胶体金法生产工艺规程模板Word文档下载推荐.docx
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组件
100T/盒
25袋/盒(1支/袋)
50袋/盒(1支/袋)
装量
数量
文件名称:
乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂(胶
版本版次:
A0
第2页共23页
体金法)生产工艺规程
文件编号:
TS-733-03
受控状态:
试纸条
25条/筒
4筒
无
试纸卡
1支/袋
25袋
50袋
样品稀释液
2ml
4瓶
1瓶
2瓶
说明书
1份
342储存条件:
2-30C保存。
343.有效期:
24个月。
3.5.生产工艺流程图文件末(23页)。
3.6.生产工艺过程及工艺条件
3.6.1配液
根据以下各配方,按各相关试剂配制作业指导书进行配制
(1)
原料名称
用量
配制环境:
(2)
第3页共23页
362样品稀释液分装
按照《液体分装作业指导书》,根据相应规格的装量要求进行分装,分装量二规格+
附加量。
如下表所示(单位:
ml/瓶):
标小量
附加量
15ml
0ml
3.6.3胶体金制备
烧金溶液A
烧金溶液B
超纯水
制备环境:
金标车间配料间(十万级洁净区)
(1)量取ml超纯水到适当大小的烧瓶中;
(2)量取ml烧金溶液A并加入烧瓶中;
(3)水沸腾后,加入已经平衡的烧金溶液Bml;
(4)水继续沸腾5分钟关闭加热搅拌器,并将烧瓶移至桌面,用铝箔纸盖住瓶口,让胶体金自然冷却。
(5)胶体金的储存:
2〜8C;
有效期6个月。
3.6.4胶体金标记
第4页共23页
364.1根据试样验证结果,量取胶体金,快速搅拌中加入0.2MK2CO液,混匀后,快速搅
拌中加入相应量的乙肝抗原或兔lgG(乙肝抗原和兔IgG分开标记),混合均匀后,反应30分钟。
364.2终止:
充分反应后在搅拌中加入金标记过程终止液(20ul/1ml金溶液);
继续搅拌30分钟直至混匀。
3.6.4.3将胶联溶液离心,9000转离心6分钟,收集沉淀并用金工作液定容至总体积的1/10;
3.6.4.4储存:
2〜8C,有效期6个月。
3.6.5铺金液配制
3.6.5.1用工作液将1/10体积的乙肝病毒表面抗原金标记物沉淀放大10倍;
兔IgG金标记物沉淀按1/3乙肝病毒表面抗原沉淀的量,加至上述乙肝金标工作液中(即兔IgG金标记物沉淀为乙肝的1/3)
365.2按0.2mg/ml的量加入抗RBC到铺金液中;
3.6.6小样试验:
在铺金和划膜之前,应首先将待铺的基因重组抗原-胶体金复合物溶液,
先铺一条玻纤(6mrK310mm上,用配好的质控线液、检测线液划膜一张,与其他组分组合在一起,进行检测,要求:
阴性参考品符合率:
20份阴性参考品符合率(-/-)应为20/20。
灵敏度:
灵敏度参考血清,呈阳性反应。
精密性:
连续重复测定精密性参考品10次,反应结果应均为阳性,且显色度均一。
3.6.7铺金
3.6.7.1按每张玻纤可以铺金36ml计算金标液的体积
3.6.7.2按计算好的体积在每张玻纤上铺金,并用圆形试管刮均匀。
3.6.7.330%湿度以下,37〜40C干燥18〜24小时,如不立即使用,加干燥剂铝箔袋封存。
3.6.7.4储存:
保存过程中严格防潮,以后打开和使用一定要在30%湿度以下。
3.6.7膜包被
按照《划膜机标准操作规程》,以“252”泵速(对应速度2.7ul/cm),将质控线液和检
测线液均匀地划在膜上,质控线划在距膜顶端12.1±
0.1cm处,检测线划在距膜顶端12.5cm
第5页共23页
±
0.1cm处,质控线与检测线相距5mm±
1mm
367.230%湿度以下,37〜40C干燥18〜24小时,如不立即使用,加干燥剂铝箔袋封存。
367.3储存:
3.6.8样品垫的准备
3.6.8.1按每张玻纤可以铺液36ml计算全血样品垫处理液的体积
3.6.8.2按计算好的体积在每张玻纤上铺液,并用圆形试管刮均匀。
3.6.8.330%®
度以下,37〜40C干燥18〜24小时,如不立即使用,加干燥剂铝箔袋封存。
3.6.8.4储存:
3.6.9半成品检测:
以上生产出来的胶体金、胶金垫、包被膜、分装好的样品稀释液均应作为半成品请检,质量管理部QC按照《半成品检验作业指导书》检验合格方可进入下一道工序。
3.6.10组装
3.6.10.1按照《贴膜组装工序作业指导书》的规定,将包被好的NC膜贴在塑料大卡上。
3.6.10.2各组成部分的切割:
各组分用切割机切割成以下大小:
金标垫:
6mmX310mm样品垫:
15mmX310mm吸水垫:
20mr^310mm
不干胶纸:
13mrK310mm
3.6.10.3层压
