甘露糖结合蛋白与类风湿性关节炎.docx
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甘露糖结合蛋白与类风湿性关节炎
第一章前言
天然免疫是宿主抵抗感染因子的第一道防线,也能作用于获得性免疫系统而发挥更有效的作用,其中补体凝集素途径在天然免疫防御中发挥重要作用,而凝集素途径的始动因子就是甘露糖结合凝集素(Mannan-BindingLectin,MBL)。
甘露糖结合凝集素(Mannan-BindingLectin,MBL),又称甘露糖结合蛋白(Mannan-BindingProtein,MBP),是一种肝源性血清C型凝集素,属Ca2+依赖型凝集素家族成员,广泛存在于多种哺乳动物血液循环中,在天然免疫中起重要作用。
其主要生理功能有:
①识别糖配体,MBL能选择性地与多种细菌、病毒、真菌以及某些肿瘤细胞表面的甘露聚糖残基结合,进而启动机体的天然免疫机制,在免疫功能发挥和稳定中起重要作用;②启动补体系统活化,MBL是目前发现的唯一能活化补体系统的胶凝素,CLR是其主要的效应功能区;③促进吞噬、免疫调节作用;④抑制、中和病毒作用;⑤精卵识别的信号受体之一[1]。
MBL基因具有多态性,其主要的多态性位点包括:
启动子区的MBL-221位Y/X、MBL-550位H/L、MBL-70位S/T、MBL-349位F/G、MBL-427位V/W、MBL-336位J/K和一个六碱基缺失MBL-del6M/N;转录起始区的MBL+4位P/Q;外显子Ⅰ的MBL52位A/D、MBL54位A/B和MBL57位A/C密码子突变。
不同的启动子基因型调控MBL基因转录水平,结合结构基因的突变体,使得不同种族人群间,甚至同一种族不同个体间的MBL血清水平相差很大,严重和反复感染人群MBL基因突变的频率显著高于普通人群,而血清MBL水平低下可导致免疫缺损。
近年来,人们就MBL基因变异、MBL浓度与疾病的相关性进行了大量的研究,证明MBL基因多态性、血清MBL水平低下与感染性疾病直接相关,是造成许多感染性疾病和自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)以及病毒感染性疾病如人免疫缺陷病(HIV)、乙型肝炎(HBV)等的根本原因之一[2]。
研究不同人群MBL基因多态性的分布特征对疾病的预防和治疗有着理论和现实的双重意义。
国内外学者对MBL基因多态性的研究已经获得了大量的数据。
我国是一个多民族的国家,人类遗传资源极其丰富。
随着人类基因组计划研究的深入,对我国各民族遗传资源的研究引起了国家有关部门的高度重视。
宁夏是我国最大的回族聚居区,宁夏的回族主要来自中亚、西亚等地,有其独特的分布特征。
因民族风俗、宗教信仰等原因,回族人群在宁夏主要集中在几个相对隔离的地区。
由于禁止与异族通婚,因而回族人群形成了遗传上相对隔离的“隔离群体”。
独特的历史渊源赋予了宁夏回族有别于我国其他民族的独特性。
目前宁夏回族MBL基因单核苷酸多态性的研究尚未见报道。
类风湿性关节炎(RA),强直性脊柱炎,属中医痹证范畴,俗有骨痹、历节风之称。
是一种以慢性多关节炎症为主要表现的全身性疾病,多以手足小关节起病,常呈对称性,早期症状为受累关节的疼痛、肿胀、活动困难及发僵,长久不愈的晚期症状则为关节畸形。
本病在我国人中患病率为0.3%,是造成我国人群丧失劳动力与致残的主要病因之一。
本病可见于任何年龄,发病一般随着年龄增长而增加,发病的高峰年龄20-40岁,而女性则在40-60岁,类风湿关节炎以女性多发,女性患者是男性患者的2-3倍。
关于MBL的基因多态性与类风湿性关节炎的可能联系研究较多,有很多证据表明MBL和RA的发生和发展有相关性。
因此,探讨MBL基因作为影响RA疾病发病候选基因的可能性并对其进行群体遗传结构分析,在筛选RA易感人群,并采取有效的预防和治疗措施等方面都具有潜在的应用前景。
