医药工业洁净室区悬浮粒子浮游菌和沉降菌的测试方法24页word资料Word文档下载推荐.docx

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国家技术监督局发布

目次

GB/T16292—1996医药工业洁净室（区）悬浮粒子的测试方法

GB/T16293—1996医药工业洁净室（区）浮游菌的测试方法

GB/T16294—1996医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法

GB/T16292—1996

前言

本标准等效采用美国联邦标准FS-209E—1992《洁净室和洁净区内空气浮游粒子洁净等级》，并参考JGJ71—90《洁净室施工及验收规范》制定的。

悬浮粒子和微生物的测试是评价医药工业洁净室（区）空气洁净度的主要指标。

本标准用悬浮粒子的测试来评价洁净室（区）空气中的尘粒数。

医药工业洁净室（区）的悬浮粒子测试方法，应采用本标准。

本标准从生效之日起，废止YY/T0141—93。

本标准的附录A是标准的附录。

本标准的附录B是提示的附录。

本标准由国家医药管理局提出并归口。

本标准起草单位：

上海医药管理局药品测试所。

本标准主要起草人：

纪炜、徐进庆、沈建华。

GB/T16292—1996

医药工业洁净室（区）悬浮粒子的

测试方法

Testmethodforairborneparticlesinclean

room（area）ofthepharmaceuticalindustry

1范围

本标准规定了医药工业洁净室（区）中悬浮粒子的测试方法和悬浮粒子而言的空气洁净度的评定。

本标准适用于医药工业洁净（区）中悬浮粒子洁净度的监测和洁净度等级的验证。

2引用标准

下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。

本标准出版时，所示版本均为有效，所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。

JGJ71—90洁净室施工及验收规范

3定义

本标准采用下列定义。

3.1洁净室（区）cleanroom（area）

对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。

其建筑结构、装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。

3.2局部空气净化localizedairpurification

仅使室内工作区域特定的局部空间的空气含悬浮粒子浓度达到规定的空气洁净度级别，这种方式称局部空气净化。

3.3粒子particle

一般尺寸为0.001~1000μm的固态和液态物质。

3.4洁净度cleanliness

洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。

3.5单向流unidirectionalairflow（普称为层流laminarflow）

沿着平行流线，以一定流速、单一通路、单一方向流动的气流。

3.6非单向流nonunidirectionalairflow（曾称为乱流turbulentflow）

具有多个通路循环特性或气流方向不平行的，不满足单向流定义的气流。

3.7t分布tdistribution

正态总体中的一种抽样分布，其分布函数为

t＝·

·

（1）

3.8置信上限（UCL）upperconfidencelimit

从正态分布抽样得到的实际均值按给定的置信度（此外为95%）计算得到的估计上限将大于此实际均值，则称计算得到的这一均值估计上限为置信上限。

3.9静态测试at-resttest

洁净室（区）净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装，洁净室（区）内没有生产人员的情况下进行的测试。

3.10动态测试operationaltest

洁净室（区）已处于正常生产状态下进行的测试。

4测试方法

4.1方法提要

本测试方法采用计数浓度法，即通过测定洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某粒径的悬浮粒子数，来评定洁净室（区）的悬浮粒子洁净度等级。

4.2仪器

a）光散射粒子计数器（用于粒径大于或等于0.5μm的悬浮粒子计数）；

b）滤膜显微镜（用于粒径大于或等于5μm的悬浮粒子计数）。

4.2.1光散射粒子计数器原理

空气中的悬浮粒子在光的照射下产生光散射现象，散射光的强度与粒子的表面积成正比。

4.2.2光散射粒子计数器使用要点

使用仪器时应严格按照仪器说明书操作。

4.2.2.1仪器开机，预热至稳定后，方可按说明书的规定对仪器进行校正。

4.2.2.2采样管口置采样点采样时，在确认计数稳定后方可开始连续读数。

4.2.2.3采样管必须干净，严禁渗漏。

4.2.2.4采样管的长度应根据仪器的允许长度。

除另有规定外，长度不得大于1.5m。

4.2.2.5计数器采样口和仪器工作位置应处在同一气压和温度下，以免产生测量误差。

4.2.2.6必须按照仪器的检定周期，定期对仪器作检定。

以保证测试数据的可靠性。

5测试规则

5.1测试条件

5.1.1温度和湿度

洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（温度控制在18℃～24℃,相对湿度控制在45%～60%之间为宜）。

