人教版高二生物选修三教学案12基因工程的基本操作程序Word文档格式.docx
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人教版高二生物选修三教学案12基因工程的基本操作程序Word文档格式.docx
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3.理解目的基因导入受体细胞的方法、检测与鉴定目的基因的方法。
一、目的基因的获取(阅读P8-11)
1.基因工程的基本操作程序
(1)目的基因的获取。
(2)基因表达载体的构建。
(3)将目的基因导入受体细胞。
(4)目的基因的检测与鉴定。
2.目的基因的获取
(1)目的基因
主要是指编码蛋白质的基因,也可以是一些具有调控作用的因子。
(2)常见方法
①从基因文库中获取
基因文库的种类
②利用PCR技术扩增目的基因
a.原理:
DNA双链复制。
b.条件:
引物、DNA模板、Taq酶、四种脱氧核苷酸。
c.过程:
目的基因DNA受热变性后解链为单链,引物与单链相应互补序列结合,然后在DNA聚合酶作用下进行延伸,如此重复循环多次。
d.结果:
每一次循环后,目的基因的量可以增加一倍,即成指数形式扩增(约为2n,n为扩增循环的次数)。
③人工合成法:
如果基因比较小,核苷酸序列又已知,可借助DNA合成仪用化学方法直接人工合成。
二、基因表达载体的构建(阅读P11)
1.基因表达载体的功能
使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,使目的基因能够表达和发挥作用。
2.基因表达载体的构成
3.基因表达载体的构建过程
一般用同一种限制酶分别切割载体和目的基因,再用DNA连接酶把两者连接。
三、将目的基因导入受体细胞(阅读P11-13)
1.转化的概念
目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。
2.转化的方法
(1)导入植物细胞
①农杆菌转化法:
将目的基因导入双子叶植物和祼子植物。
②基因枪法:
将目的基因导入单子叶植物常用的方法。
③花粉管通道法:
我国科学家独创的一种方法。
(2)导入动物细胞
①方法:
显微注射技术。
②常用受体细胞:
受精卵。
(3)导入微生物细胞
第一步:
首先用Ca2+处理细胞,使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,这种细胞称为感受态细胞。
第二步:
将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收DN
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