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紫外吸收:
由于蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸,因此在280nm波长处有特征性吸收峰。
茚三酮反应:
蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮反应。
双缩脲反应:
蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热,呈现紫色或红色,此反应称为双缩脲反应,双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。
第二章:
核酸的结构与功能
整理人:
吴竞
名解:
1.核酸的一级结构:
核酸中核苷酸的排列顺序。
由于核苷酸间的差异主要是碱基不同,所以也称为碱基序列。
2.Tm值:
解链过程中,紫外吸光度的变化达到最大变化值的一半时所对应的温度为DNA的解链温度(Tm)。
在此温度下,核酸分子内50%的双链结构被解开。
Tm值与DNA的分子大小和碱基中的G+C比例成正比。
3.核酶:
是指所有可以水解核酸的酶。
4.DNA的变性:
在某些理化因素(温度、PH、离子强度等)作用下,DNA双链的互补碱基对之间的氢键断开,使DNA双链结构散开,解开成两条单链的过程。
简答及知识点:
1.DNA双螺旋结构及其特点:
A.DNA是反向平行、右手螺旋的双链结构
脱氧核糖和磷酸基团组成的亲水性骨架位于双螺旋结构的外侧,疏水的碱基位于内侧。
双螺旋结构的表面形成了一个大沟和一个小沟。
亲水性的骨架位于双链的外侧,疏水性的碱基位于双链的内侧。
B.DNA双链之间形成了互补碱基对
碱基互补配对:
鸟嘌呤/胞嘧啶碱基互补配对:
腺嘌呤/胸腺嘧啶
C.疏水作用力和氢键共同维系着DNA双螺旋结构的稳定。
2.几种RNA的名称和功能。
3.成熟mRNA的结构及其特点。
成熟的mRNA由氨基酸编码区和非编码区构成,5-末端的帽子结构和3-末端的多聚A尾结构。
从mRNA分子5'
末端起的第一个AUG开始,每3个核苷酸为一组称为密码子,位于起始密码子和终止密码子之间的核苷酸序列称为开放阅读框决定了多肽链的氨基酸序列。
(简单的说结构就是:
编码区,非编码区,密码子,帽子结构,多聚A尾,启始密码子,终止密码子,开放阅读框)
第三章:
酶
邱健
1.酶的活性中心(activecenter)
指必需基团在空间结构上彼此靠近,组成具有特定空间结构的区域,能与底物特异结合并将底物转化为产物。
2.同工酶(isoenzyme)是指催化相同的化学反应,而酶蛋白的分子结构理化性质乃至免疫学性质不同的一组酶。
3.酶原:
有些酶在细胞内合成或初分泌时只是酶的无活性前体,必须在一定条件下,这些酶的前体水解一个活几个特定的肽键,致使构象发生改变,表现出酶的活性。
这种无活性的酶的前体称为酶原。
4.Km值:
米氏常数,Km是酶的特征性常数之一,Km等于酶促反应速度为最大反应速率一半时的底物浓度。
Km值越小,表示酶对底物的亲和力越大。
5.可逆性抑制作用对Vmax和Km的影响?
Vmax:
最大反应速率(maximumvelocity)Km:
米氏常数(Michaelisconstant)
各种可逆性抑制作用的比较
4.变构调节(allostericregulation)
一些代谢物可与某些酶分子活性中心外的某部分可逆地结合,使酶构象改变,从而改变酶的催化活性,此种调节方式称变构调节。
第四章:
糖代谢
任亮
在机体缺氧条件下,葡萄糖经一系列酶促反应生成丙酮酸进而还原生成乳酸的过程称为糖酵解(glycolysis),亦称糖的无氧氧化(anaerobicoxidation)。
由葡萄糖分解成丙酮酸(pyruvate),称之为糖酵解途径(glycolyticpathway)
糖异生(gluconeogenesis)是指从非糖化合物转变为葡萄糖或糖原的过程
糖在机体内的主要代谢途径有哪些?
其生物学意义是什么?
