第二节 血液生化检验Word文档格式.docx
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(六)临床诊断价值
1.血糖升高
(1)生理性或一时性升高如单胃动物饲后2~4h、精神紧张、兴奋、对动物的强制保定、疼痛以及注射可的松类药物等。
(2)病理性升高见于糖尿病(犬、猫)、胰腺炎、酸中毒、癫痫、抽搐、脑内损伤,肾上腺皮质功能亢进、甲状腺功能亢进及濒死期等。
2.血糖降低
见于胰岛素分泌增多、肾上腺皮质功能不全、甲状腺功能减退、坏死性肝炎、肝炎后期、消化吸收不良性的胃肠炎、饥饿、衰竭症、慢性贫血、牛酮血症、母羊妊娠病、仔猪低血糖症、功能性低血糖症及毒物中毒等。
二、血清钾测定(四苯硼钠比浊法)
血清中钾离子与四苯硼钠作用,形成不溶于水的四苯硼钾,它的浊度与钾离子的浓度成正比,根据浊度可测得血清钾的含量。
(二)试剂
缓冲液;
1%四苯硼钠溶液;
钾标准贮存液(1mL=2mg钾);
钾标准应用液(1mL=0.02mg钾)。
血清0.2mL加入重蒸馏水1.4mL,10%钨酸钠溶液0.2mL及2/3N硫酸溶液0.2mL,混匀。
离心沉淀,取上清液按表2.12操作。
表2.12血清钾测定操作步骤(单位:
步骤标准管测定管空白管
无蛋白上清液—1.0—
钾应用标准液(1mL=0.02mg钾)1.0——
重蒸馏水(mL)——1.0
1%四苯硼钠(mL)4.04.04.0
混匀,5min后用520nm滤光板进行光电比色,以空白管调零,分别读取各管读数。
(四)计算
0.02×
100/0.1=测定管光密度/标准管光密度×
20=钾(mg/100mL)血清钾(mmol/L)=钾(mg/100mL)×
10/39.1
钾(mg/100mL)=钾(mmol/L)×
3.91
(五)正常值见表2.13。
表2.13健康动物血清钾正常值(mg/100mL)
乳牛19.7116.0~27.1西安市兽医院
水牛20.0213.28~24.74扬州大学农学院
绵羊21.0715.24~21.11Pugh
猪18.8817.20~26.19Bertho等
马12.91~25.11广州部队军马防治所
犬17.08~22.09Robinson
猫15.64~17.59Albritton
(六)临床诊断价值
动物体内绝大部分钾存在于细胞内,是维持细胞活动的主要阳离子。
细胞外液中一定浓度的钾盐含量,是维持肌肉神经的功能所必需。
钾盐由肠道吸收,约90%由尿液排出体外。
某些疾病可因钾摄取量过少或排出量过多,或排泄障碍使钾盐潴积,或在体内分布失常而形成钾增高或减低。
1.血清钾增高
主要见于肾上腺皮质功能减退;
临床上补钾超量;
肾脏疾病(排钾能力下降);
组织遭受损害;
酸中毒;
休克;
循环障碍;
输血不当(引起血管内溶血,红细胞内的钾进入血液);
大量输注高渗盐水或甘露醇;
脱水。
2.血清钾降低
主要见于给予利尿剂(尿钾排出增多);
长期使用较大剂量的肾上腺皮质激素,同时未能及时补钾;
大量反复地输入不含钾盐的生理盐水等体液;
代谢性酸中毒;
严重腹泻或呕吐;
肾上腺皮质机能亢进;
脱水之后,大量饮水。
三、血清钠测定(醋酸铀镁试剂法)
血清钠离子与乙酸铀镁试剂作用,生成乙酸铀镁钠沉淀,以亚铁氰化钾与试剂中剩余的乙酸铀作用,生成棕红色的亚铁氰化铀。
血清中的钠含量愈高,则剩余的乙酸铀愈少,显色愈淡,反之则显色愈深。
由剩余的乙酸铀量,可以间接计算出血清钠的含量。
醋酸铀镁试剂;
1%冰醋酸溶液;
10%亚铁氰化钾溶液;
钠贮存标准液;
钠应用淡标准液;
钠应用浓标准液。
(三)方法按表2.14操作。
表2.14血清钠测定操作步骤(单位:
血清—0.1—
钠应用淡标准液0.1——
钠应用浓标准液——0.1
醋酸铀镁试剂5.05.05.0
