病理技术专业知识1.docx
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病理技术专业知识1.docx
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病理技术专业知识1
(一)单纯固定液
甲醛:
1.浓度:
40%,气体
2.渗透力强,固定均匀,组织收缩小,
3.不能使白蛋白和核蛋白沉淀
4.保存脂类,必须用冷冻切片。
是糖的保护剂
5.可固定高尔基体,线粒体
重铬酸钾
1.浓度:
1%-3%水溶液,有毒,橘红色结晶
2.穿透速度快,几乎不收缩,经乙醇脱水后明显收缩,
3.未酸化的重铬酸钾不能使蛋白质沉淀,但可使蛋白质变为脂溶剂。
酸化后可使蛋白质沉淀,此时染色体可被保存,但线粒体破坏。
4.固定高尔基体和线粒体有良好效果。
5.酸性染料着色好,碱性染料着色差
6.固定的组织需经流水冲洗12-24h,或用亚硫酸盐洗涤。
苦味酸
1.黄色结晶体,是一种强酸,易燃易爆,配成饱和溶液储藏
2.穿透慢,组织收缩明显,无明显硬化。
3.能沉淀一切蛋白质
4.对脂肪和类脂无固定作用。
5.可软化皮肤和火棉胶,不宜用火棉胶包埋
6.固定时间不宜超过24h,
7.固定的组织应尽快放入70%乙醇,滴加饱和碳酸锂或浓氨水,有助于除去苦味酸固定产生的黄色。
升汞
1.浓度为5%-7%的水溶液,针状结晶
2.穿透力低,只宜固定薄片组织,单独应用组织收缩明显
3,对蛋白质有固定作用,
4.对类脂和糖类无固定作用
5.临用时加冰醋酸
醋酸
1.刺激性气味的无色液体,低于15℃为冰醋酸
5%的醋酸PH为2-8,可抑制细菌和酶的活性,可防止自溶。
2.穿透力强
3不能沉淀白蛋白,球蛋白,但能沉淀核蛋白
4不能固定脂肪和酯,不能保存糖
5.固定线粒体和高尔基复合体不能用高浓度的醋酸,可较好的保存染色体
6,缺点是组织膨胀明显,尤其对于胶原纤维和纤维蛋白
铬酸
1.为三氧化铬的水溶液,浓度0.5%-1%,强氧化剂,不能与乙醇,甲醛等混合
2穿透力弱,一般组织需固定12-24h,固定的组织有收缩,
3能沉淀蛋白质,核蛋白固定良好。
4对脂肪无固定作用
5固定线粒体和高尔基复合体
6.宜避光保存,以防蛋白质溶解。
7.必须彻底流水冲洗(≥24h)。
锇酸(四氧化锇)
1.淡黄色结晶,剧毒,浓度1%-2%,强氧化剂,不能与乙醇,甲醛等混合
2.渗透力极弱,易使组织变硬,延长固定时间,组织的脆性增加,对染色不利。
3.固定均匀,不沉淀蛋白质。
4.为脂类固定剂
5.适用于线粒体和质网的固定
6.为电镜研究的必须固定剂。
7.固定目的不同,配方和浓度根据需要改变
8.固定后对碱性染料亲和力强,细胞核的染色效果好
9.应在临用前前几天配制以保证充分溶解。
丙酮
1.易挥发,易燃的无色液体,可与水,醇,氯仿,醚混合
2.渗透力强,对核的固定差
3.可使蛋白质沉淀
4.作用基本与乙醇相同,但对糖原无固定作用
5.广泛用于酶组织化学中各种酶的固定
乙醇
1.无色液体,,还原剂,可与水无限相溶,有固定兼脱水作用
用于固定的浓度为80%-95%
2.渗透力弱,固定速度较慢,易使组织变脆,无水乙醇固定时,穿透速度快,渗透力差,使组织收缩
3.,能沉淀白蛋白,球蛋白,核蛋白
4.用于糖原的固定
5.50%以上乙醇可溶解脂肪和类脂体,并可溶解血红蛋白,对其他色素也有破坏。
三氯醋酸
1.为无色易潮解的结晶体,水溶液为强酸性,易溶于醇和醚,应密封保存
2.也是一种良好的脱钙剂
(二)混合固定液
B-5固定液(醋酸钠-升汞-甲醛)
1.多用于固定淋巴组织,
2.染色前应进行脱汞处理
3.配方:
无水醋酸钠1.25g,升汞6g,甲醛10ml,蒸馏水90ml.