5.1.2压差

空气洁净度不同的洁净室（区）之间的压差应≥4.9Pa，空气洁净度级别要求高的洁净室（区）对相邻的空气洁净度级别低的洁净室（区）一般要求呈相对正压。

5.2测试状态

有静态测试和动态测试。

静态测试时，室内测试人员不得多于2人。

测试报告中应标明测试时所采用的状态。

5.3测试时间

5.3.1对单向流，测试应在净化空气调节系统正常运行时间不少于10min后开始。

5.3.2对非单向流，测试应在净化空气调节系统正常运行时间不少于30min后开始。

5.4悬浮粒子计数

5.4.1采样点数目及其布置

悬浮粒子洁净度监测的采样点数目及其布置应根据产品的生产及工艺关键操作区设置。

采样点布置规则见附录A（标准的附录）。

悬浮粒子洁净度等级验证的采样点数目应按5.4.1.1和5.4.1.2布置。

5.4.1.1最少采样点数目

悬浮粒子洁净度测试的最少采样点数目可查表1确定。

表1最少采样点数目

面积

m2

洁净度级别

100

10000

100000

<

10

2～3

2

≥10～<

20

4

≥20～<

40

8

≥40～<

16

≥100～<

200

3

≥200～<

400

80

6

≥400～<

1000

160

13

≥1000～<

2000

32

800

63

注：

表中的面积，对于单向流洁净室，指的是送风面积，对非单向流洁净室，指的是房间面积。

5.4.1.2采样点的位置

a）采样点一般在离地面0.8m高度的水平面上均匀布置。

b）采样点多于5点时，也可以在离地面0.8m～1.5m高度的区域内分层布置，但每层不少于5点。

5.4.2采样点的限定

对任何小洁净室或局部空气净化区域，采样点的数目不得少于2个，总采样次数不得不于5次。

每个采样点的采样次数可以多于1次，且不同采样点的采样次数可以不同。

5.4.3采样量

不同洁净度级别每次最小的采样量见表2。

表2最小采样量

洁净度级别

采样量，L/次

≥0.5μm

≥5μm

5.66

—

2.83

8.5

5.4.4采样注意事项

5.4.4.1在确认洁净室（区）送风量和压差达到要求后，方可进行采样。

5.4.4.2对于单向流，计数器采样管口朝向应正对气流方向，对于非单向流，采样管口宜向上。

5.4.4.3布置采样点时，应避开回风口。

5.4.4.4采样时，测试人员应在采样口的下风侧。

6结果计算

悬浮粒子浓度的采样数据应按下述步骤作统计计算：

6.1采样点的平均粒子浓度

A=·

（2）

式中：

A——某一采样点的平均粒子浓度，粒/m3;