充分混匀,放冰箱内10min,2500r/min离心10min
取上清液,分别注入另外3只试管0.10.10.1
1%冰醋酸溶液5.05.05.0
10%亚铁氰化钾溶液0.20.20.2
混匀,5~30min内,以空白管调零,用520nm滤光板或绿色滤光板比色,读取各管光密度。
250-(测定管光密度/标准管光密度×
100)=mmol/L
mmol/L×
2.3=钠mg/100mL
(五)正常值见表2.15。
表2.15各种动物血清钠的正常数值(mg/100mL)
乳牛350.98338.1~373.98西安市兽医院
水牛262.79±
58.65扬州大学农学院
牛319.7310.5~328.9Payne等
绵羊319.7~349.6Pugh
猪328.69±
58.39扬州大学农学院
马229.23242.53~355.93中国人民解放军军需大学
犬335.8319.7~351.9Lane等
猫351.9345~358.8Spector
1.血清钠增高
主要见于输入过量的高渗盐水;
食盐中毒(常见于猪);
严重脱水;
长期使用肾上腺皮质激素药物;
某些慢性疾病(如充血性心力衰竭、肝硬化及肾病等,常同时伴有水肿)。
2.血清钠降低
主要见于持续性腹泻(胃液丢失,失钠大于失水);
肾脏疾病;
大出汗;
胸、腹腔大量产生渗出液(反复穿刺放液,钠盐从渗出液中大量丢失);
使用利尿剂;
水中毒(见于犊牛)。
四、血清氯化物测定(硝酸汞法)
以标准硝酸汞溶液滴定血清中的氯化物,用二苯卡巴腙作指示剂,硝酸汞与氯化物作用生成溶解而不离解的氯化汞。
当滴定到达终点时,过量硝酸汞中的汞离子与二苯卡巴腙作用,生成紫红色的络合物。
根据硝酸汞的用量,可求得样本中氯化物的含量。
1mol/L氯化钠当量溶液;
氯化钠应用标准液(10mmol/L);
0.1%二苯卡巴腙乙醇溶液;
0.05mol/L硝酸溶液;
硝酸汞溶液。
(三)方法
1.取小试管1只,准确加入血清0.1mL,加重蒸馏水1mL,混匀,再加0.1%二苯卡巴腙溶液1滴,此时混合液呈“肉红色”。
加0.05mol/L硝酸溶液1~2滴,颜色随即消退。
用装有硝酸汞溶液的微量滴定管进行滴定,待液体呈现紫红色时即为终点,记录用量。
2.另取小试管1只,准确加入氯化钠应用标准液1mL,也用硝酸汞溶液滴定,待液体呈现与测定管相同的或近似的紫红色即为终点,记录用量。
滴定测定管消耗的硝酸汞溶液(mL)/滴定氯化钠标准管消耗的硝酸汞溶液(mL)×
0.01×
1000/0.1=血清氯化钠(mmol/L)
(五)正常值见表2.16。
表2.16各种动物血清氯化物正常值(mg/100mL)
黄牛595.6487.64~704.28甘肃农业大学
绵羊555.75~602.55Pugh
猪602.55585.0~614.25Spector
马622.80580.50~665.22中国人民解放军军需大学
犬620.1579.15~643.5Spector
猫702.0684.45~719.55Spector
鸡171.34106.42~236.26甘肃农业大学
1.血清氯化物增高
主要见于代谢性酸中毒;
猪的食盐中毒;
咽炎、食道梗塞(饮水障碍,血液浓稠,氯化物相对性升高);
循环障碍(肾血流量减少,氯化物自尿中排出量下降)。
2.血清氯化物降低
主要见于严重的腹泻;
长期饥饿、拒食;
胃肠道大手术之后(胃肠液大量损失);
肾上腺皮质机能减退;
肝硬变(化)。
五、血清钙测定
(一)高锰酸钾滴定法
1.原理
血清加草酸铵使钙沉淀为草酸钙,以氨液洗去多余的草酸铵,再加硫酸使草酸游离,用标准高锰酸钾液滴定,计算钙的含量。
2.试剂
4%草酸铵溶液;
2%氢氧化铵溶液;
1mol/L硫酸溶液;
0.01mol/L草酸钠溶液;