Bouin液
1.有一定毒性,应避免吸入或与皮肤接触
2.固定液偏酸,对抗原有一定损害,使组织收缩,不适宜标本的长期保存
3.固定效果好,组织细胞结构完整。
细胞核着色鲜明,细胞质着色较差。
4.对脂肪固定效果好,尤适用于含脂肪的淋巴结,乳腺组织和脂肪瘤标本
5.适用于结缔组织染色,尤其是三色染色更为理想。
6.配方:
饱和苦味酸水溶液:
甲醛水溶液:
冰醋酸=15:
5:
:
1
Carnoy液
1.有防止乙醇的硬化和收缩作用,增加渗透力,外膜致密的组织可用其固定
2.固定速度快,3mm厚组织块1h即可固定,大块组织不超过4h。
3,固定细胞质和细胞核,对于染色体固定佳,显示DNA,RNA效果好。
4.常用于糖原和尼氏体的固定
5.不能保存脂类,不适用脂肪染色。
6.配方:
冰醋酸10ml,氯仿30ml,无水乙醇60ml
Muller液
1.作用缓慢,固定均匀,组织收缩小
2.多用于媒染和硬化神经组织
3.固定过程中,需常更换新鲜的液体
4.配方:
重铬酸钾2-2.5g,硫酸钠1.0g,蒸馏水100ml
Orth液
1.渗透力强,组织收缩小
2.应临时配置,在暗处固定,固定24h左右,固定液变为黑色时不可用,固定后流水冲洗12-24h。
3.固定胚胎组织,神经组织。
脂肪组织
4.配方:
重铬酸钾2.5g,硫酸钠1.0g,蒸馏水100ml,37%-40%的甲醛10ml(用时加入)
PFG液
1.适用于多种肽类抗原的固定,多用于免疫电镜研究
2.对细胞抗原性和结构保存好
3.配方:
对苯醌20g,多聚甲醛15g,25%戊二醛40ml,0.1mol/L二甲砷酸钠缓冲液1000ml。
PLP和PLPD液
1.均含过碘酸盐
2.对细胞抗原性和结构保存好,适用于富含糖类组织的固定
Rossman液
1.对糖原固定好,固定12-24h,用95%的乙醇洗
2.配方:
无水乙醇苦味酸饱和液90ml,甲醛10ml
Zenker液
1.用于固定多种组织,对于病毒包涵体固定效果也较好
2.使细胞核和细胞质染色清晰,常用于三色染色,对免疫球蛋白染色最好
3.不适用含血量较多的标本,如充血的脾脏和肺梗死等标本
4.不能用金属容器盛放,且固定后不能用金属镊夹取。
4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液
1.适用于光镜免疫组织化学法,
2.动物先用此液灌注固定,取材后再用该液浸泡固定
3.可用于标本的较长时间的保存
4%多聚甲醛-磷酸二钠/氢氧化钠
1.适用于光镜和电镜免疫组织化学法,
2.用于免疫电镜时,应加入新鲜配置的戊二醛。
使其终浓度为0.5-1%
3.性质温和,可长期保存组织。
4.配置后PH值应调至7.2-7.4,4保存
甲醛-钙液
.适用于固定脂肪组织和组织化学染色
乙醇-甲醛液
有脱水作用,对皮下组织中肥大细胞的固定好
乙醚-乙醇液
渗透性强,固定效果好,用于细胞涂片的固定。
去除甲醛色素:
Verocay液
脱汞盐结晶:
Lugol液
脱黑色素:
0.25%高锰酸钾
蓝化作用:
稀氨水
组织的脱水
(一)乙醇
乙醇脱水的浓度:
70%—80%—90%—95%—100%
进行糖原和尿酸盐结晶染色的标本应直接用无水乙醇固定,更换一次无水乙醇脱水即可。
(二)丙酮
与乙醇作用相似,但对组织块的收缩作用比乙醇更严重,快速脱水或固定兼脱水时应用,脱水时间为1-3h.