通过对人群的MBL基因型及MBL血清水平加以测定,可以早期预防和治疗RA,这对预防和减少RA的发生有重要意义。
1.1MBL的结构
人MBL基因组位于10号染色体的长臂上(10q11.2-q21),具有4个编码区(Exon1~4),各为251bp、117bp、69bp和3.1kb长,分别编码N-端富含半胱氨酸区、胶原样区(CLD)、颈区和C末端C型糖识别区(CRD)。
在MBL基因组的5'-端含有急性期反应蛋白元件,包括一个热休克蛋白元件、三个糖皮质激素应答元件和一个血清淀粉样A蛋白元件[3]。
在应激状态下,血清急性期反应蛋白浓度升高,MBL也升高,如手术感染时,血中急性期反应蛋白浓度升高(10~20倍),MBL水平也相应增高(3倍)。
MBL的蛋白质是多个亚单位的聚合体,每一亚单位由3条完全相同的肽链(每条链分子量为28~32KD)构成。
各肽链均为4个区域:
①N-端富含胱氨酸区:
含20~21个氨基酸,其中胱氨酸参与亚单位间N-二硫键形成;②胶原区:
含18~20个Gly-Xaa-Yaa序列,为典型的胶原三螺旋结构,参与免役调理和补体活化过程;③颈区:
位于胶原区与糖识别区之间,功能尚不清楚,可能与亚单位的稳定有关;④糖识别区:
含120氨基酸(其中17~18个保守氨基酸和14个可变氨基酸,保守氨基酸是维持蛋白质特殊的疏水核心所必需),呈一花蕾样结构。
花蕾中三花瓣彼此间相距54A,瓣尖平面为一正三角形,此结构为MBL蛋白质发挥生理效应的基础[4]。
通常MBL与MASP(MBL-associaedserineprotease—一种MBL相关丝氨酸蛋白激酶)结合,以复合物形式存在。
此时的MBL胶原样区被MASP封闭,无法参加免役调理作用。
只有当MBL的胶原样区暴露,才能激发免役调理功能。
使MBL的胶原样区暴露的机制研究尚不充分,推测与α2-巨球蛋白和MASP参与补体活化有关[5]。
1.2MBL的功能
MBP是机体先天性免疫力组成之一,构成机体对病原微生物的首道防线。
MBP主要通过其对病原微生物的调理作用和补体活化作用而具备这一功能[6]。
甘露糖存在于许多病原体上,如一些G-细菌、分枝杆菌、酵母菌、一些寄生虫、某些病毒外膜蛋白、以及一些恶性细胞上,而大多数哺乳动物细胞表面的及其分泌的糖蛋白具有复杂的低聚糖链,其末端为唾液酸。
MBP主要识别甘露糖,少数MBP亦识别岩藻糖与N-乙酰基氨基葡萄糖。
MBP由肝脏细胞合成后分泌入血液循环中,通过识别与结合甘露糖,发挥免疫调节作用,或者激活补体系统,发挥调理素作用。
它在机体免疫监视及免疫防御中有重要意义[7]。
1.2.1识别、结合病原体
大量研究表明,天然或重组的MBLCRD可选择性地识别和结合一系列的病毒、细菌、真菌、寄生虫和受感染的细胞,其分子结构和空间排列方式决定了MBL的特异性识别作用[8]。
1.2.2调理作用
MBP的CRD与病原体(细菌、真菌、病毒等)表面的甘露糖残基或GlcNAc多价结合后,MBP颈区构象改变,暴露出Collectin受体所能结合的配体结构,而Collectins受体广泛分布于中性粒细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞、血小板、内皮细胞、纤维母细胞和血管平滑肌细胞表面,MBP与吞噬细胞的Collectin受体结合后可发挥调理作用,促进吞噬细胞对病原体的吞噬和破坏,从而清除入侵微生物。
1.2.3激活补体
这是MBL杀灭胞外病原体和溶解病原体感染细胞的主要方式。
现证实MBL是通过激活MBL相关丝氨酸蛋白酶(MBLassociatedserineproteases,MASPs),启动补体凝集素途径的活化来实现的[9]。
1.3MBL的基因多态性
1.3.1MBL的基因多态性位点
1975年,人们发现哺乳动物细胞内可能存在一种能与甘露糖特异结合的蛋白质,1978年,KawasakiT等[10]证实了这一可能性,1993年将此蛋白命名为甘露糖结合凝集素(MBL),1988年,Ezekowitz等建立了MBL的cDNA克隆。
