六章动植物细胞培养装置和酶反应器上课讲义.ppt
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第六章动、植物细胞培养装置和酶反应器第六章动、植物细胞培养装置和酶反应器第一节动、植物细胞培养装置动、植物细胞培养装置动、植物细胞培养与微生物培养区别:
1、“贴壁培养”;2、对培养基的营养要求相当苛刻;3、对培养液因搅拌而产生的流体剪切力很敏感;4、培养所需时间要比微生物培养长。
5、植物细胞比微生物细胞大,生长停止时细胞浓度高,培养液粘度大。
一、动物细胞培养装置动物细胞培养技术的应用是多方面的。
许多有重要价值的蛋白质生物制品,如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等,都可以借助于动物细胞的大规模培养来生产。
用取自烧伤病人皮肤的健康细胞进行培养,可以获得大量自身的皮肤细胞,为大面积烧伤的病人移植。
培养的动物细胞还可以用于检测有毒物质。
许多致畸、致癌物质加入培养液后,培养细胞会发生染色体结构和数目的变异。
根据变异细胞占全部培养细胞的百分数,可以判断某种物质的毒性。
现在动物细胞培养已经成为检测有毒物质的快速而灵敏的有效手段。
医学家培养各种正常的或病变的细胞,用于生理、病理、药理等方面的研究,为治疗和预防疾病提供理论依据。
1、动物细胞悬浮培养、动物细胞悬浮培养生物反应器生物反应器生物反应器的特点是生物反应器的特点是搅拌桨是用尼龙丝编织搅拌桨是用尼龙丝编织带制成船帆形,搅拌轴带制成船帆形,搅拌轴也用磁力驱动旋转,转也用磁力驱动旋转,转速为速为2050r/min,氧,氧气通过插入溶液中的硅气通过插入溶液中的硅胶管扩散到培养液内,胶管扩散到培养液内,维持液内一定的溶氧水维持液内一定的溶氧水平。
平。
图61带帆形搅拌器的罐注系统培养装置图62非贴壁依赖性细胞培养中试及生产规模反应器中试及工业规模的动物细胞悬浮培养反应器混和搅拌器2、动物细胞贴壁培养的反应器、动物细胞贴壁培养的反应器图63培养用的滚瓶滚瓶(旋转)装置磁性搅拌装置中孔纤维培养器图64中孔纤维培养器该装置是由中空纤维管组成,每根中空纤维管内径为200m,壁厚为5070m,中空纤维管的管壁是半透性的多孔膜,氧与二氧化碳等小分子可以自由地透过膜双向扩散,而大分子的有机物则不能透过。
动物细胞贴附在中空纤维管外壁生长,可很方便地获取营养物质和溶氧。
3、动物细胞微载体悬浮培养反应器、动物细胞微载体悬浮培养反应器微载体微载体贴壁培养动物细胞的载体微珠称为微载体。
该微珠可用交换当量低的葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺、明胶或甲壳质等来制造,微载体球径约为40120m,经生理盐水溶胀后,其直径约60280m。
用于动物细胞培养时,要求球径较为均匀,径差小于2025m。
溶胀后的载体比重稍大于培养液的比重,一般要求密度在1.031.05g/mL,以便在反应器内经缓慢搅拌后,微载体能悬浮起来。
图65动物细胞贴壁培养后的微载体显微镜照片微载悬浮培养的反应器要解决的三个关键问题:
(1)具有合适的搅拌,使微载体在培养液内悬浮循环流动,而又不因过高的剪切力而使动物细胞受到破坏。
(2)不能像传统发酵罐那样用空气在培养液内鼓泡充氧,而只能用特殊方式来传递氧,以满足所需要的溶氧浓度。
(3)在培养液中要严格控制pH值,要求pH值控制误差小于0.05。
(1)中空纤维来作通气装置的微载体悬浮培养反应器中空纤维来作通气装置的微载体悬浮培养反应器,其H/D约为1.21.5,培养液通过下层螺旋桨搅拌器被缓慢地搅动循环,转速可在080r/min之间调节,使微载体在培养液中保持悬浮状态。
该反应器最大的特点是用直径为2.5mm的聚四氟乙烯中空纤维管作为通气供氧装置。
图66带中空纤维束的动物细胞悬浮培养反应器
(2)、气腔式动物细胞培养反应器反应器内只有一个旋转圆筒,在圆筒上部有35个中空的导向搅拌桨叶,在圆筒外壁上用200目(75m)不锈钢丝网焊成一个环状气腔,气腔下面有一圈气体分布管。
