人血白蛋白工艺规程试行3Word格式文档下载.docx
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《中国药典》2010年版三部
4、产品的性状、功能与主治
4.1性状
本品为略黏稠、黄色或绿色至棕色澄明液体,不应出现浑浊。
4.2功能与主治
(1)失血创伤、烧伤引起的休克;
《中国药典》(2010年版三部)、
98年版《药品生产质量管理规范》
第2页共34页
(2)脑水肿及损伤引起的颅压升高;
(3)肝硬化及肾病引起的水肿或腹水;
(4)低蛋白血症的防治;
(5)新生儿高胆红素血症;
(6)用于心肺分流术、烧伤的辅助治疗、血液透析的辅助治疗和成人呼吸窘迫综合征。
5、批准文号及标准演变情况
5.1批准文号
10g:
国药准字S1*******
5g:
2g:
5.2标准演变情况
执行标准由《中国药典》2005年版三部《中国药典》2010年版三部。
6、保存、运输及有效期
室温(不超过30℃),避光保存和运输。
自半成品配制之日起有效期为3年。
二、基本要求
1、厂房设施及生产环境符合《药品生产质量管理规范》(98版)的要求,并取得《GMP认证证书》。
生产用设施及设备应专用。
2、关键性设备应经验证合格才能投入使用,已投入使用的设备要定期进行再验证或回顾性验证。
3、生产车间的人流、物流分开。
人流、物流各行其道,洁净区与非洁净区用明显的色标加以区别。
4、提取分离制品用操作间工作(环境)温度控制在0~10℃,防止分离过程中制品温度升高。
5、生产用的水源应符合国家饮用水标准,纯化水、注射用水应符合《中国药典》2010年版二部)的标准。
生产用水的制备、贮存、分配和使用均应符合98年版《药品生产质量管理规范》的要求。
80℃以上保温或70℃以上保温循环或4℃以下保温循环,
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制备后6小时内使用,制备后4小时内灭菌72小时内使用。
注射用水管道、储水罐及盛放制品的反应容器材质应为316L型不锈钢,使用前经钝化处理。
注射用水系统及制水工艺需定期进行再验证。
6、直接用于生产的金属器具或玻璃器具等生产用具必须严格清洗和灭菌处理,处理工艺定期进行再验证;
生产过程中使用的过滤介质应为无石棉的介质。
7、原料血浆的采集和质量应符合《中国药典》2005年版三部“血液制品生产用人血浆”的规定,-20℃或-20℃以下保存,用于分离人凝血因子VIII的血浆,保存期自血浆采集之日起应不超过1年。
用于分离其他血液制品的血浆,保存期自血浆采集之日起应不超过3年。
如果在低温贮存中发生温度升高,但未超过-5℃,时间未超过72小时,且血浆仍处于冰冻状态,仍可用于分离白蛋白和免疫球蛋白。
原料血浆投产前需逐袋复检,并符合原料血浆检疫期的要求,不合格血浆严禁投入生产使用。
每批投产混合血浆不低于1000人份,复检血浆使用国家批签发合格的检测试剂。
8、原材料、辅料、包装材料需检验合格才能投入生产使用。
9、每批制品或者每一工序结束,均应进行彻底清场、清洁、消毒,方可进入下一工序或下一批次生产。
10、不合格中间品或不合格半成品不得进入下一工序生产。
11、人员要求
11.1生产人员必须经过专业知识及GMP培训,并持有培训合格上岗证。
11.2从事血液制品生产的工作人员必须身体健康,至少每年进行一次身体检查,患传染病、皮肤病、体表有伤口者不得从事直接接触药品的生产。
12、建立完整的批生产和批检验记录。
详细记录生产、检验过程的实际情况,字迹清晰、数据完整、内容真实,不得随意撕毁。
不得随意修改记录内容,若需要修改时,按规定须用钢笔(蓝黑或碳素墨水)或碱性签字笔(黑色或蓝色的签字笔)修改,并有修改人签名、修改日期,原修改内容应清晰可见。
执行两人复核制度,由操作者和复核者签名,准确填写日期。
批生产、批检验记录跟随工艺流程步骤流转,最终由质量保证部汇总成册保存至产品有效期后一年。
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13、分批要求
由生产部门按《中国药典》2010年版三部中“生物制品分批规程”规定的程序,编制每批制品的生产批号和产品批号,由质量保证部审定。
在血浆投料时编制生产批号,按投料日期编制,编制为:
×
(年四位)×
(月二位)×
(日二位),共八位;
半成品配制时编制产品批号,编制为:
年+月+流水号,即×
(流水号二位),共八位数。
半成品配制日期即为生产日期,有效期为自半成品配制之日起三年。