0.01mol/L高锰酸钾溶液(1mL=0.2mg钙)。
3.方法
(1)取血清1mL置于离心管,加蒸馏水3.0mL、4%草酸铵液1mL,混匀,静置30min,以3000r/min的速度离心10min。
倾去上清液,将离心管倒置于滤纸上吸去管内残液。
(2)加2%氢氧化铵溶液4mL于离心管内。
以玻璃棒充分搅匀后,再离心沉淀5~10min,倾去上清液。
用同样方法再洗涤一次,倒置离心管于滤纸上5min。
(3)加当量硫酸溶液2mL,使管内沉淀物完全溶解。
置于沸水中,使管内温度维持在75℃左右。
(4)以1mL刻度吸管(最好用微量滴定管),吸取0.01mol/L高锰酸钾溶液进行滴定,直至呈现微红色为止,记录滴去的0.01mol/L高锰酸钾溶液毫升数。
4.计算
钙(mg/100mL)=测定管滴定用去毫升数×
校正系数×
0.2×
100/1
(二)EDTA滴定法
血清钙离子在碱性溶液中与钙红指示剂(calcon)结合成可溶性的络合物,使溶液显红色。
乙二胺四乙酸二钠对钙离子的亲和力大,能与该络合物中的钙离子结合,使指示剂重新游离在碱性溶液中显蓝色。
故以EDTA滴定时,溶液由红色变蓝色时,即表示终点的到达。
以同样方法滴定已知钙含量的标准液,从而计算出血清钙的含量。
其反应式可简写为:
EDTA=钠+Ca2+→EDTA钙+2Na+→2Na+
2.试剂
(1)钙标准液(1mL=0.1mg钙)取碳酸钙少量,置蒸发皿中,于110~120℃干燥2~4h,移入硫酸干燥器中冷却。
精确称取干燥碳酸钙250mg于烧杯中,加蒸馏水40mL及1mol/L盐酸5mL溶解,移入1000mL容量瓶,以蒸馏水洗烧杯数次,洗液一并倾入容量瓶,加蒸馏水稀释至1000mL。
(2)EDTA溶液乙二胺四乙酸二钠150.0mg,1mol/L氢氧化钠溶液2.0mL,蒸馏水加至1000mL。
(3)钙红指示剂称取钙红(2-萘酚-4-磺酸-1-偶氮-2-羟基-3-萘甲酸)0.1g,溶于甲醇20mL中。
(4)0.2mol/L氢氧化钠液。
3.方法按表2.17操作。
表2.17EDTA滴定血清钙操作步骤*
血清(mL)—0.2—
钙标准液(mL)0.2——
蒸馏水(mL)——0.2
0.2mol/L氢氧化钠液(mL)1.01.01.0
注:
*分别加钙红指示剂1滴,立即用EDTA溶液滴定,至溶液呈浅蓝色为止,记录各管所消耗的EDTA的用量。
4.计算
钙(mg/100mL)=(测定管用量-空白管用量)/(标准管用量-空白管用量)×
100/0.2
(三)正常值见表2.18。
表2.18各种动物血清钙正常值(mg/100mL)
动物平均值变动范围测定方法资料来源
牛(公)11.6111.42~11.85EDTA法西南民族学院牧医系
犊11.4511.14~11.71EDTA法西南民族学院牧医系
乳牛11.579.71~12.14EDTA法西南民族学院牧医系
牦牛(泌乳)8.917.30~11.30EDTA法西南民族学院牧医系
牦毛(母,育成)9.037.70~10.50EDTA法西南民族学院牧医系
牦牛(犊)9.588.10~11.80EDTA法西南民族学院牧医系
绵羊12.16±
0.28Hackett等
山羊10.30±
0.70Murty等
猪(母,妊)10.11±
1.08Simesen
小猪(断奶)10.478.33~12.61EDTA法马“急性肠炎”研究组
仔猪(哺乳)10.848.36~13.32EDTA法马“急性肠炎”研究组
马12.0911.11~13.07高锰酸钾法中国人民解放军军需大学
犬10.16±
2.04Eichelberger等
猫8.22±
0.97Bloom
(四)临床诊断价值
1.血清钙增高
少见于原发性甲状腺机能亢进;
假性甲状旁腺机能亢进(见于淋巴肉瘤);
维生素D中毒;