人MBL基因全长7kb,位于第10号染色体长臂10q11.2-q21,结构基因含有4个外显子。
MBL血清浓度受多种因素影响,如种族、年龄、应激状态等,但主要受结构基因外显子Ⅰ密码子点突变的影响和启动子区SNP的调控。
迄今为止,所发现的MBL基因结构区突变均为第Ⅰ外显子的点突变,因正常的氨基酸残基被取代,破坏了MBL的胶原样区结构,可能在血浆中易于被分解。
三个点突变分别是密码子54(GGC→GAC,Gly→Asp)、57(GGA→GAA,Gly→Glu)以及密码子52(CGT→TGT,Arg→Cys)(简称为MBL54、MBL57和MBL52,相应突变的等位基因命名为B、C、D,野生型为A)。
外显子多态性位点D、B、C型等位基因在不同种族中分布也存在差异。
D型等位基因最为罕见,北欧高加索人种中该等位基因频率为0.05,在非洲和东方人种中的分布尚不确切。
B型等位基因在英国、香港华人、丹麦和埃斯基摩人群中的分布频率为0.11~0.17;而在非洲人群中极其罕见。
相反,C型等位基因在英国、香港华人、丹麦和埃斯基摩人群中均罕见;而在非洲人群中其频率却高达0.29。
由于不同的启动子区基因型对MBL的基因转录进行调控,从而使不同种族人群间,甚至同一种族不同个体间的MBL血清水平相差很大。
启动子区极其复杂,现已证实启动子有7个点突变和1个六碱基缺失,分别为:
MBL-550位H/L(G/C)、MBL-221位X/Y(G/C)、MBL-427位(A/C)、MBL-349位F/G(A/G)、MBL-336位J/K(A/G)、MBL-70位(C/T)、MBL-329~-324位六碱基缺失M/N(AAAGAG/)和MBL+4位P/Q(G/A)。
已证明启动子的单倍型HY、LY和LX可分别代表血清MBL高、中和低水平;外显子多态性位点与启动子区多态位点之间存在连锁不平衡:
B、C常与LY连锁,而D则常与HY连锁;已发现的七种单倍型(LYPA、LYPB、HYPA、HYPD、LXPA、LYQA、LYQC)与某些疾病如系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)以及病毒感染性疾病如人免疫缺陷病(HIV)、乙型肝炎(HBV)等存在相关性[11]。
1.3.2MBL多态性与临床疾病的相关性
1.3.2.1MBL与临床感染性疾病
在患有感染性疾病和怀疑免疫力缺陷的儿童中会出现较高频率的变异基因,反复感染的成年患者其MBL水平也比正常对照组明显降低。
MBL基因的突变导致MBL水平下降,MBL低下或缺失又与临床感染性疾病密切相关。
在英国小儿的肿瘤患者中,发热和中性粒细胞减少是与MBL的等位基因型A/O和O/O相关的,携带野生型基因的患儿MBL水平升高,相反,携带变异型等位基因的MBL水平下降[12]。
同样的结论出现在干细胞移植以后的患者,携带MBLA/0或O/0等位基因的患者更易发生细菌、病毒、真菌等感染,MBL启动子为HYA单倍体(与高水平MBL相关)时,对机体有保护作用,患者不易发生感染。
因此,患者MBL水平明显下降,且携带MBL变异的等位基因,可导致临床化疗后的严重感染;在英国牛津Roy等的研究显示[13],纯合型的MBL变异等位基因携带者其获得侵袭性肺炎球菌感染的危险性有可能增加;在美国、非洲和美洲的人群中,结核患者B等位基因出现的频率低于对照组,而在白种人和西班牙的人群中,结核患者与对照组没有区别。
由此可知,结核分支杆菌感染通常发生在MBL水平升高的患者中,携带MBL的B、D变异等位基因的人群不易患结核性疾病,且MBL的基因型和基因的变异是随着不同地区的人群而变化。
大量研究表明[14],MBL多态性与病毒感染如肝炎病毒感染、人类免疫缺陷病毒感染等相关。
有报道在越南乙型肝炎病毒(HBV)感染的患者中,MBL第一个外显子54位密码子出现突变,突变的频率明显高于健康对照组,并且与转氨酶升高密切相关。