Ci——某一采样点的粒子浓度（i=1，2，·

，N），粒/m3；

N——某一采样点上的采样次数，次。

6.2平均值的均值

M=·

（3）

M——平均值的均值，即洁净室（区）的平均粒子浓度，粒/m3；

Ai——某一采样点的平均粒子浓度（i=1，2，·

，L），粒/m3；

L——某一洁净室（区）内的总采样点数，个。

6.3标准误差

SE=·

（4）

SE——平均值均值的标准误差，粒/m3。

6.4置信上限

UCL=M+t×

SE·

（5）

UCL——平均值均值的95%置信上限，粒/m3；

t——95%置信上限的t分布系数，见表3。

表395%置信上限的t分布系数

采样点数L

5

7

9

>

t

6.31

2.92

2.35

2.13

2.02

1.94

1.90

1.86

注：

当采样点数多于9点时，不需要计算UCL。

7结果评定

判断悬浮粒子洁净度级别应依据下述二个条件。

7.1每个采样点的平均粒子浓度必须低于或等于规定的级别界限，即Ai≤级别界限。

7.2全部采样点的粒子浓度平均值均值的95%置信上限必须低于或等于规定的级别界限，即UCL≤级别界限。

附录A

（标准的附录）

洁净室（区）采样点布置

A1洁净室（区）采样点布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于稀疏。

下列采样点的图示可作参考。

为采样点。

图A1

A2洁净棚（层流罩），洁净工作台等局部空气净化设施的采样点布置：

A2.1水平单向流

A2.2垂直单向流图A2

图A3

采样点数参见5.4.1.1，采样点一般在工作台面上0.2m高度的平面上均匀布置。

附录B

（提示的附录）

国内外有关悬浮粒子的测定的标准

中国卫生部GMP

（1992年修订）

美国联邦标准

FS-209E

世界卫生组织（WHO）

及欧共体（EC）GMP

尘粒数/m3

等级限值/m3

尘粒的最大允许数/m3

≤3500

3530

3500

≤350000

≤2000

353000

2470

350000

≤3500000

≤20000

3530000

24700

3500000

20000

GB/T16293—1996

本标准依照国内外《药品生产管理规范》（GMP）的要求，非等效采用美国国家航空及宇宙航行局NASA标准NHB5340-2《关于洁净室和洁净室工作台微生物的控制标准》，并参考JGJ71—90《洁净室施工验收规范》制定的。

悬浮粒子和微生物的测试是评价医药工业洁净室和洁净区空气洁净度的主要指标。

本标准用浮游菌评价洁净室和洁净区空气中的微生物。

医药工业洁净室（区）浮游菌的测试应采用本标准的规定。

本标准的附录A、附录B、附录C都是标准的附录。

本标准的附录D是提示的附录。

中美上海施贵宝制药有限公司、上海医药局药品测试所、上海四药股份有限公司。

顾锋、钱周、步伯荪、唐小珍。

GB/T16293—1996

医药工业洁净室（区）浮游菌的

Testmethodforairbornemicrobeinclean

room（area）ofthepharmaceuticalindustry

本标准规定了医药工业洁净室和洁净区中浮游菌测试条件、测试方法。

本标准适用于医药工业洁净室和洁净区，无菌室或无菌区域（包括洁净工作台）的浮游菌的测定和环境的验证。

下列标准包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。

本标准出版时，所示版本均为有效。

所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。

YY/T0188.6—1995药品检验操作规程第6部分：

药品生物测定法

3.2洁净工作台cleaningworkstation

一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。

其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流罩、水平层流罩、垂直层流洁净工作台、水平层流洁净工作台、自净器等。

3.3菌落colonyformingunits

细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。

通常用个数表示。

3.4浮游菌airbornemicrobe

用本标准提及的方法收集悬浮在空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。

3.5浮游菌浓度airbornemicrobeconcentration

单位体积空气中含浮游菌菌落数的多少，以计数浓度表示，单位是个/m3或个/L。

3.6悬浮粒子airborneparticles

可悬浮在空气中的尺寸一般在0.001μm～1000μm之间的固体、液体或两者的混合物质，包括生物性粒子和非生物性粒子。

3.7洁净度cleanliness

3.8单向流unidirectionalairflow（曾称为层流laminarflow）

沿着平行流线，以单一通路以一定流速向单一方向流动的气流。

3.9非单向流nonunidirectionalairflow（曾称为乱流turbulentflow）

3.10静态测试at-resttest

3.11动态测试operationaltest

本方法采用计数浓度法，即通过收集悬游在空气中的生物性粒子于专门的培养基，经若干时间，在适宜的生长条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，从而判定洁净环境内单位体积空气中的活微生物数，以此来评定洁净室（区）的洁净度。

4.2所用的仪器、设备和培养基

a）浮游菌采样器；

b）真空抽气泵；

c）培养皿；

d）培养基；

e）恒温培养箱。

4.3浮游菌采样器

浮游菌采样器宜采用撞击法机理的采样器，一般采用狭缝式采样器或离心式采样器。

4.3.1采用的浮游菌采样器必须要有流量计和定时器。

4.3.2狭缝式采样器的原理

狭缝式采样器由附加的真空抽气泵抽气，通过采样器的缝隙式平板，将采集的空气喷射并撞击到缓慢旋转的平板培养基表面上，附着的活微生物粒子经培养后形成菌落，予以计数。

4.3.3离心式采样器的原理

离心式采样器由于内部风机的高速旋转，气流从采样器前部吸入从后部流出，在离心力的作用下，空气中的活微生物粒子有足够的时间撞击到专用的固形培养条上，经培养后形成菌落，予以计数。