骨内肿瘤转移;
某些慢性疾病(如慢性肺气肿、慢性心脏病等)。
2.血清钙降低
兽医临床比较多见于甲状旁腺机能降低;
骨软症;
牛、羊青草搐搦症;
佝偻病;
马纤维性骨营养不良。
六、血清无机磷测定(磷钼酸法)
以三氯醋酸沉淀血清中蛋白质,血清无机磷仍保留在酸性滤液中。
加钼酸试剂于滤液,则与滤液中的磷结合成磷钼酸。
再以氯化亚锡把它还原成蓝色的化合物钼蓝。
与同样处理的标准液比色,求得无机磷的含量。
10%三氯醋酸溶液;
磷酸盐贮存标准液(1mL=0.1mg磷);
磷酸盐应用标准液(1mL=0.01mg磷);
钼硫酸试剂;
氯化亚锡贮存液;
氯化亚锡应用液。
采血后尽快分离血清,取血清1mL,加10%三氯醋酸4mL,混匀。
静置1~2min后,过滤。
每2mL滤液中含血清0.4mL。
按表2.19操作。
表2.19血清无机磷测定操作步骤
无蛋白血滤液(mL)2.0——
磷酸盐应用标准液(mL)—2.0—
蒸馏水(mL)5.05.07.0
钼硫酸试剂(mL)2.02.02.0
混匀后立即加入氯化亚锡应用液(mL)1.01.01.0
立即混匀,静置1min,用640~700nm滤光片,以空白管调零,分别测定各管之光密度。
100/0.4=测定管光密度/标准管光密度×
5=磷(mg/100mL)
(五)正常值见表2.20。
表2.20各种动物血清无机磷正常值(mg/100mL)
黄牛6.96±
3.37甘肃农业大学
乳牛(公)6.504.23~9.0甘肃农业大学
乳牛(母)5.963.33~10.5西南民族学院
水牛5.38±
1.27西南民族学院
牦牛6.364.8~8.0扬州大学农学院
绵羊3.78±
0.78西南民族学
猪6.30±
1.43内蒙古农牧大学
仔猪(哺乳)7.915.21~10.64扬州大学农学院
马4.452.85~6.05中国人民解放军军需大学
犬3.12.2~4.0
猫6.40±
1.17
1.血清无机磷增高
主要见于正在发育生长的健康幼龄动物;
牛骨质疏松症;
过量补给维生素D;
肾功能不全或衰竭;
骨折愈合期;
纤维性骨营养不良;
肠道阻塞及胃肠道疾病所致的酸中毒;
甲状旁腺机能减退。
2.血清无机磷降低
主要见于饲料低磷性骨软症;
饲料低磷性佝偻病;
肾小管变性的病变;
注射大量葡萄糖之后;
原发性甲状旁腺机能亢进。
七、血清镁测定(钛黄比色法)
血清中的镁在氢氧化钠介质中形成氢氧化镁胶体粒子,它与钛黄的结合物呈现橘红色。
显色强度与血清中镁的浓度成正比。
加入聚乙烯醇使颜色处于稳定状态。
镁贮存标准液(20mmol/L);
镁应用标准液(0.2mmol/L);
0.1%聚乙烯醇溶液;
0.5%钛黄(titanyellow)溶液;
0.02%钛黄溶液;
7.5%氢氧化钠溶液。
(三)方法操作见表2.21。
表2.21血清镁测定操作步骤(mL)
步骤低标准管标准管测定管空白管
镁应用标准液1.02.0——
血清——0.2—
重蒸馏水2.01.02.83.0
充分混匀
0.1%聚乙烯醇溶液0.50.50.50.5
0.02%钛黄溶液0.50.50.50.5
7.5%氢氧化钠溶液1.01.01.01.0
充分混匀,以空白管调零,5~30min内用540nm滤光板比色,读取各管光密度。
低标准管:
镁(mmol/L)=测定管光密度/标准管光密度×
1.0/0.2
高标准管:
2.0/0.2
镁(mg/100mL)=镁(mmol)×
1.2
(五)正常值见表2.22。
表2.22各种动物血清镁正常值(mg/100mL)
牛2.311.8~3.2Hunt等
绵羊2.621.9~3.9Hunt等
山羊1.69±
0.51Louw等
猪1.901.55~2.16Birkeland
马2.621.69~3.55中国人民解放军军需大学
犬2.281.68~2.88Bloom