三、工艺流程图:
生产前准备
生产指令:
生产技术部下达生产指令,指定投入原
料血浆批号、数量,原辅料领用量,制定生产批号,
质量保证部复核。
原材料、辅料领取:
按定额领取检定合格的原材料、
辅料。
领浆前准备:
周转筐使用前用注射用水冲洗干净,
融浆间按房间清洁SOP进行清洁。
领浆:
原料血浆称重后在规定区域内经消毒液擦拭
后装入洁净周转筐内。
融浆合并:
用低温注射用水冲洗血浆表面,使血浆和血浆袋分离。
用剪刀剪开血浆袋倒入融浆罐打开融浆罐搅拌及循环水(水温<35℃)使融浆罐内血浆温度保持在0~4℃并完全融化。
过程质量控制:
①并浆桶、融浆罐、反应罐、血浆输送管道系统使用前应经过20%或2%NaOH碱液处理,用注射用水冲洗干净,内毒素检测合格后使用。
②融浆循环水温度:
水温<35℃。
③原料血浆及原材料、辅料:
经检验合格并有质保
部的下发的放行通知。
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④合并血浆:
蛋白含量≥50g/L,HBsAg为阴性,
HCV、HIV1/2抗体为阴性,
抗-HBs≥0.05IU/ml。
分离冷沉淀
分离冷沉淀前准备:
所用的容器具及用具经去热原处理后使用。
房间温度为0~10℃。
离心机系统冲洗水送检内毒素<0.125EU/ml,
血浆在0~4℃条件下离心分离。
离心分离:
离心出液速度控制在≤2L/min/台,离
心出液温度控制在0~4℃。
冷沉淀(-30℃以下保存,用于生产
人凝血因子VIII)
凝胶吸附
凝胶吸附前准备:
所用的容器具及用具经去热原处理后使用
吸附后的凝胶用于人凝血酶原复合物
吸附后上清液
FI制作前准备:
所用的容器具及用具经去热原处理后使用,
配制pH4.0HAc-NaAc缓冲液降温至2~10℃。
FI制作:
用pH4.0HAc-NaAc缓冲液调pH7.10±
0.10,
制品降温至0℃后加-15℃以下的95%乙醇,
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制品最终乙醇浓度至8%,制品最终温度–2.5±
0.5℃。
过程质量控制:
①制作FI反应液时易产生泡沫,在反应液制作搅拌时应尽量减少泡沫的产生。
②制品最终温度控制在-2.5±
0.5℃不得超出温度范围。
③95%乙醇的温度必须降到-15℃以下。
④反应制作的制品温度在乙醇加入过程中缓慢降至-2.5±
FI混合液
离心前准备:
配制8%乙醇平衡液降温至–2.5±
0.5℃,
反应罐冲洗水送检内毒素<0.125EU/ml。
分离:
房间温度为0~10℃,
离心出液速度控制在≤2L/min/台,离心液温度为-2.0±
1.0℃,离心液澄清。
①收集FI上清滤液的反应罐和其他直接接触制品的容
器具等应做去热原处理。
②离心过程中检查出液速度≤2L/min/台,出液温度-2.0±
1.0℃。
FⅠ沉淀(于-30℃以下保存或直接生产
人纤维蛋白原)。
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FⅠ上清
FII+III制作前准备:
FII+III制作:
用pH4.0HAc-NaAc缓冲液调pH6.95±
0.15,
加-15℃以下的95%乙醇,
制品最终乙醇浓度至20%,
制品最终温度–5.0±
过程质量控制:
①直接接触制品的容器具应做去热原处理。
②制品最终温度控制在-5.0±
③在加入95%乙醇时,乙醇温度不能高于-15℃。
FII+III混合液
压滤前准备:
压滤机(滤板615×
615)冲洗水送检内毒素
<0.125EU/ml,
配制20%乙醇平衡液降温至–5.0±
0.5℃,准备硅藻土,珍珠岩。
压滤:
工作压力<0.2MPa,
滤液温度为–4.5±
1.0℃,滤液澄清。
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过程质量控制:
1收集FII+III上清滤液的反应罐和收集沉淀及其
他直接接触制品的容器具等应做去热原处理。
②压滤过程中滤液温度–4.5±
③压滤压力<0.2MPa。
FII+III沉淀
(-30℃以下冻存用于生产免疫球蛋白储存期不超过6个月,或高压灭菌后销毁)
FII+III上清
FIV-1制作前准备:
FIV-1制作:
用pH4.0HAc-NaAc缓冲液调pH5.25±
①直接接触制品的容器具应做去热原处理。
FIV-1混合液
压滤前准备:
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滤液温度为–4.5±
①收集FIV-1上清滤液的反应罐和收集沉淀及其他直接接触制品的容器具等应做去热原处理。
FIV-1沉淀
(冻存或经高压灭菌后销毁处理)
FIV-1上清
FIV-4制作前准备:
配制1mol/L碳酸氢钠降温至2~10℃备用。
FIV-4制作:
用1mol/L碳酸氢钠调pH值5.90±
0.20,
制品最终乙醇浓度至40%,
③在加入95%乙醇时乙醇温度不能高于-15℃。
FIV-4混合液
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配制40%乙醇平衡液降温至–5.0±
0.5℃,准备硅藻土,反应罐冲洗水送检内毒素<0.125EU/ml。
①收集FIV上清滤液的反应罐和收集沉淀及其他直接接触制品的容器具等应做去热原处理。
②压滤过程中滤液的温度–4.5±
FIV-4沉淀
FIV-4上清
FV制作前准备:
配制2mol/LHAc-40%乙醇,降温至2~10℃。
FV制作:
用2mol/LHAc-40%乙醇调pH值4.75±
0.05,制品最终温度–7.5±
1直接接触制品容器具应做去热原处理。
②制品最终温度控制在-7.5±
FV混合液
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配制40%乙醇溶液–7.5±
0.5℃,准备珍珠岩。
房间温度为0~10℃,工作压力<0.2MPa,
滤液温度为–5.0℃以下。
质量控制:
①收集FV沉淀的容器具应做去热原处理。
②压滤过程中滤液的温度–5.0℃以下,并检测有无蛋白泄漏。
FV沉淀FV上清(乙醇回收)
精制纯化前准备:
反应罐冲洗水送检内毒素﹤0.125EU/ml,
8%乙醇溶液降温至0~5℃,
配制12%乙醇降温至–2.5±
配制1mol/LNaHCO3溶液降温至2~10℃。
FV纯化液
精制纯化:
组分V沉淀用5倍体积的8%乙醇溶液(0~5℃)搅拌溶解,用pH4.0HAc-NaAc缓冲液调pH4.55±
0.05,继续搅拌1小时以上,最终温度为–2.5±
0.5℃,静置2小时以上。
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过滤,过滤压力<0.2MPa,滤液温度-1.5±
1.0℃,
1mol/LNaHCO3溶液调pH6.95±
0.25。
①沉淀溶解用8%乙醇溶液温度:
0~5℃
2反应罐、压滤机(滤板615×
615)冲洗水内毒
素:
<0.125EU/ml
③压滤压力:
<0.2MPa
④pH值:
6.95±
0.25
超滤
超滤前准备:
超滤间按清洁SOP清洁,0.9%生理盐水和透析注射用水降温至2~8℃,超滤系统清洗水送检内毒素﹤0.125EU/ml。
超滤:
首次浓缩蛋白含量10~15%,用5~6倍制品体积量的0.9%生理盐水透析用3~4倍制品体积的注射用水透析,前压不得大于0.4MPa,后压不得大于0.02MPa,
残余乙醇含量≤0.025%,蛋白质含量≥21.0%,
纯度≥96.5%,pH值6.50~7.30。
①0.9%生理盐水和透析注射用水温度:
2~8℃
超滤系统清洗水内毒素:
<0.125EU/ml。
③超滤前压≤0.4MPa,后压≤0.02MPa。
每30min检测一次有无蛋白泄漏。
超滤后原液
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稀释配制:
辛酸钠加量为0.160mmol/g蛋白质,
(1mol/LNaHCO3或2mol/LHAc)调pH6.60~7.20,
蛋白质含量稀释至195~205g/L,
内毒素<1.67EU/ml。
①制品在超滤间保存温度:
2~8℃。
②配制时间:
超滤后4小时内稀释配制完。
配制后半成品
病毒灭活前准备:
灭活罐清洗水样送检内毒素<0.125EU/ml,
物料输送管道清洗水样送检内毒素<0.125EU/ml,
病毒灭活
病毒灭活:
60℃±
0.5℃恒温10hr,降温至室温。
1病毒灭活温度:
60±
0.5℃
2观察温度间隔时间:
30min
病毒灭活后半成品
除菌分装前准备:
1)内包材清洗灭菌:
瓶子(精洗,330℃~350℃≥5min烘箱灭菌)
胶塞(粗洗,精洗,121℃~126℃1h湿热灭菌)铝盖(清洗,121℃~126℃1h湿热灭菌)
2)分装用具清洗灭菌:
除菌滤器(准备,过滤注射用水冲洗10min以上,
完整性试验,压力≥3.1bar,过滤注射用水冲洗后,121℃~126℃1h湿热灭菌)