n反应器运转时,圆筒由轴联动一起以050r/min的转速旋转,培养液由于中空导向桨叶的搅动作用,液体与微载体的悬浮液由圆筒下部吸入,从中空导向桨叶流出,形成循环流动。
在气腔内气体由分布管鼓泡,气体溶于液体中,依靠气腔丝网外液体的循环流动及扩散作用,使溶于液体中的气体成分均匀地分布到反应器内,使用200目(75m)丝网的作用是保证微载体不进入到气腔,而气泡也不流入到培养悬浮液中,避免了气泡直接与动物细胞的接触。
图67气腔式动物细胞培养反应器5升动物细胞培养反应器50升动物细胞培养反应器二、植物细胞培养反应器二、植物细胞培养反应器通用式发酵罐、鼓泡式、气升式通用式发酵罐、鼓泡式、气升式和旋转圆筒式的生物反应器都可用于和旋转圆筒式的生物反应器都可用于植物细胞培养。
植物细胞培养。
n工业规模进行烟草植物细胞的连续培养装置:
n植物细胞培养的强制循环生物反应器n气升环流式植物细胞培养反应器n植物细胞培养的筛板塔式反应器5升植物细胞培养反应器5升植物细胞培养反应器第二节第二节酶反应器酶反应器一、酶反应器的类型一、酶反应器的类型以酶作为催化剂进行反应所需的设备称为以酶作为催化剂进行反应所需的设备称为酶反应器。
酶反应器基本上是游离酶、固定化酶反应器。
酶反应器基本上是游离酶、固定化酶或固定化细胞催化反应的容器。
酶反应器的酶或固定化细胞催化反应的容器。
酶反应器的类型很多,其分类方法也不同。
根据几何形状类型很多,其分类方法也不同。
根据几何形状和结构来分类,可分为罐型、管型、膜或片型和结构来分类,可分为罐型、管型、膜或片型几种。
按进料和出料的方式可分为分批式、半几种。
按进料和出料的方式可分为分批式、半分批式与连续反应器。
按其功能结构可分为膜分批式与连续反应器。
按其功能结构可分为膜反应器、液固反应器及气液固三相反应器三大反应器、液固反应器及气液固三相反应器三大类。
类。
表表63酶酶反反应器形式及其特征器形式及其特征均相均相酶酶反反应器器型式名型式名称称适用的操作方适用的操作方式式特特征征搅拌罐拌罐分批,半分批分批,半分批反反应器内的溶液用器内的溶液用搅拌器机械混合拌器机械混合超超滤膜膜反反应器器分批,半分批分批,半分批连续采用如透析膜、超采用如透析膜、超滤膜、中空膜、中空纤维等,只允等,只允许低分子化合物而低分子化合物而酶酶不能通不能通过的膜反的膜反应器,器,适用于大分子底物适用于大分子底物固定固定化化酶酶搅拌罐拌罐分批,半分批分批,半分批连续用用搅拌器拌器搅拌,固定化拌,固定化酶酶或固定化微生物粒或固定化微生物粒子子悬浮在溶液中。
粒子保留在槽内浮在溶液中。
粒子保留在槽内固定床固定床或填充或填充床床连续最广泛使用的固定化最广泛使用的固定化酶酶及固定化微生物反及固定化微生物反应器。
把固定化器。
把固定化酶酶或固定化微生物粒子(粒径或固定化微生物粒子(粒径100m至若干毫米)填充在塔内,底物溶液至若干毫米)填充在塔内,底物溶液一般是由下向上通入一般是由下向上通入流化床流化床分批,分批,连续靠溶液的流靠溶液的流动促使固定化促使固定化酶酶或固定化微生物或固定化微生物的粒子在床内激烈的粒子在床内激烈搅动、混合、混合膜反膜反应器器连续膜状或者片状的固定化膜状或者片状的固定化酶酶或固定化微生物反或固定化微生物反应器。
其器。
其组件形式有中空件形式有中空酶酶管、螺旋板反管、螺旋板反应器、旋器、旋转圆盘型、平板型等。
型、平板型等。
鼓泡塔鼓泡塔分批,半分批分批,半分批连续将固定化将固定化酶酶或者固定化微生物或者固定化微生物颗粒粒悬浮在鼓浮在鼓泡塔中,粒子保留塔内,适用于有气体(特泡塔中,粒子保留塔内,适用于有气体(特别是是O2)参与的反)参与的反应游离酶反应器游离酶反应器1搅拌罐式反应器搅拌罐式反应器搅拌罐式反应器是目前较常使用的搅拌罐式反应器是目前较常使用的游离酶反应器。
它由容器、搅拌器及游离酶反应器。
它由容器、搅拌器及保温装置组成。
保温装置组成。
2超滤膜酶反应器常用的超滤膜酶反应器的结构如图614,采用这种型式的反应器时,酶处于水溶液状态。
由于膜对于蛋白(大分子)物质是非透过性的,因此只允许小分子产物透过,而酶被截留回收重新使用,可节省用酶,特别适用于价格较高的酶。