在体外研究表明,MBL能够与人类免疫缺陷病毒(HIV-1)gp120表面的糖类抗原结合,从而抑制HIV与人类T细胞的结合。
MBL缺陷更易导致HIV感染,但是对于疾病进展的影响仍有争论。
丹麦HIV感染的成年人的预期研究中揭示,HIV感染和疾病的进展与MBL变异的等位基因及MBL血清水平降低密切相关。
甘露糖是真菌细胞的重要组成部分,MBL多态性与真菌感染相关,如白色念珠菌感染、慢性坏死性肺部曲霉病等。
此外,MBL基因突变频率升高,MBL水平下降,可导致原虫感染、疟原虫感染的几率大大增加。
1.3.2.2MBL与自身免役性疾病
血清中MBL水平降低或缺失与机体反复感染和发生结缔组织疾病关系更密切。
许多学者报道血清MBL缺乏的儿童易反复发生细菌、病毒、原虫感染。
可能与MBL的免疫调理和免疫促吞噬作用缺乏或发挥低下有关[15]。
近年来关MBL缺失与SLE相关的报道较多。
血清中低水平MBL被发现与SLE有关,血清中MBL水平越低,发展成SLE的危险性越高,有研究报道,当血清中MBL<250ng/ml时,该个体患SLE的危险性则大(OR=5.32),其次,MBL基因第54位密码子突变可导致MBL等位基因频率在中国人,西班牙人,希腊人显著增加。
日前关于MBL缺失导致SLE的发病机制尚不清楚,虽然MBL免疫复合物的清除作用尚未确定,但其倾向于SLE发病是可能的。
Tp等对中国南方211例RA病人和196例健康对照的MBL表型、基因型及启动子多态性进行研究发现,携带MBL突变基因的病人血清中MBL水平较低。
1.3.2研究MBL多态性的临床价值
MBL作为机体天然免疫的第一线防御分了,其生物学功能在特异性免疫系统尚未健全,尤其是体液免疫未成熟、缺陷或异常时具有的重要作用己被充分肯定,但有关MBL途径活化补体系统和免疫调控的机制、MBL与细胞受体结合的种类以及相互作用的机制和调理效应、MBL对肿瘤细胞、病毒膜糖蛋白或病毒感染修饰细胞的识别和作用等问题仍待研究确定。
个体MBL基因突变、血清MBL水平低下、功能缺损与某此感染、自身免疫性疾病易感性增加的关系以及和伴随的其他免疫分了缺损的关系是近年来众多学者关注的课题。
在明确MBL缺损后,用外源性MBL治疗己显示出临床应用价值。
1.4MBL基因多态性与类风湿性关节炎(RA)
1.4.1类风湿性关节炎(RA)
类风湿性关节炎(RA)是一种以关节疼痛、肿胀、僵直、变形为主要临床表现的慢性全身性自身免疫性疾病。
早期表现为关节游走性疼痛和功能障碍,晚期则表现为关节僵硬、畸形、废而不用。
血清中可查到自身抗体。
目前其病因尚不清楚,与发病有关的因素有:
⑴感染病灶与本病发病有关。
以链球菌胞壁碎片水悬液注入鼠腹腔,可产生慢性关节炎,关节呈增殖性、炎性、糜烂性全滑膜炎。
⑵遗传本病病人HLA-DRwu抗原检出率明显升高,提示发病与遗传有关。
⑶免疫机能紊乱目前大量实验资料支持类风湿性关节炎是免疫系统调节功能紊乱所致的炎症反应性疾病。
1.4.2MBL基因多态性与类风湿性关节炎(RA)的关系
RA是遗传因素与环境因素共同作用的多基因疾病。
许多研究表明,MBL基因可能是影响RA疾病发病候选基因,MBL基因多态性与RA发病关联。
Tp等对中国南方211例RA病人和196例健康对照的MBL表型、基因型及启动子多态性进行研究发现,RA病人血清中MBL水平显著低于健康对照,MBL基因第54位密码子突变频率显著高于对照组。
启动子区第550位(H/L变异体)多态性在两组间差异显著。
对MBL基因密码子点突变研究发现,与对照组比较中国病人MBL基因54位密码子点突变频率较高,HY单倍型的发生率下降,LX单倍型发生率较高,而且,关节炎临床表现比较严重的患者和侵蚀性关节炎病人与没有这些损伤的病人比较,其血清中MBL水平显著降低,这与Grandal等的报道一致,携带MBL突变基因的病人血清中MBL水平较低。
研究提示RA对MBL合成的影响是有限的。
