疟原虫镜检技术培训手册-1.doc
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目录
第一章疟原虫生活史
一、概述
二、人体内发育
三、蚊体内的发育
第二章疟原虫镜下形态
一、薄血膜中疟原虫形态
二、厚血膜中疟原虫形态
第三章显微镜使用及维护
一、显微镜的构造
二、显微镜使用
三、使用注意事项
四、显微镜的维护保养
第四章血片制作与染色
一、血片制作
二、血膜的染色
第五章疟原虫镜检技术
一、血液
二、血液中各种正常细胞形态
三、薄血膜镜检
四、厚血膜镜检
五、杂质与疟原虫的鉴别
六、疟原虫计数
附录:
疟原虫图谱
39
第一章疟原虫生活史
一、概述
疟原虫是疟疾的病原体。
疟原虫为单细胞真核生物,属原生动物亚界顶端复合物门、孢子纲、真球虫目、疟原虫科、疟原虫属。
人体疟原虫有4种:
间日疟原虫(Plasmodiumvivax)、恶性疟原虫(P.falciparum)、三日疟原虫(P.malariae)和卵形疟原虫(P.ovale),依次引起间日疟、恶性疟、三日疟和卵形疟。
在我国间日疟较常见,恶性疟次之,但对人体危害较间日疟严重,三日疟偶尔发现,卵形疟已无病例报告。
4种人体疟原虫的生物学特征见表1-1。
疟原虫的发育和繁殖,必须通过脊椎动物与昆虫媒介两个宿主,人体疟原虫的宿主是人和按蚊。
疟原虫在人体分别寄生于肝实质细胞和血液中的红细胞内,在蚊体内则寄生于蚊胃,最后积聚于唾腺。
4种人体疟原虫的生活史基本相同,包括在人体内的红细胞外期和红细胞内期以及在蚊体内的配子生殖和孢子增殖两个阶段。
二、人体内发育
疟原虫在人体内的发育分成肝细胞内的发育和红细胞内的发育两个阶段。
(一)红细胞外期
按蚊吸人血时,按蚊唾腺中的子孢子随唾液进入人体的末梢血液中,在30分钟内,随血流进入肝脏,在肝实质细胞内发育,进行裂体增殖,此时期称红细胞外期(简称红外期)或肝细胞期(简称肝期),此时期的疟原虫称肝期裂殖体。
成熟肝期裂殖体直径为45~60mm,内含数以万计的肝期裂殖子。
肝期裂殖体成熟致使肝细胞破裂,肝期裂殖子释入血液。
不同种疟原虫的此期所需时间不同,从6~12天不等。
间日疟原虫的红外期裂体增殖较为复杂。
目前认为间日疟原虫的子孢子在遗传学上具有两种不同的类型,即速发型子孢子和迟发型子孢子。
速发型子孢子侵入肝细胞后,遂开始红外期裂体增殖,释放出肝期裂殖子侵入红细胞,经裂体增殖引起临床发作。
迟发型子孢子侵入肝细胞后暂不继续发育,处于休眠状态(休眠体),经过一段休眠期后,再发育成为成熟的红外期裂殖体,释放出肝期裂殖子侵入红细胞引起复发。
恶性疟原虫和三日疟原虫无迟发型子孢子,因而恶性疟和三日疟也无复发现象
(二)红细胞内期
红外期裂殖子从肝细胞释放出来进入血液后,一部分被吞噬细胞消灭,一部分在数分钟后侵入红细胞并开始发育,进行裂体增殖,这个时期称为红细胞内期(简称红内期)。
裂殖子进入红细胞后,其细胞质内出现一个较大的空泡,最初为圆形,细胞质少,围绕着空泡,细胞核在虫体的一侧,颇似戒指的宝石,发育成早期滋养体(亦称环状体)。
以后逐渐发育,虫体和细胞核都渐渐增大,细胞质增多,并分解血红蛋白产生疟色素,其色泽、形状有种的差别,此时的疟原虫称为晚期滋养体(亦称大滋养体),因其细胞质向外伸出不规则的伪足,能呈阿米巴样运动,也称为阿米巴样体。
恶性疟原虫的环状体,在外周血液中经十几个小时的发育,逐渐隐匿在微血管、血窦或其他血流缓慢处,发育成大滋养体及裂殖体,因此在外周血液中很难看到这两个时期。
疟原虫由小滋养体发育成大滋养体的时间间日疟约须8-10个小时,恶性疟原虫10余个小时。
大滋养体发育成熟后虫体变圆,胞质内的空泡消失,核开始分裂,逐渐发育成为成熟裂殖体。