丙酮可作为染色后的脱水剂,用于DNA和RNA染色。
(三)异丙醇
是乙醇的良好替代品,不含水,可代替无水乙醇使用,对火棉胶和染料不溶,因此不能用于火棉胶包埋和染料配制。
(四)正丁醇和叔丁醇(电镜标本制作时常用作中间脱水剂。
)
正丁醇:
无色液体,脱水能力较弱,可与水,乙醇和石蜡混合,因此,这种这种脱水的组织块可直接浸蜡包埋,
叔丁醇:
无毒,可与水,乙醇和二甲苯混合,与正丁醇相比,它不易使组织收缩或变硬,而且脱水后可不经透明直接浸蜡,
(五)还氧已环
还氧已环能于水和乙醇混合,也能溶解石蜡,可代替乙醇进行脱水,也可代替二甲苯进行透明,不引起组织收缩和硬化,用于制备植物标本较好,易挥发,价格昂贵。
(六)四氢呋喃
易于水,乙醇,丙醇和苯类混溶,对组织渗透快,易挥发,无毒,可用作封片溶剂,对染料不溶。
(七)环己酮
环己酮无毒,与苯,二甲苯,氯仿和石蜡混合,可代替无水乙醇脱水后直接浸蜡,组织块不会变硬。
(八)松脂醇
可取代无水乙醇用作脱水剂和随后的浸透与包埋。
树脂包埋法适用于:
不脱钙骨髓活检组织,肝、肾穿刺活检和淋巴结组织等。
常用的特殊染色技术
一结缔组织染色
Mallory三色Masson三色
胶原纤维,网状纤维蓝色绿色
软骨,粘液,淀粉样淡蓝色
神经胶质纤维,肌纤维红色红色
髓鞘,红细胞橘红色橘红色
显示胶原纤维,网状纤维,弹性纤维三联染色
胶原纤维:
红,
网状纤维:
黑,
弹性纤维:
绿色
肌肉和红细胞:
淡黄色
二胶原纤维染色
(一)显示胶原纤维,细胞,肌肉的染色法
1试剂:
Ponceau(丽春红)染色液:
丽春红水溶液10-15ml,
苦味酸饱和水溶液85-90ml
Victoriablue(维多利亚蓝):
维多利亚蓝,70%乙醇
2结果:
胶原纤维:
红,
细胞核和血细胞:
绿色
肌肉:
黄色
3注意事项:
①:
Ponceau染色后。
不能与水接触,直接用无水乙醇冲洗脱水
②:
胶原纤维切片的厚度需6um,
③:
Victoriablue染色液应盛染色缸,进行染色。
(二)天狼星红苦味酸染色法
1.试剂:
天狼星红饱和苦味酸液:
0.5%天狼星红10ml,苦味酸饱和水溶液,90ml
天青石蓝液:
天青石兰,铁明矾,蒸馏水,甘油,浓盐酸
2结果:
胶原纤维:
红,
细胞核和血细胞:
绿色
其他:
黄色
3注意事项:
①:
细胞核复染可以用Harris木精淡染
②:
必须用偏光显微镜观察
三网状纤维染色
(一)Gomori银染色法
1.结果:
网状纤维:
黑色
胶原纤维:
红,
背景:
黄色
3注意事项:
①氨性银溶液:
必须器皿洗干净,滴加氨水不能过量,冰箱保存
②氧化液存放时间不能过长,以免失去氧化作用
③丽春红复染用滴染方便,无水乙醇冲洗要倾斜
(二)James染色法
1.结果:
网状纤维:
黑色
胶原纤维:
红,
背景:
淡黄色
3注意事项:
①5%硝酸银使用时不能滴染
②二氨银配制时,氨水要一滴一滴的加,以免浓氨水加的太多
③甲醛液要新配制
四:
弹性纤维染色
(一)维多利亚蓝染色
结果:
弹力纤维:
蓝色
细胞核:
红色
注意事项:
配制的溶液放置2周成熟后使用
(二)Gomori醛复红染色法
1试剂:
醛复红染液:
碱性复红0.5g,浓盐酸1ml,70%乙醇100ml,三聚乙醛1ml
室温下静置1-2日,待变为紫色即成熟,于冰箱保存备用。
橘黄G染液:
2:
对特殊的蛋白质及含硫酸根的粘多糖有很强的亲和力,和弹力纤维结合很紧。
对肥大细胞颗粒,脂褐素,HBsAg,胃主细胞,胰岛的β细胞,脑垂体的嗜碱性细胞也能很好着色。
3固定液:
以甲醛生理盐水固定的染色效果最佳。
结果:
弹力纤维深紫色
粘液紫色
五显示弹性,胶原纤维的双重组合染色
结果:
弹力纤维:
蓝绿色
胶原纤维:
红色
背景:
淡黄色
注意事项:
维多利亚蓝液可每次反复使用,溶液在室温中保存可用数年。
六肌肉组织染色
(一)横纹肌组织染色
Mallory磷钨酸木精染色法(PTAH)
1.结果:
横纹肌蓝色
胶原纤维,网状纤维:
黄色或玫瑰红色
心肌(缺血缺氧):
紫蓝色或棕黄色
2.注意事项:
①.此液经处理数周后至数月才成熟,置冰箱保存可使用多年时间。
②.可加入0.15高锰酸钾,加
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