实验用培养基适用性检查标准操作规程Word文档格式.docx
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SOP-QC-562-02实验用培养基适用性检查标准操作规程
复审日期
ReviewDate
分发部门:
Distributedto
QA,QC
分发号
DistributionNo.:
目Purpose
为保障微生物检验准确性及相关工作特制定本规定。
范围Scope
本程序适用于微生物限度测定培养基适用性检查及相关工作。
职责Responsibility
分析员:
严格按照本操作规程执行。
及时完成各类相关记录。
在主管指导下进行任何可能OOS及偏差调查。
主管:
监督本操作规程执行。
对检验员进行必要培训。
指导任何可能OOS和偏差调查。
内容procedure
1检验员应根据培养基配制程序或培养基各自说明书配制培养基。
2试验用菌种及培养基
2.1菌种:
2.1.1培养基灵敏度测试所用菌株传代次数不得超过5代,从国家药检所或菌种保藏中心购买。
2.1.2枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)[ATCC6633]
2.1.3大肠埃希菌(Escherichiacoli)[ATCC8739]
2.1.4金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)[ATCC6538]
2.1.5白色念珠菌(Candidaalbicans)[ATCC10231]
2.1.6黑曲霉(Aspergillusniger)[ATCC16404]
2.1.7伤寒沙门菌(Salmonella)[ATCC14028]
2.1.8铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)[ATCC9027]
2.2培养基
2.2.1按照培养基说明书进行配制灭菌。
2.2.2大豆酪蛋白消化肉汤Soybean-CaseinDigestBroth
2.2.3大豆酪蛋白消化琼脂Soybean-CaseinDigestAgar
2.2.4沙氏葡萄糖琼脂SabouraudDextroseAgar
2.2.5肠道菌增菌肉汤EnterobacteriaEnrichmentBrothMossel
2.2.6紫红色胆汁葡萄糖琼脂VioletRedBileGlucoseAgar
2.2.7麦康凯肉汤MacConkeyBroth
2.2.8麦康凯琼脂MacConkeyAgar
2.2.9RV沙门氏菌富集肉汤RappaportVassiliadisSalmonellaEnrichmentBroth
2.2.10木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂XyloseLysineDeoxycholateAgar
2.2.11甘露醇氯化钠琼脂培养基MannitolSaltAgar
2.3微生物计数培养基适用性检查
2.3.1微生物计数用成品培养基、由脱水培养基或按处方配制培养基均应进行培养基适用性检查。
2.3.2菌悬液制备
名称
金黄色葡萄球菌ATCC6538
铜绿假单胞菌ATCC9027
菌株制备
大豆酪蛋白消化肉汤或大豆酪蛋白消化琼脂
30℃-35℃,18-24小时
枯草芽孢杆菌ATCC6633
白色念珠菌ATCC10231
沙氏葡萄糖琼脂
20℃-25℃,2-3天
黑曲霉ATCC16404
沙氏葡萄糖琼脂20℃-25℃,5-7天或者直到形成良好孢子状态
2.3.3上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.2磷酸盐缓冲液制成每1ml含菌数不大于100cfu菌悬液,制备黑曲霉孢子悬浮液时,添加3-5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯800.9%无菌氯化钠溶液或pH7.2磷酸盐缓冲液,将孢子洗脱。
然后,用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内,用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯800.9%菌氯化钠溶液或pH7.2磷酸盐缓冲液制成每1ml含孢子数不大于100cfu孢子悬液。