缺氧时,葡萄糖进行糖酵解生成乳酸。
其生物学意义在于迅速提供能量,这对肌肉收缩更为重要。
当机体缺氧或剧烈运动时肌肉局部血液相对不足时,能量主要通过糖酵解获得。
成熟红细胞没有线粒体,完全依赖糖酵解供应能量。
神经,白细胞,骨髓等代谢极为活跃,即使不缺氧也常由糖酵解提供能量。
在供氧充足时,葡萄糖进入有氧氧化,彻底氧化CO2和H2O。
这一过程释放出大量能量,以满足机体生命活动的需要。
葡萄糖也可以进入磷酸戊糖途径进行代谢,生成5-磷酸核糖与NADPH。
一方面为核糖的生物合成提供核糖,另一方面提供NADPH作为供氢体参与多种代谢反应。
葡萄糖也可经合成代谢聚合成糖原,贮存于肝或肌肉。
糖原作为葡萄糖储备的生物学意义在于当机体需要葡萄糖时,它可以迅速被动用以供急需。
肌糖原主要供肌肉收缩能量的需要,肝糖原则是血糖的重要来源
第五章:
脂类代谢
1.脂肪动员:
储存在脂肪细胞中的脂肪,被肪脂酶逐步水解为FFA及甘油,并释放入血以供其他组织氧化利用的过程。
脂肪动员关键酶激素敏感性甘油三酯脂肪酶。
2.酮体:
乙酰乙酸、β-羟丁酸、丙酮三者总称为酮体。
3.血脂:
血浆所含脂类统称血脂,包括:
甘油三酯、磷脂、胆固醇及其酯以及游离脂酸。
4.载脂蛋白:
指血浆脂蛋白中的蛋白质部分。
1.脂肪酸β-氧化过程:
部位:
除脑组织外,大多数组织均可进行,其中肝、肌肉最活跃。
胞液、线粒体。
过程:
a.脂酸的活化——脂酰CoA的生成(胞液)(关键酶:
脂酰CoA合成酶)
b.脂酰CoA进入线粒体(关键酶:
肉碱脂酰转移酶)
c.脂酸的β-氧化(过程:
脱氢加水再脱氢硫解)
d.脂酸氧化的能量生成
2.脂肪酸β-氧化每轮循环:
四个重复步骤:
脱氢、水化、再脱氢、硫解
产物:
1分子乙酰CoA1分子少两个碳原子的脂酰CoA1分子NADH+H+1分子FADH2
7轮循环产物:
8分子乙酰CoA7分子NADH+H+7分子FADH2
能量计算:
生成ATP8×
10+7×
2.5+7×
1.5=108
净生成ATP108–2=106
(16C软质酸为例)
3.胆固醇合成要点:
组织定位:
除成年动物脑组织及成熟红细胞外,几乎全身各组织均可合成,以肝、小肠为主。
细胞定位:
胞液、光面内质网。
合成原料:
18乙酰CoA+36ATP+16(NADPH+H+)1分子胆固醇
关键酶:
HMG-CoA还原酶(胆固醇合成限速酶)
代谢去路:
转变为胆汁酸(bileacid)(肝脏)转化为类固醇激素转化为7-脱氢胆固醇(皮肤)
4.血浆脂蛋白的分类:
乳糜微粒极低密度脂蛋白低密度脂蛋白高密度脂蛋白
第六章:
生物氧化
名解
1.呼吸链(respiratorychain)
指线粒体内膜中按一定顺序排列的一系列具有电子传递功能的酶复合体,可通过链锁的氧化还原将代谢物脱下的电子最终传递给氧生成水。
这一系列酶和辅酶称为呼吸链(respiratorychain)又称电子传递链(electrontransferchain)。
2.氧化磷酸化(oxidativephosphorylation)
是指在呼吸链电子传递过程中偶联ADP磷酸化,生成ATP,又称为偶联磷酸化。
3.底物水平磷酸化(substratelevelphosphorylation)
与脱氢反应偶联,生成底物分子的高能键,使ADP(GDP)磷酸化生成ATP(GTP)的过程。
不经电子传递。
4.ATP在能量的生成、利用、转移和储存中起核心作用
5.电子传递顺序模式:
NADH氧化呼吸链:
NADH→FMN→Fe-S→Q→Cytc→O2
琥珀酸氧化呼吸链:
琥珀酸→FAD→Fe-S→Q→Cytc→O2
第七章:
氨基酸代谢
1.营养必须氨基酸:
指体内需要而又不能自身合成,必须由食物供给的氨基酸,共有8种:
Val、Ile、Leu、Thr、Met、Lys、Phe、Trp。
靚(亮)姐(纈):
携一(异亮)本(苯丙)淡(蛋)色书(苏)来(赖)。
2、蛋白质腐败作用:
肠道细菌对未被消化的蛋白质及其消化产物所起的作用。
3、氨基酸代谢库:
食物蛋白质经消化吸收的氨基酸(外源性氨基酸)与体内组织蛋白质降解产生的氨基酸及体内合成的非必需氨基酸(内源性氨基酸)混在一起,分布于体内各处参与代谢,称为氨基酸代谢库(metabolicpool)。
4、丙酮酸-葡萄糖循环:
丙酮酸和葡萄糖周而复始地转变,完成肌肉和肝之间氨的转运,将这一途径称为丙氨酸-葡萄糖循环。
5、一碳单位:
某些氨基酸代谢过程中产生的只含有一个碳原子的基团,称为一碳单位(onecarbonunit)。
1.α-酮酸代谢去路:
(一)经氨基化生成非必需氨基酸
(二)转变成糖及脂类
2.血氨的来源与去路
1.血氨的来源
①氨基酸脱氨基作用产生的氨是血氨主要来源,胺类的分解也可以产生氨
RCH2NH2氨氧化酶RCHO+NH3
②肠道吸收的氨
氨基酸在肠道细菌作用下产生的氨
尿素经肠道细菌尿素酶水解产生的氨
③肾小管上皮细胞分泌的氨主要来自谷氨酰胺
谷氨酰胺谷氨酰胺酶谷氨酸+NH3
2.血氨的去路
①在肝内合成尿素,这是最主要的去路
②合成非必需氨基酸及其它含氮化合物
③合成谷氨酰胺
谷氨酸+NH3谷氨酰胺合成酶谷氨酰胺
ATPADP+Pi
④肾小管泌氨
分泌的NH3在酸性条件下生成NH4+,随尿排出。
病例:
一中年男子有肝硬化病史,某天出去喝酒,之后出现吐血,血压升高,第二天头晕昏迷,请简述原因?
•血氨浓度升高称高氨血症(hyperammonemia),常见于肝功能严重损伤时,尿素合成酶的遗传缺陷也可导致高氨血症。
•高氨血症时可引起脑功能障碍,称氨中毒(ammoniapoisoning)。
3.联合脱氨基机制:
转氨基作用和谷氨酸脱氢作用的联合作用,使氨基酸脱下α-氨基生成α-酮酸的过程。
①转氨基偶联氧化脱氨基作用
•此种方式既是氨基酸脱氨基的主要方式,也是体内合成非必需氨基酸的主要方式。
•主要在肝、肾组织进行。
②转氨基偶联嘌呤核苷酸循环
此种方式主要在肌肉组织进行。
4.鸟氨酸循环
5.谷氨酸循环:
6.丙氨酸-葡萄糖循环:
第八章核苷酸代谢
嘌呤核苷酸的分解代谢终产物是(尿酸)
嘧啶核苷酸的分解代谢终产物是(NH3CO2β—丙氨酸)
嘌呤和嘧啶的抗代谢物
抗代谢物
类似物
作用机制
5Fu
胸腺嘧啶
抑制胸苷酸合成酶
6MP
IMP
抑制IMP→AMP、GMP;
阻断补救合成途径;
阻断从头合成途径
阿糖胞苷
核苷
抑制CDP的还原
甲氨蝶呤
叶酸
抑制二氢叶酸还原酶
氮杂丝氨酸
谷氨酰胺
干扰谷氨酰胺在嘌呤核苷酸合成中的作用
别嘌醇
次黄嘌呤
抑制黄嘌呤氧化酶
嘌呤核苷酸的原料和来源:
第十章:
DNA的生物合成
1.半保留复制:
DNA生物合成时,母链DNA解开为两股单链,各自作为模板(template)按碱基配对规律,合成与模板互补的子链。
子代细胞的DNA,一股单链从亲代完整地接受过来,另一股单链则完全重新合成。
两个子细胞的DNA都和亲代DNA碱基序列一致。
这种复制方式称为半保留复制。
2.领头链:
顺着解链方向生成的子链,复制是连续进行的这股链称为领头链。
3.随从链:
另一股链因为复制的方向与解链方向相反,不能顺着解链方向连续延长,这股不连续复制的链称为随从链。
4.冈崎片段:
1968年日本生化学者冈崎用电镜及放射自显影技术,观察到DNA复制中出现一些不连续的片段,将这些不连续的片段称为冈崎片段。