在疾病活动期MBL血清学水平过低,并非代谢消耗,而是RA病人产生MBL的能力下降[16]。
不同基因型对RA病人的发病存在影响。
MBL缺失可能通过以下机制与RA发病关联,第一:
免疫复合物介导的炎性变化可用少解释RA患者的关节病变,虽然MBL对关节中免疫复合物的清除作用仍未证实,但MBL缺失导致免疫复合物清除能力下降,可能是RA患者关节损害的机制之一;第二:
RA可能是病原微生物:
如链球菌、F13病毒、微小病毒、逆转录酶病毒等的变态免疫应答的结果。
其可能原因是MBL缺失导致感染个体暴露于潜在的致病微生物而与RA易感相关;第三:
有报道RA与无乳型1gG的显著增加有关,MBL可识别N-乙酞氨基葡萄糖,后者可能是MBL的配体,MBL与病人关节中的免疫球蛋白1gG作用激活补体导致RA病人关节损伤,然而这一机制似乎是不正确的。
尚有报道,MBL缺失与RA无相关性,MBL在RA的发病中并无重要作用。
有待进一步研究。
1.5本课题的目的和意义
宁夏是我国最大的回族聚居区。
宁夏回族主要来自中亚、西亚等地,有其独特的分布特征。
因民族风俗、宗教信仰等原因,回族人群在宁夏主要集中在几个相对隔离的地区。
由于禁止与异族通婚,因而回族人群形成了遗传上相对隔离的“隔离群体”。
独特的历史源源赋予了宁夏回族有别于我国其他民族的独特性。
因此宁夏回族是我国独特的遗传资源,是研究人类基因组多样性和疾病相关基因不可多得的材料。
有关民族的群体遗传学资料有许多空白需要填补。
目前,国内学者也对不同种族和地区的人群MBL的基因多态性进行了研究,目前已经获得了中国汉族、白族、佤族、拉祜族、维吾尔族、蒙古族、藏族和彝族等多个民族的MBL基因多态性的分布数据,但尚无宁夏回族人群MBL基因单核苷酸多态性(SNP)分布的报道,本研究将填补此空白;宁夏回族人群中MBL基因SNP是否与某些疾病的发生存在相关性,有待本研究进行调查。
此外,国内对宁夏回族的人类遗传资源研究中,只是注重宁夏回族与其他民族的遗传多态性是否存在差异,并没有进一步研究宁夏回汉族之间的差异,本研究将揭示宁夏回族、宁夏汉族人群的MBL基因单核苷酸多态性分布的差异。
因此,本课题采用序列特异性引物聚合酶链反应(SSP-PCR)和聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分型法(PCR-RFLP)检测宁夏回、汉族人群的MBL基因多态性,分析回、汉族人群的MBL基因多态性差异。
本研究旨在研究宁夏地区回族人群MBL基因多态性特点、基因频率的分布状况,探明宁夏回族与汉族健康人MBL基因多态性的分布特征与差异;探明宁夏回、汉族RA患者及健康对照组间MBL基因多态性的分布特征与差异;了解MBL基因多态与宁夏地区回、汉族群体RA的相关性,为宁夏回、汉族RA易感人群的筛选以及RA的预防和早期治疗提供理论相应的依据。
第二章材料与方法
2.1材料
2.1.1宁夏回、汉族健康样本来源:
基因组DNA样本来源于宁夏不同地区体检健康人群,年龄在7岁~73岁之间,共353例;其中回族209例(男94例,女114例),汉族144例(男73例,女71例)。
以上研究个体均无血缘关系,追溯3代均为同一民族个体,且在宁夏地区居住三代以上。
根据知情同意原则,常规抽取外周静脉血,用以进行基因组DNA的提取。
2.1.2宁夏回、汉族类风湿性关节炎(RA)样本来源:
选择宁夏不同地区的RA患者279例,年龄在7岁~77岁之间,其中回族79例(男27例,女52例),汉族200例(男69例,女131例)。
以上研究个体均无血缘关系,追溯3代均为同一民族个体,且在宁夏地区居住三代以上。
RA的诊断以美国风湿病学会(ARA)1987年修订的RA分类标准为依据,根据知情同意原则,常规抽取外周静脉血,用以进行基因组DNA的提取。
2.1.3主要试剂:
2.1.3.1DNA提取试剂盒(PUREGENEDNAIsolationKit;Gentra,U.S.A):
内含红细胞裂解液、白细胞裂解液、蛋白质沉淀液和DNA水化液