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储液罐(准备,121℃~126℃1h湿热灭菌)
分装用具(准备,121℃~126℃1h湿热灭菌)
过滤注射用水(准备,121℃~126℃1h湿热灭菌)
除菌分装:
除菌前完整性试验:
压力≥3.1bar
除菌:
压力≤2.0bar
除菌后完整性试验:
压力≥3.1bar
分装装量:
10克/瓶:
51.0ml5克/瓶:
25.6ml
2克/瓶:
10.5ml
分装后半成品
抽样:
抽样量至少为0.1%,做半成品无菌检查
孵放:
30~32℃,至少14天外观、可见异物检查(照度2000~3000LX)
全检抽样:
10g/瓶抽样量至少为28瓶,5g/瓶抽样
量至少为30瓶,2g/瓶抽样量至少为32瓶,做全
检
1孵放温度:
30~32℃
2孵放时间:
不少于14天
3可见异物检查:
照度2000~3000LX,用白板和
黑板
白蛋白待检品
包装前灯检(照度2000~3000LX)
包装
白蛋白成品
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四、操作过程及工艺条件
1、原材料、辅料领取与试剂配制:
根据生产指令的投料量,定额领取原材料、辅料。
在使用前配制pH4.0HAc-NaAc缓冲液、2mol/LHAc溶液、2mol/LHAc-40%乙醇溶液、1mol/LNaHCO3溶液等备用。
pH4.0HAc-NaAc缓冲液:
称取醋酸钠108.8g,量取冰醋酸226.6ml,加注射用水溶解至1L,降温至2~10℃。
2mol/LHAc溶液:
量取冰醋酸113.3ml,加注射用水至1L,降温至2~10℃。
2mol/LHAc-40%乙醇溶液:
量取冰醋酸113.3ml,95%乙醇421ml,加注射用水至1L,降温至2~10℃。
1mol/LNaHCO3溶液:
称取碳酸氢钠84g,加注射用水溶解至1L,降温至2~10℃。
2、原料血浆领取与融浆合并:
从冷库中领取合格血浆,用75%乙醇溶液擦洗血浆袋表面做消毒处理,用低温注射用水冲洗血浆袋表面,使血浆和血浆袋分离。
破袋融浆:
用剪刀剪开血浆袋倒入融浆罐,打开融浆罐搅拌及循环水(水温<35℃)使融浆罐内血浆温度保持在0~4℃并完全融化。
合并,通过血浆输送管道泵入反应罐。
取样检测,合并血浆蛋白含量≥50g/L,HbsAg为阴性,HCV抗体、HIV1/2抗体为阴性,抗-HBs为阳性。
3、人血白蛋白分离提取:
3.1分离冷沉淀:
离心:
血浆在0~4℃条件下,用离心机进行分离;
离心出液速度控制在≤2L/min/台;
离心出液控制在0~4℃。
收集冷沉淀,于-30℃以下保存,沉淀用于生产人凝血因子Ⅷ。
3.2凝胶吸附:
将离心后的上清液凝胶吸附,吸附后的血浆并入到未经凝胶吸附的离心上清液中,制作分离组分I。
3.3组分I制作与分离
准确计量吸附后或未吸附的合并血浆体积,用pH4.0HAc-NaAc缓冲液调整pH7.10±
0.10,降温至0℃后,加入-15℃以下的95%乙醇,加乙醇速度≤60L/h,使制品最终乙醇浓度达到8%(v/v)。
在加入乙醇过程中制品温度始终不得高于0℃,制品最终温度控制在-2.5±
0.5℃,将反应罐底部未反应完全制品放出倒入反应罐内混合,准确计
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量反应液体积,继续搅拌1小时,复测pH应为pH7.10±
0.10,否则应矫正至此范围内。
用离心机,离心出液速度控制在≤2L/min/台,控制离心出液温度为-2.0±
1.0℃,并用组分I平衡液清洗离心筒及管道后并入上清中,将离出液传送至下一道工序。
沉淀于-30℃以下保存或直接生产人纤维蛋白原。
V95%乙醇(L)=(V血浆滤液L+VpH4.0缓L)×
0.092
组分I8%乙醇平衡液配制:
注射用水1000L,95%乙醇92L,NaCl9Kg。
平衡液pH7.10±
0.10,温度-2.5±
制品pH测定:
为25±
2.0℃、生理盐水稀释至10%乙醇含量条件下,复合电极测定结果。
以下各血浆分级提取步骤pH值测定与此相同。
3.4组分Ⅱ+Ⅲ制作与分离
准确计量FⅠ离心液体积,用pH4.0HAc-NaAc缓冲液调整pH6.95±
0.15,加入-15℃以下的95%乙醇,
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