固定化酶反应器固定化酶反应器n1搅拌罐型反应器有分批反应器(BatchStirredTankReactor,BSTR)和连续流搅拌罐反应器(ContinuosFlowStirredTankReactor,CSTR)(图615)。
这类反应器的特点是内容物的混合是充分均匀的。
n2固定床型反应器把颗粒状或片状等固定化酶填充于固定床(也称填充床,床可直立或平放)内,底物按一定方向以恒定速度通过反应床(图615)。
3流化床型反应器流化床反应器(简称FBR,FluidizedBedReactor)是一种装有较小颗粒的垂直塔式反应器(形状可为柱形、锥形等)(图615)。
4膜型反应器由膜状或板状固定化酶组装的反应器均称为膜型反应器。
用固定化酶膜组装成的平板状或螺旋状反应器、转盘型反应器、空心酶管和中空纤维膜反应器等都属于此类反应器。
n5鼓泡塔型反应器在反应中,涉及到有气体的吸收或产生,此类反应最好采用鼓泡塔型反应器,或三相硫化床反应器,其示意图如图617。
把固定化酶放入反应器内,底物与气体从底部通入。
酶反应器设计和操作的参数n停留时间停留时间、转化率、转化率、n反应器的产率反应器的产率PPrr、酶的用量、酶的用量、n反应器温度、反应器温度、pHpH值和底物浓度值和底物浓度,n当副反应不可忽视时,选择性选择性SSpp也是很重要的参数。
决定酶反应器设计和操作性能的参数:
n
(1)停留时间n反应物料进入反应器时算起,至离开反应器时为止所经历的时间。
对于CSTR,常使用“平均停留时间”来表达。
反应器的容积物料流入反应器中的体积流量又称空时(空间时间spacetime),其倒数1称为空速(空间速度spacevelocity)。
(2)转化率n表明供给反应的底物发生转变的分量底物的初始浓度t时的底物浓度分批式操作中流入反应器内的底物浓度流出液中底物的浓度连续式操作中(3)生产能力PrnPr(productivity)的定义是单位时间、单位反应器体积内生产的产物量.分批式操作中连续式操作中Pt为时间t时单位反应液体积中产物的生成量Pout为单位体积流出液中的产物量(4)选择性Spn选择性Sp(selectivity)是在有副反应发生的复合反应中,能够转变为目的产物的底物变化总量中,实际上转变为目的产物的比率。
asp是指从1mol底物S中所得到产物P的摩尔数Sp表明了整个反应的平均选择性主反应速率副反应速率瞬时(或局部)选择性酶反应器的选择n游离酶反应器的选择,可以采用一般生物反应器的选择要求来进行。
固定化酶反应器的选择则有更高的要求.n固定化酶反应器的选择,除同样根据使用的目的、反应形式、底物浓度、反应速率、物质传递速率和反应器制造和运转的成本及难易等因素进行选择外,还还应考虑应考虑固定化酶的的形状、大小、机械强度、比重和再生或更新的难易;操作上的要求;反应动力学形式和物质传递特性、内外扩散的影响;底物的性质;催化剂(固定化酶)的表面反应器体积的比值等。
固定化酶的形式颗粒状(particlepellet)膜状(membrane,film,plate)管状(tubing)纤维状以此为多,(表面积大)催化剂的形状,可以决定反应器的大致形式凝胶包埋法的固定化酶颗粒,有必要在床内安装筛板,将凝胶适当间隔开,防止凝胶发生压缩和变形.n酶酶失失活活是不可避免的,所以要保持恒定的酶活力,就必需进行催化剂的再生、新催化剂的补充或更换,这就要求反应器应具备相应的结构。
n底底物物的的性性质质是选择反应器的另一重要因素。
一般来讲,细粒状和胶状底物有可能阻塞填充柱或发生分层,这时可使用循环式反应器或流化床反应器。
另外,在讨论反应器的价格时,要考虑到固定化酶本身的价格有关生产问答哪一种类型和型号的泵最适合将酶制剂哪一种类型和型号的泵最适合将酶制剂加注到生产工序中?
加注到生产工序中?
答:
诺维信建议使用位移式计量泵如隔膜式、往复式或螺杆式。
其型号取决于工厂的生产规模以及特定的工艺和流量。
诺维
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