5.端粒:
是指真核生物染色体线性DNA分子末端的结构部分,通常膨大成粒状。
6.逆转录:
在逆转录酶的催化下,以RNA为模板合成DNA的过程,又称反转录。
7.cDNA:
以mRNA为模板,经逆转录合成的与mRNA碱基序列互补的DNA链。
8.端粒酶:
端粒酶是一种RNA-蛋白质复合体,它可以其RNA为模板,通过逆转录过程对末端DNA链进行延长。
1.拓扑异构酶作用特点:
既能水解、又能连接磷酸二酯键、克服解链过程中的打结、缠绕现象。
2.DNA连接酶的功能:
a在复制中起接合双链中单链缺口的作用。
b在DNA修复、重组及剪接中也起缝合缺口作用。
c是基因工程的重要工具酶之一。
3.原核生物DNA聚合酶种类及功能:
DNA-polⅠDNA-polⅡDNA-polⅢDNA-polⅣDNA-polⅤ
polI校读、修复合成、切除引物填补空隙
polII参与DNA损伤的应急状态修复
polIII催化DNA聚合
4.真核生物DNA聚合酶种类及功能:
第十一章RNA的生物合成
唐浩峻,任亮
操纵子:
原核生物一个转录区段可视为一个转录单位,包括若干个结构基因及其上游(upstream)的调控序列。
转录空泡:
由酶-DNA-RNA形成的转录复合物。
在转录延长过程中,由局部打开的DNA双链、RNA聚合酶核心酶及新生成的RNA三者结合在一起的复合体,为空泡状结构。
又称转录复合物。
顺式作用元件及其类别:
DNA分子上具有的可影响(调控)转录的各种组分,包括启动子、增强子、沉默子。
反式作用因子及其类别:
能直接、间接辨认和结合转录上游区段DNA的蛋白质。
断裂基因:
真核生物结构基因,由若干个编码区和非编码区互相间隔开但又连续镶嵌而成,去除非编码区再连接后,可翻译出由连续氨基酸组成的完整蛋白质。
外显子:
在断裂基因及其初级转录产物上出现,并表达为成熟RNA的核酸序列。
内含子:
隔断基因的线性表达而在剪接过程中被除去的核酸序列。
原核生物转录终止方式及其机制:
方式1.依赖ρ因子的转录终止
ra、ρ因子是同六聚体蛋白;
rb、ρ因子能结合RNA,与polyC的结合力最强;
rc、ρ因子还有ATP酶和解螺旋酶的活性。
方式2.不依赖ρ因子的转录终止
DNA模板上靠近终止处,有特殊的碱基序列,转录出RNA后,RNA产物形成特殊的结构来终止转录。
不对称转录:
在DNA分子双链上某一区段,一股链可转录,另一股链不转录,模板链并非永远在同一单链上。
结构基因:
能转录出RNA的DNA区段称为结构基因
原核生物RNA聚合酶的组成和功能
聚合酶的组分
分子量
功能
说明
36512
决定哪些基因被转录
转录时不脱落
150618
催化功能
利福平或利福霉素的作用位点
155613
结合DNA模板
是RNA-pol与DNA模板结合相依附的组分,也参与转录全过程
70263
辨认起始点
转录延长时脱落
内含子的分类
I:
主要存在于线粒体、叶绿体及某些低等真核生物的rRNA基因;
II:
也发现于线粒体、叶绿体,转录产物是mRNA;
III:
是常见的形成套索结构后剪接,大多数mRNA基因有此类内含子;
IV:
是tRNA基因及其初级转录产物中的内含子,剪接过程需酶及ATP。
第十二章:
蛋白质的生物合成
1.遗传密码的特点
1)方向性2)连续性3)简并性4)通用性5)摆动性
2.起始密码子(initiationcodon):
作为起始信号的AUG称为起始密码子。
3.终止密码子(terminationcodon):
另有3个密码子UAA、UAG、UGA不编码任何氨基酸,只作为肽链合成终止的信号,称为终止密码子。