猫2.64Bloom
1.血清镁增高
主要见于乳牛产后瘫痪(可达4~5mg/100mL);
急性或慢性肾功能衰竭;
治疗低血镁症时,镁制剂用量过大或静脉注射速度过快。
2.血清镁降低
主要见于牛、羊青草搐搦(当血清镁降至1~2mg/100mL时,病畜常不显临床症状;
而血清镁降至1mg/100mL以下后,病畜多呈现搐搦症状);
犊牛低血镁搐搦;
长期使用肾上腺皮质激素类药物。
八、血清碱性磷酸酶测定(金氏法)
碱性磷酸酶分解磷酸苯二钠产生游离酚和磷酸,酚在碱性溶液中与4-氨基安替匹林作用,经铁氰化钾氧化生成红色醌的衍生物,根据红色深浅测出酶活力的高低。
1.碳酸盐缓冲液(pH10):
称取无水碳酸钠15.8克,碳酸氢钠8.4克,结晶硫酸镁1.24克。
先用适量蒸馏水溶解,最后加水到1000ml。
2.3%4-氨基安替匹林溶液:
称取4-氨基安替匹林3.0克,加蒸馏水至100ml。
3.0.005mol/L基质缓冲液:
磷酸苯二钠(无水)0.218克,3%4-氨基安替匹林溶液10ml,碳酸盐缓冲液10ml,加蒸馏水到200ml,置冰箱内保存1周。
4.0.5%高铁氰化钾溶液:
称取高铁氰化钾0.5克,加蒸馏水到100ml。
5.酚标准液(1ml=0.1mg酚):
称取酚10mg,加蒸馏水至100ml。
(三)操作按表2.23进行操作。
表2.23AKP测定操作步骤(单位:
ml)
空白管标准管测定管
血清000.05
酚标准液00.050
基质缓冲液2.02.02.0
立即混匀,置37℃水浴箱中,保温7.5分钟,自水浴箱中取出,各管中立即分别加入0.5%高铁氰化钾溶液2.0ml,充分摇匀,待5min后用500~510nm波长滤色板比色,以空白管调零,读取各管光密度。
0.005×
100/0.05
=测定管光密度/标准管光密度×
10=碱性磷酸酶(金氏单位)%
单位定义:
指100ml血清中碱性磷酸酶的活力能产生1mg酚者为1个金氏单位。
(五)正常值
各种动物血清碱性磷酸酶的正常值见表2.24
表2.24各种动物血清碱性磷酸酶正常值(金氏单位%)
动物种类平均值范围资料来源
马8.793.83~13.75中国人民解放军兽医大学
水牛10.290.83~19.57江苏农学院
猪8.237.91~8.51江苏农学院
来杭鸡41.58江苏农学院
血液中碱性磷酸酶主要来自骨骼、牙齿和肝脏(经胆道排出),因此正常情况下,幼畜血清中含量较高,随年龄的增长逐次下降。
母畜在妊娠期也有轻度增高。
病理性的升高:
肝脏阻塞性黄疸,肝实质性损害时仅见轻度升高。
骨骼疾病,如纤维素性骨炎、骨瘤、佝偻病、骨软症、骨折等。
病理性活性下降:
贫血,恶病质。
此外,出现低镁血症抽搐时也可见降低。
九、血浆二氧化碳结合力的测定(微量滴定法)
(一)原理
血浆中加入一定量的盐酸,则血浆中的碳酸氢钠被中和,放出二氧化碳,再用氢氧化钠滴定剩余的盐酸,以求出二氧化碳的含量。
1.0.05%酚红氯化钠溶液:
称取酚红0.5克于烧杯中,加0.1mol/L氢氧化钠14.1ml及蒸馏水约300ml,加热煮沸溶解。
冷却后加氯化钠8.5克,并加蒸馏水至1000ml,过滤,贮棕色瓶中备用,本试剂应呈微黄红色。
2.0.01mol/L盐酸氯化钠溶液:
氯化钠8.5克,1mol/L盐酸10ml,蒸馏水加至1000ml,此液应予标定。
3.0.01mol/L氢氧化钠氯化钠溶液:
氯化钠8.5克,1mol/L氢氧化钠10ml,蒸馏水加至1000ml,此液应予标定。
4.生理盐水(中性)液
5.乙醚
(三)操作
1.1.于草酸钾抗凝管中加中性液体石蜡0.5ml,采取静脉血2~3ml,注入上述试
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