2.1.3.2琼脂糖凝胶电泳试剂
(1)1×TAE电泳缓冲液:
内含40mmol/LTris-乙酸和1mmol/LEDTA(pH8.0)
(2)电泳上样缓冲液:
内含0.25%(W/V)溴酚蓝、0.25%(W/V)二甲苯青和40%(W/V)蔗糖
(3)电泳级琼脂糖:
购自上海生工生物工程技术服务有限公司
(4)溴化乙锭(EB):
终浓度为0.5μg/ml
2.1.3.3PCR反应试剂(北京博大泰克公司):
(1)PCR反应试剂:
5×PCR反应液、2.5MmdNTP及LATaqDNA聚合酶(5U/μl)
(2)PCR引物(上海英骏生物有限公司合成),MBL52、MBL54和MBL57的PCR引物序列见参考文献[16],其余引物均为自行设计,引物序列见表2-1:
表2-1:
MBL基因11个位点的引物序列:
位点
引物序列
退火温度
扩增长度
-70位
(C/T)
F:
5'–ATGACCCATCCCTGGCCTCTAGCCG-3'
R:
5'–AGTCTTCCAGCAGCAACG-3'
65°C
162bp
-221位
(G/C)
F:
5'–CGGTCCCATTTGTTCTCACTGCCCC-3'
R:
5'-TGTGACACTGCGTGACTA-3'
63°C
152bp
-336位
(A/G)
F:
5'–TCTGTGCATGTCCTCTTCGGGTCCA-3'
R:
5'–ATTCTGGGCTGGGTTGGT-3'
63°C
191bp
-349位
(A/G)
F:
5'–TGGGTTGGTGACTAAGGT-3'
R:
5'–GGTAGGCACTATGATGAGC-3'
59°C
390bp
-427位
(A/C)
F:
5'–TCACCAGCTTTCAGAACAGGGCCTG-3'
R:
5'-GAGAATGAGTGGAAACCC-3'
60°C
170bp
-550位
(C/G)
-550c:
5’-TGCTTACCCAGGCAAGCCTGTC-3’
-550g:
5’-TGCTTACCCAGGCAAGCCTGTG-3’
-550:
5’-CAGGCAGTTTCCTCTGGAAGG-3’
60°C
884bp
+4位
(C/T)
F:
5'–CAGATTGTAGGACAGAGGGCAAGCT-3'
R:
5'AAGACGCTGCCACCATAC3'
65°C
146bp
六碱基缺失
(AAAGAG/-)
F:
5'–GCCTGCCAATGAGTAAAT-3'
R:
5'-GAGAATGAGTGGAAACCC-3
55°C
150bp
MBL54/MBL57
F:
5′-AGTCGACCCAGATTGTAGGACAGAG-3′
R:
5′-AGGATCCAGGCAGTTTCCTCTGGAAGG-3′
68°C
349bp
MBL52
F:
5’-CATCAACGGCTTCCCAGGCAAAGACGCG-3′
R:
5′-AGGATCCAGGCAGTTTCCTCTGGAAGG-3’
65°C
125bp
2.1.3.4限制性内切酶:
本实验所用限制性内切酶均购自大连宝生物公司,内切酶名称及酶切片段见表2-2:
表2-2:
限制性内切酶名称及酶切片段
野生纯合子
突变纯合子
杂合子
-70位(MspI)
137bp,25bp(CC)
162bp(TT)
162bp,137bp,25bp(CT)
-221位(MspI)
127bp,25bp(GG)
152bp(CC)
152bp,127bp,25bp(GC)
-336位(ApaLI)
191bp(AA)
183bp(TT)
191bp,183bp(AT)
-349位(HaeIII)
309bp,75bp(AA)
223bp,86bp,75bp(GG)
309bp,
- 配套讲稿:
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- 甘露 结合 蛋白 类风湿性关节炎