将上述切割好的材料进行贴膜制成乙型肝炎表面抗体胶体金试纸条,各膜层叠关系如下:
1)
2)
T
线C线
3)
1
F1
5)
第6页共23页
(4)
6)
1)不干胶纸
2)样品垫
3)金结合物垫
4)包被有检测线(T线)和质控线(C线)的硝酸纤维素膜
5)吸水垫
6)塑料衬片
3610.4层压参数
金标垫2片,第一片搭上NC膜2mm,第二片搭第一片3mm;
样品垫15mm,搭上金标垫2mm;
吸水垫20mm,搭上NC膜2mm,不干胶13mm,搭上露出的NC膜2mm。
3.6.11切条
(1)组装环境条件的控制在相对湿度30%以下,并所有组件拆封后暴露于空气中时间不超过2小时。
(2)按照《切条工序作业指导书》使用切条机,将组装好的乙肝病毒表面抗体检测试
剂切割成宽度为2.5mn±
0.1mm试条,切条过程中应于前、后及过程中每30分钟对切条的宽度检查一次。
3.6.12检测卡的装配
按照不同规格的要求,需要进行检测卡装配的试纸条先把切好的试条装配到完好的PVC
卡中,再用压卡机进行压卡,装条时应注意检查条有无划痕污渍,宽度是否符合要求;
PVC
卡外观应清洁,平整,无变形,底面配套性好,压卡应注意调节松紧度,避免将卡压破或变形。
3.6.13内包装
3.6.13.1成品规格为25支/盒、50支/盒的,所对应半成品的内包装:
(1)装卡:
单个卡和无水硅胶干燥剂一起放入铝箔袋中,卡印字方向应朝向铝箔袋开口方向,确保无漏装。
(2)密封。
密封时应检查密封的效果及铝箔袋上的效期印字是否正确,使用封口机进行封口。
3.6.13.2成品规格为100支/盒的,所对应半成品的内包装
第7页共23页
装筒,将无卡试纸以25支/筒的规格装入筒中,放入干燥剂,然后封筒。
3614外包装
(1)不干胶标签批号、生产日期、有效期打印:
以试纸条组装日期为“生产日期”,并
由此推算出“有效期至”,批号按照《批号管理规程》的规定设置。
按照《批号打印机使用、清洁、维护、保养标准操作规程》进行操作打印标签、包装盒上的“三期”。
(2)贴签:
在上述装好检测卡的铝箔袋及装好试纸条的筒上贴上标签。
(3)成品组装:
纸盒内组份:
按包装盒标准折叠方法折好包装盒,根据成品组分名称、规格及数量,分别装入检测卡铝箔袋或试纸筒、样品稀释液、说明书。
包装组组长每盒清点查看,合格后用封口签(合格证)封口。
(4)储存:
2〜30C,有效期24个月。
3.6.15.成品检定:
抽检量为3%,最小抽检量为500人份。
经质量管理部QC检测合格,QA做生产记录审核后开具《成品放行审核单》方可入库。
3.7质量标准
3.7.1.主要原辅料质量标准及依据:
(1)重组乙肝抗原
质量
标准
性状
肉眼观察不含异物、浑浊或摇不散的沉淀或颗粒
蛋白浓度
用福林-酚法,以Sigma公司生产的牛血清白蛋白作对照,蛋白含量以毫克/毫升表示,浓度为0.5-10.0mg/m
l;
第8页共23页
纯度和分子量
用SDS-PAG蛋白电泳法测定,每个泳道加样量10pg,电泳带显示无杂蛋白。
分子量:
效价
ELISA检测,效价应大于1:
10000
功能性试验
以本品制备三批小试样品,与其他合格组分组装后检测:
20份阴性参考品符合率(-/-)应为20/20;
最低检出量:
抗-HBs的最低检出量应不高于10mlU/ml;
批内精密度用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡,结果应全部呈阳性,且显色度均一。
批间精密度:
连续三批的小试样本,分别重复检测精密度参考品5次,结果应全部为阳性,且呈色度均一。
稳定性试验:
置37C放置10天,进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测,应符合上述要求。
贮藏条件
-20C冻存
依据
《抗原质量标准及检验操作规程》
(2)兔IgG抗体
经OD方法检测浓度为mg/mL
纯度
用SDS-PAG蛋白电泳法测定,每个泳道加样量10⑷,电泳带显示无杂蛋白
抗-HBs的最低检出量应不高于10mlU/ml。
;
批内精密度用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡,结果应全部呈阳性,且显色度均一。
连续三批的小试样本,分别重复检测精密度参考品5次,结果应全部为阳性,且呈色度均一。
置37C放置10天,进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测,应符合要求。
且背景干净,质控线2分钟内显出,在10-30ug/ml包被时具有活性标记时具有活性。
《抗体质量标准及检验操作规程》
(3)羊抗兔IgG
经O阪方法检测浓度为mg/mL
第9页共23页