4.氨基酸的活化后的表达方式:
氨基酸活化形成氨基酰-tRNA
5.肽链的生物合成过程
原核生物的肽链合成过程:
起始
指mRNA和起始氨基酰-tRNA分别与核蛋白体结合而形成翻译起始复合物的过程。
1.)核蛋白体大小亚基分离;
2.)mRNA在小亚基定位结合;
3.)起始氨基酰-tRNA的结合;
4.)核蛋白体大亚基结合。
真核生物的肽链合成过程:
2.)起始氨基酰-tRNA的结合;
3).mRNA在小亚基定位结合;
4.)核蛋白体大亚基结合。
第十三章:
基因表达调控
1.管家基因:
某些基因在个体的几乎所有细胞中持续表达,通常被称为管家基因
2.转录起始操纵子:
原核生物绝大多数功能相关性基因成簇地串联于染色体上,加上其上游调控序列共同组成一个转录单位,即操纵子。
3.启动子:
真核基因启动子是RNA聚合酶结合位点周围的一组转录控制组件,至少包括一个转录起始点以及一个以上的功能组件。
启动子有方向性。
4.siRNA:
是细胞内一类双链RNA在特定情况下通过一定酶切机制,转变为具有特定长度的和特定序列的小品片段RNA,与特异的mRNA完全互补结合,导致靶mRNA降解,阻断翻译过程。
5.操纵子:
编码序列(或结构基因)及其上游调控序列。
1.乳糖操纵子调节:
乳糖操纵子受双重调节a.阻遏蛋白的负性调节b.CAP的正性调节c.协调调节
第十四章基因重组与基因工程
唐浩峻,任亮
限制性内切酶:
识别DNA的特异序列,并在识别位点或周围切割双链DNA的一类内切酶
基因工程的主要步骤:
分
目的基因获取
切
克隆载体选择与构建
接
外源基因与载体的连接
转
重组DNA导入受体菌
筛
重组体的筛选
回文结构(palindrome):
大部分Ⅱ类酶识别DNA位点的核苷酸序列呈二元旋转对称,通常称这种特殊的结构顺序为回文结构。
第十五章细胞信号转导
1.受体:
(receptor)是细胞膜上或细胞内能识别外源化学信号并与之结合的成分,其化学本质是蛋白质,个别糖脂。
2.第二信使:
1957年,E.Sutherland在研究肾上腺素促进肝糖原分解的机制时发现,这些激素的作用依赖于细胞产生一种小分子化合物环腺苷酸(cyclicAMP,cAMP),从而提出了cAMP是激素在细胞内的第二信使这一著名的激素信号跨膜传递学说。
目前已知的细胞内环核苷酸类第二信使有cAMP和cGMP两种。
3.G蛋白耦联受体:
G蛋白通过G蛋白偶联受体(Gprotein-coupledreceptors,GPCRs)与各种下游效应分子,如离子通道、腺苷酸环化酶、PLC联系,调节各种细胞功能。
4.胰高血糖素信号转导:
胰高血糖素受体通过AC-cAMP-PKA通路转导信号
第二十章:
癌基因、抑癌基因与生长因子
癌基因(oncogene):
细胞内控制细胞生长和分化的基因,它的结构异常或表达异常,可以引起细胞癌变。
癌基因活化的机制:
(一)获得启动子与增强子
(二)染色体易位
(三)原癌基因扩增
(四)点突变
抑癌基因:
能抑制细胞过度生长、增殖从而遏制肿瘤形成的基因。
常见的抑癌基因:
第二十一章:
常用分子生物学技术的原理及其应用
寇新荣
探针(probe):
是带有放射性核素的或其他标记的核酸片段,它具有特定的核酸序列,能够与待测核酸片段互补结合,因此可用于检测核酸样品中的特定基因。
DNA印记=SouthernblotRNA印记=Northernblot蛋白质印记=Westernblot
检查:
页数1~4寇新荣5~8马卓9~12邢爱萍13~16寇新荣
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