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1mol/LHEPES:
将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH调pH
6.8-8.2),然后用水定容至100ml。
1mol/LHCl:
力口8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
25mg/mlIPGT:
溶解250mg的IPGT(异丙基硫代-p-D-半乳糖苷)于10ml
水中,分成小份贮存于-20Co
100mmol/LPMSF:
1mol/LMgCI2:
溶解20.3gMgCI2?
6H2O于足量的水中,定容到100mlo
溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的异丙
或贮存于-20Co
20mg/ml蛋白酶K
(ProteinaseK):
将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml
水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20Co10mg/mlRnase(无DNase)(DNase—freeRNase):
溶解10mg的胰蛋白
RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH5.0)溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。
用1mol/L的Tris—HCl调pH至7.5,于
100mlo
-20C贮存。
(配制过程中要戴手套)
5mol/L氯化钠(NaCl):
溶解29.2g氯化钠于足量的水中,定容至10N氢氧化钠(NaOH):
溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中(磁
力搅拌器搅拌),氢氧化钠完全溶解后用水定容至1Lo
10%SDS(十二烷基硫酸钠):
称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的
2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):
溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使终体积为100ml。
100%三氯乙酸(TCA):
在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。
(稀释液应在临用前配制)
2.5%X—gal(5-溴-4-氯-3-吲哚一3-半乳糖苷):
溶解25mg的X—gal
于1ml的二甲基甲酰胺(DMF),用铝箔包裹装液管,贮存于-20C。
100XDenhardt试剂(Denhardt'
sregent)成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量
2%聚蔗糖(Ficoll,400型)
2%聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40)2%BSA(组分V)
水2g2g2g
加水至总体积为100ml
依照上表称取各组分,溶于水中定容。
过滤除菌及杂质,分装成小份于
10X标准DNA连接酶缓冲液(standardDNAligasebuffer)(粘端、平端连接)成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量
0.5mol/LTris-HCl100mmol/LMgCl2
100mmol/LDTT2mmol/LATP5mmol/L盐酸亚精胺(可选)
0.5mg/mlBSA(组分V)(可选)
水5ml1mol/L贮液
1ml1mol/L贮液
200ul100mmol/L贮液
50ul1mmol/L贮液
0.5ml10mg/mL贮液
2.25ml
将配制好的缓冲液分装成小份,贮存于-20C0
100mmol/LdNTP溶液(dNTPsolutions)可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液,-80C可贮存至少6个月。
10mmol/LdNTP混合液成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量
10mmol/LdATP10mmol/LdCTP10mmol/LdGTP10mmol/LdTTP
水2ul100mmol/LdATP贮液
12ul20%PEG8000/2.5MNaCl
成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量质量浓度为20%聚乙二醇2.5mol/L氯化钠水20g50ml5mol/L氯化钠或14.6g固体氯化钠补足100ml
加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中,加水至终体积100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解。
20XSSC
成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量
300mmol/L柠檬酸三钠(二水)
3mol/L氯化钠水88.2g175.3g
补足1L
溶解柠檬酸三钠(二水)和氯化钠于约0.9L水中,加几滴10NNaOH溶液调pH为7.0,用水补足体积至1L。
DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水加lOOulDEPC于100ml水中,使DEPC的体积分数为0.1%。
在37C温浴至少12h,然后在15psi条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPC
失活。
DEPC会与胺起反应,不可用DEPC处理Tris缓冲液。
甲酰胺(deionizedformamide)直接购买或加DowexXG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中,用磁力
搅拌器轻轻搅拌1h,可去除甲酰胺中的离子。
经Whatman1号滤纸过滤
除去树脂后分成小份,充氮气于-80C贮存(防止氧化)。
磷酸缓冲液(phosphatebuffer)按照下表所给定的体积,混合1mol/L的磷酸二氢钠(单碱)和1mol/L磷酸氢二钠(双碱)贮液,获得所需pH的磷酸缓冲液。
配制1mol/L的磷酸二氢钠(NaH2PO4?