成熟裂殖体的每个核被一份胞质包绕,核的数量因不同虫种而异,一般为8~32个,称为裂殖子。
裂殖体成熟后,被寄生的红细胞破裂,释放出裂殖子。
破裂的红细胞碎片、裂殖子和疟色素等进入血液,引起疟疾临床发作。
一部分裂殖子被巨噬细胞吞食,一部分裂殖子再侵入正常红细胞,开始新一轮的红内期发育,如此循环往复,称为裂体增殖周期。
红内期发育成熟的时间,因不同虫种而异,间日疟原虫和卵形疟原虫为48小时,恶性疟原虫为24~38小时,三日疟原虫为72小时,产生相应的间日发热和三日发热等不同发热周期。
红细胞内的疟原虫经过数次裂体增殖后,部分侵入红细胞的裂殖子不再进行核分裂,而逐渐发育成为雌、雄配子体,或称大、小配子体,这是疟原虫有性生殖的开始。
成熟的雌、雄配子体被雌性按蚊吸入后,便在蚊胃内进行有性生殖。
疟原虫的生活史参见图1-1。
三、蚊体内的发育
在按蚊叮吸携带有雌、雄配子体的人血时,红内期疟原虫进入蚊胃,但只有雌、雄配子体能在蚊体内发育和繁殖,其余各期均被消化。
雌、雄配子体在蚊体内的发育和繁殖,包括配子生殖和孢子增殖两个期。
(一)配子生殖
在蚊胃内,雌配子体的核经过减数分裂,形成圆形不活动的雌配子。
雄配子体的核分裂成4~8个,细胞浆伸出鞭毛状细丝,每1细胞核进入一条鞭毛状细丝内,形成雄配子。
雄配子游近雌配子,雌、雄配子结合形成圆形的合子,并进一步发育成长形能蠕动的动合子。
动合子穿过蚊胃壁的上皮细胞,停留于上皮细胞和弹性纤维膜之间,发育成卵囊。
此时约为吸血后的第24~72小时。
(二)孢子增殖
在卵囊内核反复分裂,形成许多梭状子孢子。
蚊胃壁上的卵囊可有数个到数十个或上百个,一个发育成熟的卵囊内可有1000到10000个子孢子。
疟原虫在蚊体内发育时间的长短与温度和湿度有关,室温24℃~26℃,相对湿度75%~80%,是蚊体内疟原虫孢子生殖最适宜的条件。
气温低于16℃或高于30℃时,发育变慢,并退化变性,直至死亡。
成熟子孢子通过卵囊的微孔逸出或卵囊破裂后扩散入血腔,最后聚集于唾腺内。
当含子孢子的雌蚊吸血时,子孢子随唾液进入人体,疟原虫开始其在人体内的发育过程。
表14种人体疟原虫的生物学特征
恶性疟原虫
间日疟原虫
卵形疟原虫
三日疟原虫
红外期发育天数
5
8
9
14-15
休眠体
无
有
有
无
红外期裂殖子数
30000
10000
15000
15000
裂体增殖周期(小时)
36-48
48
48
72
寄生的红细胞特征
幼红细胞
Duffy阳性网织红细胞和幼红细胞
网织红细胞和幼红细胞
正常红细胞
红细胞胀大
无
明显胀大
略胀大
无
红细胞斑点
茂氏点
薛氏点
薛氏点
齐氏点
疟色素
黄褐色
棕黄色
棕黄色
深褐色
红内期裂殖子数
8-26
12-24
6-12
6-12
配子体
新月/腊肠形
圆形
圆形
圆形
蚊内发育天数
10
8-9
12-14
14-15
卵囊内疟色素
链状和条状
皇冠羽毛状
交叉线
聚集于边缘
图1-1疟原虫的生活史
第二章疟原虫镜下形态
采患者的血液制作涂片并染色后,可以在显微镜下观察到疟原虫形态。
常用的血涂片有两种:
一种是借推片将血液薄薄地涂在载玻片上,使每个红细胞平铺在玻片上,称薄血膜,因薄血膜血液干燥快,原虫形态极少变形,多用于以观察疟原虫形态与鉴别虫种;另一种是把较多的血液涂成圆形,血膜中血细胞重叠,原虫较为集中,称为厚血膜。
厚血膜涂布面积小,阳性检出率高,厚血膜的镜检效率比薄血膜约高六倍。
现常用的一张载玻片上同时做厚薄血膜各一,厚血膜用来检查,薄血膜供编号和鉴别虫种用。
一、薄血膜中疟原虫形态
薄血膜涂制均匀时疟原虫着色良好,结构清晰,便于观察形态和鉴别虫种。
薄血膜上各种红内期疟原虫的形态,见表2-1和图2-1
核
被寄生的红细胞
胞浆
空泡
薛氏小点
疟色素
核
表2-1四种疟原虫薄血膜形态鉴别(吉氏染色)