菌悬液在室温下放置应在2小时内使用,若保存在2~8℃可在24小时内使用。
黑曲霉孢子悬液可保存在2-8℃,在验证过贮存期内使用。
2.4大豆酪蛋白消化肉汤促生长试验
2.4.1取以上前3种菌悬液各0.1ml(不大于100cfu),分别注入灭过菌含有10ml大豆酪蛋白消化肉汤试管中,于30℃-35℃培养不超过3天。
同时用相应上一批通过促生长试验培养基替代被检培养基进行上述试验。
培养结束后进行观察,如果肉眼能清晰看到微生物生长和上一批通过促生长试验培养基生长情形基本一致,则判定此培养基通过促生长试验。
反之则判定此培养基不符合规定,未通过促生长试验。
2.5大豆酪蛋白消化琼脂和沙氏葡萄糖琼脂促生长试验
2.5.1取以上5种菌悬液各1ml(不大于于100cfu),分别注入无菌平皿中,立即倾注大豆酪蛋白消化琼脂,每株试验菌平行制备2个平皿,混匀、凝固,置30℃-35℃培养不超过3天,计数,后2种菌悬液不超过5天,计数。
再取后2种菌悬液各少于100cfu,分别注入无菌平皿中,立即倾注沙氏葡萄糖琼脂,每株试验菌平行制备2个平皿,混匀、凝固,置20℃-25℃培养不超过5天,计数。
进行促生长试验培养基平皿上,微生物生长情况必须和已通过促生长试验培养基平皿上微生物生长情况一致或者更好,同时将待测定培养基上菌落数和已通过促生长试验培养基上菌落数对比,两者之间比值应处于70%-200%之间,则判定此培养基通过促生长试验;
反之则判定该培养基不符合规定,未通过促生长试验。
2.6控制菌测试所用培养基适用性检查
2.6.1控制菌检查用成品培养基、由脱水培养基或按处方配制培养基均应进行培养基适用性检查。
2.6.2菌悬液制备
序号
试验菌种
菌株培养
1
大豆酪蛋白消化肉汤或大豆酪蛋白消化琼脂30℃-35℃,18-24小时
2
铜绿假单胞菌ATCC9027
3
枯草芽孢杆菌ATCC6633
4
大肠埃希菌ATCC8739
5
鼠伤寒沙门菌ATCC14028
2.6.3上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.2磷酸盐缓冲液制成适宜浓度菌悬液。
2.6.4控制菌检查用培养基适用性检查项目包括培养基促生长能力、抑制能力及指示能力检查。
各培养基检查测试项目及所用菌株见下表
控制菌检查
培养基
特性
试验菌株
胆汁耐受革兰氏阴性菌检测
肠道菌增菌肉汤培养基
促生长能力
大肠埃希菌
铜绿假单胞菌
抑制能力
金黄色葡萄球菌
紫红色胆汁葡萄糖琼脂
促生长能力+指示能力
大肠埃希菌
大肠杆菌检测
麦康凯肉汤
麦康凯琼脂培养基
沙门氏菌检测
RV沙门氏菌富集肉汤
鼠伤寒沙门菌
木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂培养基
铜绿假单胞菌检测
溴化十六烷三甲基铵琼脂
金黄色葡萄球菌检测
甘露醇氯化钠琼脂培养基
2.7液体培养基促生长能力检查
取试验菌各0.1ml(含菌数不大于100cfu)(见上表)于被检培养基和上一批检验并通过培养基中,在相应控制菌检查规定培养温度及最短培养时间下培养。
两者比较,被检培养基和上一批检验并通过培养基比较,微生物生长良好并且相当。
2.8固体培养基促生长能力检查
取试验菌各0.1ml(含菌数不大于100cfu)(见上表)分别涂布于被检培养基和上一批检验并通过培养基中,在相应控制菌检查规定培养温度及最短培养时间下培养。
2.9液体培养基和固体培养基抑制能力检查
取试验菌各0.1ml(含菌数不小于100cfu)(见上表)于被检培养基中,在相应控制菌检查规定培养温度及最长时间下培养,试验菌应不得生长。
2.10培养基指示能力检查
取试验菌各0.1ml(含菌数不大于100cfu)(见上表)分别涂布于被检培养基和上一批检验并通过培养基中,在相应控制菌检查规定培养温度及时间范围内培养。
被检培养基中生长菌落在外观和指示反应上和从此前已检测并批准培养基批次所获得菌落是相当。
3参考文件
CurrentUSP、BP、EP
附件及相关文件Attachmentandrelateddocuments
R01微生物计数固体培养基适用性检查记录
R02微生物计数液体培养基适用性检查记录
R03微生物控制菌培养基适用性检查记录
历史History
修订号
生效日期
修订内容
00
1.培养基促生长、抑制能力等规定了试验菌取样量。
附件编号AttachmentNo.:
GrowthpromotiontestofsolidmediaforMicrobialenumerationtest