H2O)贮液:
溶解138g于足量水中,使终体积为
1L;
1mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4)贮液:
溶解142g于足量水中使终体积
为1L。
1mol/L磷酸二氢钠(ml)1mol/L磷酸氢二钠(ml)最终pH值
877
685
625
565
510
450
390
330
280123
150
185
225
265
315
375
435
490
550
610
670
7206.0
6.1
6.2
6.36.46.56.66.76.86.97.07.17.2
TE(用于悬浮和贮存DNA)
成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量
10mmol/LTris-HCl1mmol/LEDTA
水1ml1mol/LTris-HCI(pH7.4-8.0,25C)
200ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)
98.8ml
Tris缓冲液(Tris-HClbuffer
将121g的Tris碱溶解于约
0.9L水中,再根据所要求的pH(25C下)加
浓盐酸的体积(ml)pH8.6
142128.53846566671.3769.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2
.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液
电泳缓冲液
50XTris-乙酸(TAE)缓冲液
2mol/LTris碱
1mol/L乙酸
100mmol/LEDTA
水242g57.1ml的冰乙酸(17.4mol/L)
200ml的0.5mol/LEDTA(pH8.0)补足1L5XTris-硼酸(TBE)缓冲液
445mmol/LTris碱
445mmol/L硼酸盐
10mmol/LEDTA
水54g27.5g硼酸
20ml的0.5mol/LEDTA(pH8.0)
染料
1%溴酚蓝(bromophenolblue)加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
1%二甲苯青FF(xylenecyanoleFF)溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml。
10mg/ml的溴化乙锭(ethidiumbromide)
小心称取1g溴化乙锭,转移到广口瓶中,加100ml水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。
用铝箔包裹装液管,于4C贮存。
凝胶上样液(gelloadingsolutions)
6X碱性凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.3N氢氧化钠
6mmol/LEDTA18%聚蔗糖(400型)
0.15%溴甲酚绿
0.25%二甲苯青FF
水300ul10N氢氧化钠
120ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)
1.8g15mg25mg
补足到10ml6X聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.15%溴酚蓝
0.15%二甲苯青FF5mmol/LEDTA15%聚蔗糖(400型)
水1.5ml1%溴酚蓝
1.5ml1%二甲苯青FF100ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)
1.5g
补足到10ml6X溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.25%溴酚蓝
0.25%二甲苯青FF15%聚蔗糖(400型)水2.5ml1%溴酚蓝
2.5ml1%二甲苯青FF1.5g
补足到10ml6X甘油凝胶上样液(4C贮存)
0.15%二甲苯青FF5mmol/LEDTA50%甘油
1.5ml1%二甲苯青FF
100ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)
3ml3.9ml6X蔗糖凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.15%二甲苯青FF5mmol/LEDTA40%聚蔗糖
4g
补足到10ml
0.2%溴酚蓝
0.2%二甲苯青FF
200mmol/LEDTA
0.1%SDS
50%甘油
水20mg
20mg4ml0.5mol/LEDTA(pH8.0)100ul10%SDS5ml
三.常用培养基
LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中:
蛋白胨10g
酵母提取物5g
氯化钠10g
如果需要用1NNaOH(〜1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。
注:
琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
SOB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:
蛋白胨20g
氯化钠0.5g1mol/L氯化钾2.5ml
用水补足体积到1L。
分成100ml的小份,高压灭菌。
培养基冷却到室温后,再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。
soc培养基
成分、方法同sOB培养基的配制,只是在培养基冷却到室温后,除了在每
100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外,再加2ml灭菌的1mol/L
葡萄糖(18g葡萄糖溶于足够水中,再用水补足到100ml,用0.22um的
滤膜过滤除菌)。
TB培养基
蛋白胨12g
酵母提取物24g
甘油4ml
各组分溶解后高压灭菌。
冷却到60C,再加100ml灭菌的170mmol/L
KH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液(2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4
溶在足量的水中,使终体积为100ml。
高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌)。
2XYT培养基
蛋白胨16g
酵母提取物10g
氯化钠4ml
琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
YPD培养基
葡萄糖20g
用水补足体积为1L后,高压灭菌。
建议在高压灭菌之前,对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸,因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。
为了配制平板,需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。
四.常用抗生素
氨苄青霉素(ampicillin)(100mg/ml
的终浓度添加于生长培养基。
-20°
C贮存。
常以25ug/ml〜50ug/ml羧苄青霉素(carbenicillin)(50mg/ml)溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。
分装成小份于-20C贮存。
常以25ug/ml〜50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
甲氧西林(methicillin)(100mg/ml)溶解1g甲氧西林钠于足量的水中,最后定容至10ml。
分装成小份于-20C
贮存。
常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。
卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml)溶解100mg卡那霉素于足量的水中,最后定容至10ml。
分装成小份于
常以10ug/ml〜50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml)
溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。
常以12.5ug/ml〜25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
链霉素(streptomycin)(50mg/ml)溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。
分装成小份于-20C贮存。
萘啶酮酸(nalidixicacid)(5mg/ml)溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。
常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
四环素(tetracyyline)(10mg/ml)溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中,或者将无碱的四环素溶于无水
乙醇,定容至10ml0分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光,于-20C贮存0常以10ug/ml〜50ug/ml的终浓度添加于生长培养基0
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