间日疟原虫
恶性疟原虫
三日疟原虫
卵形疟原虫
被寄生红细胞
大小形状
胀大
正常
正常或缩小
正常或稍胀大,卵圆形或边缘呈伞矢状
颜色
褪色
正常或稍紫
正常
褪色
斑点
薛氏点出现稍晚,红色,细小数多
茂氏点红色,粗大数少
齐氏点淡红色,微细
薛氏点出现较早粗大,数多
小滋养体
大小
较大,约占红细胞直径的1/3
小环状体较小,约占红细胞直径1/6,大环状体与间日疟原虫相似
中等
中等
核
1个
1或2个
1个
1个
胞浆
较薄
小环状体纤细,大环状体与间日疟原虫相似
较粗厚
较粗厚
色素
无
无
偶见细小褐色颗粒
无
大滋养体
大小
较大
较小
较小
较小
核
多见1个
1或2个
1个
1个
胞浆
阿米巴样,常含空泡
圆形,空泡不显著
带状,空泡不显著
圆形,空泡不显著
色素
黄褐色,细小,杆状,散在分布
黄褐色,细小,结成
团块后,呈黑褐色
深褐色,粗大,沿边缘分布
棕黄色,较粗大
未成熟裂殖体
大小
较大
较小
较小
较小
核
2个以上
2个以上
2个以上
2个以上
胞浆
圆形或不规则,空泡消失
圆形,空泡消失
圆形,空泡消失
圆形或卵圆形,空泡消失
色素
黄褐色,分布不匀
黑褐色团块状
深褐色,分布不匀
棕黄色,分布不匀
成熟裂殖体
大小
大于正常红细胞
小于正常红细胞
小于正常红细胞
小于正常红细胞
裂殖子
12~24个,常为16~18个,排列不规则,较大
8~26个,常为8~18个,排列不规则,较小
6~12个,常为8个,常排列如菊花状,较大
6~14个,常为8个,排列不规则,较大
色素
黄褐色,常聚集一侧
黑褐色团块
深褐色,常聚集中央
棕黄色,聚集中央或一侧
雌
配子体
大小形状
大于正常红细胞,圆形
较大,新月形,两端尖锐
小于正常红细胞,园形
小于正常红细胞,圆形
核
1个,较小,深红色,
位于一侧
1个,较小,深红色,
位于中央
1个,较小,深红色,位于一侧
1个,较小,深红色,
位于一侧
胞浆
深蓝色
深蓝色
深蓝色
深蓝色
色素
黄褐色,均匀散在
黑褐色,紧密分布于核周围
深褐色,均匀散在
棕黄色,散在
雄
配子体
大小
形状
大于正常红细胞,园形
较大,腊肠形,两端钝园
小于正常红细胞,圆形
小于正常红细胞,圆形
核
1个,较大,淡红色,位于中央
1个,较大,淡红色,位于中央
1个,较大,淡红色,位于中央
1个,较大,淡红色,位于中央
胞浆
浅蓝色
浅蓝色或淡红色
浅蓝色
浅蓝色
色素
黄褐色,均匀散在
黑褐色,松散分布于
核周围
深褐色,均匀散在
棕黄色,散在
二、厚血膜中疟原虫形态
厚血膜由于用血量多,细胞重叠,干燥缓慢,以致虫体皱缩,空泡消失,胞质变形,加之红细胞溶解,所以虫种和虫体的鉴别比薄血膜困难。
厚血膜中4种疟原虫形态鉴别要点,见表2-2
表2-2四种疟原虫厚血膜形态鉴别(吉氏染色)
间日疟原虫
恶性疟原虫
三日疟原虫
卵形疟原虫
小滋养体
较大。
核1个,较大,胞浆较厚。
常呈"!
"或","状
较小。
核1~2个,较小,胞浆纤细。
常呈"!
"、"飞鸟"、"V"和"断环"状
中等。
核1个,较大,胞浆粗厚。
常呈"环状"或"鸟眼"状
大小与间日疟原虫相似,胞浆致密,核较大。
大滋养体
较大。
呈阿米巴样,形状不规则。
核位于胞浆之中或外边,胞浆常缩成圆形或断裂成数块。
色素分布不匀
较小。
常呈圆形,色素细小或结成1~2个团块
中等。
常呈圆形,色素粗大
大小与间日疟原虫相似,胞浆呈深蓝色,核较大
裂殖体
较大。
裂殖子12~24个。
裂殖子较大
较小。
裂殖子8~26个。
裂殖子较小
较小。
6~12个。
裂殖子大于间日疟原虫裂殖体
大小与间日疟原虫相似,裂殖子6~14个,核较大
配子体
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