培养基名称
厂家/批号
配制后批号
有效期至
检验日期
培养温度
培养箱编号
对照批号
检验员
1操作步骤
1.1使用0.9%无菌氯化钠溶液或磷酸盐缓冲液制备测试菌悬液,制备黑曲霉孢子悬浮液时,可以添加0.05%聚山梨脂80到缓冲液中。
测试菌悬液应在两小时内使用,或者在2-8℃条件下24小时内使用。
1.2取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉5种菌悬液各少于100cfu,分别注入无菌平皿中,立即倾注大豆酪蛋白消化琼脂,每株试验菌平行制备2个平皿,混匀、凝固,置30℃-35℃培养不超过3天,计数;
后2种菌悬液不超过5天,计数。
取铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌2种菌悬液各少于100cfu,分别注入无菌平皿中,立即倾注R2A,每株试验菌平行制备2个平皿,混匀、凝固,置30℃-35℃培养不超过3天。
同时用相应上一批通过促生长测试培养基替代被检培养基进行上述试验。
1.3进行促生长试验培养基平皿上,微生物生长情况必须和已通过促生长测试培养基平皿上微生物生长情况一致或者更好,同时将待测定培养基上菌落数和已通过促生长测试培养基上菌落数对比,两者之间比值应处于70%-200%之间,则判定此培养基通过促生长测试;
反之则判定该培养基不符合规定,未通过促生长测试。
2记录:
菌种
菌液批号
开始培养时间/温度
结束培养时间/温度
测试培养基菌落数
对照培养基菌落数
对比生长情况(基本一致或更好)
两者比值(70%-200%之间)
观察员
结果判定
平皿1
平皿2
平均
R02
微生物计数液体培养基适用性检查记录
GrowthpromotiontestofliquidmediaforMicrobialenumerationtest
厂家
批号
1.1使用0.9%无菌氯化钠溶液或PH7.2磷酸盐缓冲液制备测试菌悬液。
1.2取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌3种菌悬液各少于100cfu,分别注入灭过菌含有10ml大豆酪蛋白消化肉汤试管中,于30℃-35℃培养不超过3天。
培养结束后进行观察。
1.3如果肉眼能清晰看到微生物生长和上一批通过灵敏度测试培养基生长情形相同话,则判定此培养基通过促生长测试。
反之则判定此培养基不符合规定,未通过促生长测试。
开始培养时间/温度___________________结束培养时间/温度____________________
菌液
批号
测试培养基
生长情况
对照培养基
□符合□不符合
R03微生物控制菌培养基适用性检查记录
GrowthpromotiontestofmediaforSpecifiedMicroorganismstests
1.1使用0.9%无菌氯化钠溶液或PH7.2磷酸盐缓冲液制备菌悬液,菌悬液在室温下放置应在2小时内使用,若保存在2~8℃可在24小时内使用。
1.2液体培养基促生长能力检查:
分别接种不大于100cfu试验菌于被检培养基和上一批检验并通过培养基中,在相应控制菌检查规定培养温度及最短培养时间下培养。
两者比较,被检培养基和上一批检验并通过适用性检查培养基比较,微生物生长良好并且相当。
1.3固体培养基促生长能力检查:
取试验菌各0.1ml(含菌数不大于100cfu)分别涂布于被检培养基和上一批检验并通过培养基中,在相应控制菌检查规定培养温度及最短培养时间下培养。
两者比较,被检培养基和上一批检验并通过适用性检查培养基比较,被检培养基和对照培养基上生长菌落大小、形态特征应一致。
1.4液体培养基和固体培养基抑制能力检查:
接种不少于100cfu试验菌于被检培养基中,在相应控制菌检查规定培养温度及最长时间下培养,试验菌应不得生长。
1.5培养基指示能力检查:
取试验菌各0.1ml(含菌数不大于100cfu)分别涂布于被检培养基和上一批检验并通过适用性检查培养基中,在相应控制菌检查规定培养温度及时间范围内培养。
被检培养基中生长菌落大小、形态特征、指示剂反应上和对照培养基一致。
2记录
检查项目
开始培养时间
结束培养时间
生长情况描述
□促生长能力
□指示能力
□抑制能力
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- 关 键 词:
- 实验 培养基 适用性 检查 标准 操作规程