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铜兰蛋白
α2巨球蛋白
β2微球蛋白
转铁蛋白
C3补体
γ球蛋白
IgG-A-M_D-E
血清蛋白操作要点
标本采集:
取新鲜血清进行分析。
采血按照临床实验室检测要求进行。
血清置于冰箱内(2-8℃)可保存一周,冰冻可保存一个月。
注意:
1.如取血浆的标本进行分析,电泳后在β-γ区有纤维蛋白原条带出现,与在此区带出现的免疫球蛋白区带有可能重叠,需重新取血清标本再分析。
2.解冻的标本在点样处可呈现出蛋白质或脂蛋白变性引起的痕迹。
3.切勿使用溶血的标本,因会在α2-β区出现血红蛋白带,影响分析。
结果分析:
1.取出胶片后,清洁胶片的背面。
2.分析时首先注意各区带的含量,有无β-γ桥。
3.特别注意有无异常带出现,如单克隆条带、轻链等。
血清蛋白电泳
血清蛋白是血浆中主要成分,有300多种,每种蛋白均承担一定的生理功能(如白蛋白、球蛋白、补体成分等)。
很多疾病可引起各种蛋白的变化,因此分析这些蛋白的变化在临床上有重要意义,并可随访病情、推测预后。
血清蛋白电泳主要分为5个区带:
白蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、
β球蛋白、γ球蛋白。
异常蛋白电泳图谱的鉴别主要要察看区带的浓度以及有无异常多出的区带。
以下疾病在蛋白电泳图谱中可早期发现:
总蛋白浓度Albα1α2βγ
双白蛋白血症双峰
感染综合症
急性炎症N↓N↑↑N
慢性炎症↓↑↑↑
肝病综合症
肝炎↓N↓↓↑↓↓↓↑
肝硬化↓N↑↓↓N↓N↓β-γ桥
肝癌↓N↓↓甲胎蛋白N↓N↑N
低蛋白血症↓↓↓↓N↑N↑↓N↑
肾病综合症↓↓↓↓↑↑↑↓N↑
M蛋白血症←M蛋白峰→
蛋白缺陷型←白蛋白或某种球蛋白↓↓→
血红蛋白电泳
血红蛋白电泳是地中海贫血的重要诊断手段之一。
地中海贫血又名珠蛋白生成障碍性贫血,是遗传性贫血,因基因突变影响血红蛋白的正常生成而引起。
地中海贫血主要分为两种α地贫和β地贫。
电泳图谱可见异常的区带,(A2增高、快速带、S/D、C/E等)
以下疾病的异常图谱特征:
HbAHbA2
α地贫有H带/Bart’s带↓
β地贫↓3.5%〈↑〈8%
HbH病有H带出现
血红蛋白Bart’s
胎儿水肿综合症有Bart’s带出现〉80%
S/D病有S/D出现
C/E病有C/E出现
注:
血红蛋白电泳的实验结果需和血液病学的其他实验结果综合分析,如异丙醇试验、抗碱试验、变性珠蛋白小体实验等。
如需进一步确诊可进行钛链分析。
糖化血红蛋白(HbA1c)电泳
血红蛋白糖基化是红细胞内的葡萄糖和血红蛋白钛链N末端氨基之间的一非酶促反应过程。
这一反应发生于红细胞整个生命周期。
糖化血红蛋白的形成速度有关,而与胰岛素无关;
糖化血红蛋白存在于红细胞整个120天的生命周期。
糖化血红蛋白的水平与测定前数周内的血糖水平有关,因此可用于作为糖尿病长期控制的指标。
糖化血红蛋白水平不受年龄、性别、病程、疗法和合并症的影响,在临床应用中有其独特的特点。
糖化血红蛋白的量还是评价治疗效果的一项指标。
临床上HbA1c的正常范围为3%-6%。
注:
糖化血红蛋白因不同的检测方法正常值也不同,且差异较大。
尿蛋白电泳
肾脏是人体重要的排泄器官。
肾脏的病变可引起尿蛋白的变化。
在正常情况下,仅见少量白蛋白(50-150mg/24h),尿蛋白常为阴性。
依尿蛋白产生机制大致可分为肾小球性、肾小管性、混合性、分泌性和组织性等类型,临床最为常见的是肾小球性、肾小管性。
蛋白尿的分型及临床意义:
1.生理性蛋白尿:
见少量白蛋白,其他大小分子均未出现。
2.肾小球性蛋白尿:
由于肾小球滤膜的损伤,引致大分子蛋白分子透过滤膜,而肾小管无法将大分子蛋白重吸收,终尿可发现大、中分子蛋白,主要包括:
白蛋白、转铁蛋白、IgG、IgA、IgM、α2巨球蛋白、触珠蛋白;
临床上以尿蛋白2g/天,量多为特点,常见于贫血、糖尿病、高血压、甲亢、中毒、感染等。
3.肾小管性蛋白尿:
由于肾小管受损,重吸收功能障碍,由于肾小球功能完好,大分子未被滤过,终尿可发现小分子蛋白,主要包括:
β2微球蛋白、视黄醇结合蛋白、轻链、α1微球蛋白、溶菌酶及少量的白蛋白。
临床上尿蛋白2g/天,常见于感染(细菌、病毒)、药物中毒、多发性骨髓瘤等。
4.混合性蛋白尿:
即肾小管、肾小球同时受损,终尿可发现上述所有分子。
5.溢出性蛋白尿:
属肾前性蛋白尿,可在小分子区发现少量的深染条带。
临床上见于高血压、高热、心脏及肝脏衰竭等。
免疫固定(IF)电泳
鉴定某一蛋白成分最好的方法是通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性,免疫固定电泳技术是目前应用最广泛的方法之一。
在单价特异抗体的帮助下,进行免疫固定使识别在电泳过程中检测到的各种单克隆带成为可能。
试验分三步进行:
1)在琼脂糖凝胶上对样品进行电泳。
2)对各种特异的蛋白进行固定及免疫沉淀。
3)对沉淀的各部分进行清洗
这种简单快捷的技术给出了清晰的图像、很容易对其解释。
这使得检测和识别各种单克隆蛋白成为可能。
在同样的凝胶上进行电泳,使直接比较,在电泳图上观察到的异常和单价特异抗体检测到的清晰的带成为可能。
临床意义:
对多发性骨髓瘤、Waldenstrom巨球蛋白血症、分泌型骨髓瘤、轻链病、重链病等研究有重大意义。
出现一种单克隆带(副蛋白或一种单克隆γ球蛋白病)。
双克隆γ球蛋白病(或双球蛋白障碍血)或呈单体及多聚体状态的病变蛋白。
出现了一种完整的病变蛋白,伴随过量的游离轻链:
在这种情况下,用抗游离轻链本周氏蛋白套件进一步确证。
本周氏蛋白电泳
浆细胞病如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症时产生的一种蛋白质,40-60℃时可发生凝固,90-100℃时又可溶解,称为本-周氏蛋白或凝溶蛋白。
临床意义:
1.一般认为,当浆细胞恶性增殖时,可能有过多的轻链产生或重链的合成被抑制,致使过多的轻链通过尿液排出。
2.约50%的多发性骨髓瘤患者及约15%的巨球蛋白血症患者,其尿液可出现本-周氏蛋白。
3.肾淀粉样变、慢性肾盂肾炎及恶性淋巴瘤患者等,亦可出现本周氏蛋白。
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