4.3.4狭缝式采样器的使用要点

应严格按仪器说明书的要求进行操作。

4.3.4.1校验

采样器必须按仪器的检定周期，定期对仪器作检定，以保证测试数据的可靠性。

校验的项目有：

定时器、转盘转速、流量计。

4.3.2每次测试前应按说明书上的规定，先接通电源，启动真空抽气泵，然后调节流量计及定时器。

4.3.4.3空气采样量根据需要选定。

已知采样器的流量（L/min），设定采样时间（min），两者相乘即采样量（L）。

4.3.4.4注意事项

4.3.4.4.1采样口必须用便于消毒及化学性能稳定的材料制造。

4.3.4.4.2采样管严禁渗漏，内壁应光滑。

4.3.4.4.3采样管的长度应根据测点的高度定，尽量减少弯曲。

4.4真空抽气泵

4.4.1真空抽气泵的排气量应与采样器匹配。

4.4.2宜采用无油真空抽气泵，必要时可在非气口安装气体过滤器。

4.4.3真空抽气泵安装的位置必须适当，一般装在采样器下面。

4.5培养皿

4.5.1狭缝式采样器一般采用∅150mm×

15mm、∅90mm×

15mm、∅65mm×

15mm三种规格的硼硅酸玻璃培养皿。

可根据所选用采样器选择合适的培养皿。

4.5.2离心式采样器采用专用的固形培养条。

4.6培养基

普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基。

其配制方法见附录A（标准的附录）。

4.7恒温培养箱

必须定期对培养箱的温度计进行检定。

4.8测试步骤

4.8.1测试前仪器、培养皿表面必须严格消毒。

4.8.1.1采样器进入被测房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌，用于100级洁净室的采样器宜一直放在被测房间内。

4.8.1.2用消毒剂擦净培养皿的外表面。

4.8.1.3采样前，先用消毒剂消毒采样器的顶盖、转盘以及罩子的内外面，采样结束，再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。

4.8.1.4采样口及采样管，使用前必须高温灭菌。

如用消毒剂对采样管的外壁及内壁进行消毒时，应将管中的残留液倒掉并晾干。

4.8.1.5采样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒。

4.8.2狭缝式采样器的采样程序

4.8.2.1仪器经消毒后先不放入培养皿，开动真空泵抽气，使仪器中的残余消毒剂蒸发，时间不少于5min，并调好流量、转盘转速。

4.8.2.2关闭真空泵，放入培养皿，盖上盖子后调节采样器缝隙高度。

4.8.2.3置采样口于采样点后，依次开启采样器、真空泵，转动定时器，根据采样量设定采样时间。

4.8.3培养

4.8.3.1全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。

4.8.3.2在30℃～35℃培养箱中培养，时间不少于48h。

4.8.3.3每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。

可每批选定3只培养皿作对照培养。

4.8.4菌落计数

4.8.4.1用肉眼直接计数、标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，有否遗漏。

4.8.4.2若平板上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。

4.8.5注意事项

4.8.5.1使用前仔细检查每个培养皿的质量，培养基及培养皿有变质、破损或污染的不能使用。

4.8.5.2采取一切措施防止采样管的污染和其他人为对样本的污染。

4.8.5.3对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。

4.8.5.4由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落或培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。

5.1测试状态

5.1.1浮游菌测试前，被测试洁净室（或洁净区）温、湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。

5.1.2浮游菌测试前，被测试洁净室（或洁净区）已经过消毒。

5.1.3测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。

5.2测试人员

5.2.1测试人员必须穿戴符合环境级别的工作服。

5.2.2静态测试时，室内测试人员不得多于2人。

5.3.1对单向流，如100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始。

5.3.2对非单向流，如10000级，100000级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。

5.4浮游菌浓度计算

5.4.1采样点数量及其布置

浮游菌测试的最少采样点数目分为日常监测及环境验证两种情况，见表1。

验证

监测