置37C放置10天,进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测,应符合要求。
且背景干净,质控线2分钟内显出,在0.5-2.0mg/ml包被时具有活性标记时具有活性。
(4)兔抗RBC
活性
琼脂免疫双扩试验,测定效价应不低于1:
&
抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml;
血球被结合,背景干净
(6)硝酸纤维素膜:
MilliporeHiflowPlus18002硝酸纤维素膜
外观
膜条平整,无弯曲褶皱,表面无污迹,液体表面流速稳定、迁移均匀。
厚度215吃0吩
毛细迁移速率
每4cm,水的层析时间是135±
30s。
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常温密封干燥储存
《包装材料质量标准及检验操作规程》
(7)玻璃纤维纸
表面平整、无污迹,纤维结构均匀、致密。
厚度
0.5±
).05mm
吸水性
2
绍Omg/cm
3.7.2半成品质量标准:
(1)胶体金
目视胶体金外观,呈紫红色,液面无油状漂浮物,容器底部无黑色颗粒物凝集。
最大吸收峰值
用紫外分光光度计对胶体金溶液进行全波长扫描,应
525〜535nm处有单一吸收峰。
2〜8C冷藏储存
乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂(胶体金法)生产工艺规程
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依据《半成品质量标准及检验操作规程》
(2)胶金垫
胶金垫颜色应为均一的暗红-暗紫色,无蓝变等异常。
胶金垫未涂有胶体金复合物的位置应为玻纤的白色,无异色;
宽度均一,无破损。
与其他组分组装后检测:
20份
阴性参考品符合率(-/-)应为20/20;
抗-HBs的最低检出量应不高于10mlU/ml。
批内精密度用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡,结果应全部呈阳性,且显色度均一。
常温干燥密封保存
《半成品质量标准及检验操作规程》
(3)包被膜
膜表面应洁净,无污染、破损等,如有,需用笔标出。
膜的开始端与末端喷线不好的部位需用铅笔标出。
包被膜干燥后,在C、T线处均没有明显的痕迹。
抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml。
(4)样品稀释液
所装容器与规定一致,液体澄清透明,无絮状物或沉淀。
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常温密封保存
3.7.3成品质量标准:
试剂盒外观整齐,组件齐全,数量准确包装整洁,生产批号、生产日期、有效期打印清晰正确。
金标条材料附着牢固,内容齐全;
试纸条不露边、不露金条、不露吸水纸;
卡上的产品名称等内容印刷正确,字迹清晰。
样品稀释液装量
2ml±
0.2ml
试纸条宽度
试纸条宽度不低于2.5mm
液体移行速率
液体移仃速率不低于10mm/min
阴性参考品符合率
用20份乙型肝炎病毒表面抗体阴性参考品进行检测,结果应全部呈阴性。
最低检出量
抗-HBs的最低检出量应不咼于10mlU/ml。
精密度
用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡,结果应全部呈阳性,且显色度均一。
稳定性
将成品于37C放置10天后,按以上方法检测上述各项,应符合上述规定
2〜30C常温密封保存
《成品质量标准及检验操作规程》
3.8.质量控制
3.8.1.主要质量控制点:
按生产工序和工艺特点规定生产过程中的主要质量控制点,如下表所示:
工序
生产内容
质量控制点
配液
按照配方称量配制
一人称量一人复核
金标垫制
胶体金制备
烧金容器洁净、加液量准确、迅速,应在沸腾时加液
第13页共23页
备
重组乙肝表面抗原-胶体金复合物制备
加液量、标记时间30分钟、终止时间30分钟、离心时应保持平衡、离心转速9000转/分钟、时间10分钟。
复溶液体应澄清,不得有不溶沉淀。
铺金、干燥
铺金应均匀,干燥时间18〜24小时、温度37〜40C、湿度30%^下,储存环境:
常温,湿度30%A下。
膜条制备
划膜、干燥
质控线划在距膜顶端12.1±
0.1cm处,检测线划在距膜
顶端12.5cm±
0.1cm处,质控线与检测线相距5mn±
1mm,划膜机泵速为“252”,干燥时间18〜24小时、温度37〜40C、湿度30%^下,储存环境:
常温,湿度3
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