYBRGreenI.TheassaywasspecificforLCDV,andtherewasnocross-reactivitywithwhitespotsyndromevirus(WSSV)orsixotherIridoviridaeviruses(epizootichematopoieticnecrosisvirus,EHNV;
tigerfrogvirus,TFV;
Bohleiridovirus,BIV;
soft-shelledturtleiridovirus,STIV;
infectiousspleenandkidneynecrosisvirus,ISKNV;
redseabreamiridovirus,RSIV).ThedetectionlimitoftheLAMPassaywas15fg,whichwassimilartothatofreal-timequantitativepolymerasechainreaction(PCR)and10-foldhigherthantheconventionalPCR.TheLAMPassaywasevaluatedusing109clinicalsamples,andtheresultsindicatedthesuitabilityandsimplicityofthetestasarapid,fielddiagnostictoolfordetectionofLCDV.TheLCDVLAMPassayhaspotentialforearlydiagnosisofLCDVinfection.
PB:
ElsevierScience,P.O.Box211Amsterdam1000AENetherlands
7.
【题名】一步法环媒恒温扩增(RT-LAMP)技术检测鲤春病毒血症病毒(SVCV)方法的建立和应用
【会议录名称】2007年中国水产学会学术年会暨水产微生态调控技术论坛论文摘要汇编,2007年
【作者】刘宗晓;
刘荭;
李惠芳;
吕建强;
田飞焱;
高隆英;
江育林;
谢从新;
【作者单位】华中农业大学水产学院;
北海市炎黄生物技术研究所;
深圳出入境检验检疫局;
【会议名称】2007年中国水产学会学术年会暨水产微生态调控技术论坛
【关键词】SVCV;
RT-LAMP;
semi-nestedRT-PCR;
real-timeRT-PCR;
SVC检测和监控;
【论文摘要】本文建立了一步法环媒恒温扩增技术(RT-LAMP)检测鲤春血症病毒(SVCV)的方法。
根据SVCV糖蛋白基因的保守序列,设计两个内引物和两个外引物,通过简单易行的LAMP扩增技术,对SVCV进行检测。
其扩增条件优化结果为63℃恒温作用60min。
使用狗鱼弹状病毒(PFR)、传染性胰腺坏死病毒(IPNV)、病毒性出血性败血症病毒(VHSV)、传染性造血器官坏死病毒(IHNV)等弹状病毒检测其特异性,只有SVCV有扩增。
灵敏度检测结果表明,LAMP检测与半巢式PCR(semi-nestedRT-PCR)扩增的灵敏度相同,比实时荧光PCR(real-timeRT-PCR)扩增的灵敏度低一个数量级。
通过对不同检测方法的检测速度、灵敏度、特异性、成本、对仪器的要求等方面的比较,表明RT-LAMP检测技术快速、简单、易于操作,同时具有较高的灵敏度和特异性,适合SVCV的现场检测和大规模监控。
8.
DN:
ProQuestDeepIndexing:
Agriculture
TI:
Developmentandevaluationofaone-steploop-mediatedisothermalamplificationfordetectionofspringviraemiaofcarpvirus
利用LAMP方法检测鲤春血症病毒
Liu,Z;
Teng,Y;
Xie,X;
Li,H;
Lv,J;
Gao,L;
Tian,F;
Jiang,Y;
Chu,Z;
Xie,C;
Liu,H
1CollegeofFisheries,HuazhongAgriculturalUniversity,Wuhan,China,
[mailto:
congxinxie@]
JournalofAppliedMicrobiology[J.Appl.Microbiol.].Vol.105,no.4,pp.1220-1226.Oct2008.
AbstractAim:
Springviraemiaofcarpvirus(SVCV)isthecausativeagentofSVCdisease.Themainaimofourstudywastodevelopaone-stepreversetranscriptionloop-mediatedisothermalamplification(RT-LAMP)assayforrapid,sensitiveandeffectivedetectionofSVCV.MethodsandResults:
Asetoffourspecificprimers,twoouterandtwoinnerprimersweredesignedbasedontheSVCVMgeneforRT-LAMPassay.ThesensitivityandspecificityofRT-LAMPweredeterminedandclinicaltestwasperformedunderoptimizedamplificationconditions(64degreeC,60min).Theresultsshowedthattheassayhasahighspecificityandthedetectionlimitwas80copiesusing10-foldseriesdilutionsofSVCVRNA,10timesmoresensitivethannestreversetranscription-polymerasechainreaction.Inthedetectionof472fishsamples,thisassayshowedexcellentagreementwiththestandardvirusisolationmethod(Kappa=0.807).Conclusions:
AsensitiveandspecificRT-LAMPassaywassuccessfullydevelopedtomonitoranddetectSVCV.SignificanceandImpactoftheStudy:
ThisworkprovidesarobustmethodforevaluatingtheriskofSVCV.GiventheadvantagesofLAMPinthedetectionofSVCV,thismethodcanbeappliedtodiagnoseotherviruses,whichposeseriousthreatstotheaquacultureindustry.
9.
【篇名】环介导等温扩增法(LAMP)在水生动物病害检测中的应用
【作者】张家松,王印庚,陈义平.
【作者单位】中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛,266071;
中国水产科学研究院南海水产研究所,广东广州,510300;
中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛,266071;
中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛,266032;
大连水产学院,辽宁大连,116023;
【出处】中国动物检疫,2010,27
(2)
【ISSN】1005-944X
【页码】71-73
【摘要】近年来我国的水产养殖发展迅速,养殖面积和产量都位居世界第一.但是疾病频发一直是困扰水产养殖的一个问题,而病原的快速检测是水产动物疾病防控的前提和关键.随着水产病害基础研究的不断深入,病原的检测技术也得到快速发展.本文介绍了一种新型的核酸扩增技术--环介导等温扩增(loo-reediatedisothermalamplification,
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