常用培养基配方Word下载.docx
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30血琼脂
31营养琼脂
32营养肉汤
33乳糖胆盐发酵管
34乳糖发酵管
35EC肉汤
36缓冲蛋白胨水(BP)
37氯化镁孔雀绿增菌液(MM)
38四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)
39四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法)
40亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)
41GN增菌液
42肠道菌增菌肉汤
43亚硫酸铋琼脂(BS)
44DHL琼脂
45HE琼脂
46SS琼脂
47WS琼脂
48麦康凯琼脂
49伊红美蓝琼脂(EMB)
50三糖铁琼脂(TSI)
51三糖铁琼脂(换用方法)
52克氏双糖铁琼脂(KI)
53克氏双糖铁琼脂(换用方法)
54葡萄糖半固体发酵管
555%乳糖发酵管
56CAYE培养基
57Honda氏产毒肉汤
58Elek氏培养基(毒素测定用)
59氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基
60胰蛋白胨水
61Rustigian氏尿素培养液
62氯化钠结晶紫增菌液
63氯化钠蔗糖琼脂
64嗜盐菌选择性琼脂
653.5%氯化钠三糖铁琼脂
66氯化钠血琼脂
673.5%氯化钠生化试验培养基
68改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用)
69CIN-1培养基
70嗜盐性试验培养基
01糖发酵管
成分:
牛肉膏5g
蛋白胨10g
氯化钠3g
磷酸氢二钠(Na2HPO4·
12H2O)2g
0.2%滇麝香草酚蓝溶液12mL
蒸馏水1000mL
pH7.4
制法:
1葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5%加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内,121℃高压灭菌15min.
2其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶100mL,121℃高压灭菌15min.另将各种糖类分别配好10%溶液,同时高压灭菌.将5mL糖溶液加入于100mL培养基内,以无菌操作分装小试管.
注:
蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌.
试验方法:
从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于36℃±
1℃培养,一般观察2~3d.迟缓反应需观察14~30d.
邻硝基酚β-D-半乳糖昔(ONPG)60mg
(O-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside)
0.01mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5)10mL
1%蛋白胨水(PH7.5)30mL
将ONPG溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,以过滤法除菌,分装于10mm×
75mm试管,每管0.5mL,用橡皮塞塞紧.
自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种,于36±
1℃培养1~3h和24h观察结果.如果β-半乳糖苷酶产生,则于1~3h变黄色,如无此酶则24h不变色.
03西蒙氏柠檬酸盐培养基
氯化钠5g
硫酸镁(MgSO4·
7H2O)0.2g
磷酸二氢铵1g
磷酸氢二钾1g
柠檬酸钠5g
琼脂20g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液40mL
pH6.8
先将盐类溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化.然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121℃高压灭菌15min.放成斜面.
挑取少量琼脂培养物接种,于36±
1℃培养4d,每天观察结果.阳性者斜面上有菌落生长,培养基从绿色转为蓝色.
04缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)
磷酸氢二钾5g
多胨7g
葡萄糖5g
pH7.0
溶化后校正pH,分装试管,每管1mL,121℃高压灭菌15min.
甲基红(MR)试验:
自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中,于36±
1℃培养2~5d,哈夫尼亚菌则应在22~25℃培养.滴加甲基红试剂一滴,立即观察结果.鲜红色为阳性,黄色为阴性.甲基红试剂配法:
10mg甲基红溶于30mL95%乙醇中,然后加入20mL蒸馏水.
V-P试验:
用琼脂培养物接种本培养基中,于36±
1℃培养2~4d.哈夫尼亚菌则应在22~25℃培养.加入6%α-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0.2mL,充分振摇试管,观察结果.阳性反应立刻或于数分钟内出现红色,如为阴性,应放在36±
1℃下培养4h再进行观察.
柠檬酸钠3g
葡萄糖0.2g
酵母浸膏0.5g
单盐酸半胱氨酸0.1g
磷酸二氢钾1g
氯化钠5g
0.2%酚红溶液6mL
琼脂15g
加热溶解,分装试管,121℃高压灭菌15min.放成斜面.
用琼脂培养物接种整个斜面,在36±
1℃培养7d,每天观察结果.阳性者培养基变为红色.
06丙二酸钠培养基
酵母浸膏1g
硫酸铵2g
磷酸氢二钾0.6g
磷酸二氢钾0.4g
氯化钠2g
丙二酸钠3g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液12mL
先将酵母浸膏和盐类溶解于水,校正pH后再加入指示剂,分装试管,121℃高压灭菌15min.
用新鲜的琼脂培养物接种,于36±
1℃培养48h,观察结果.阳性者由绿色变为蓝色.
07葡葡糖铵培养基
葡萄糖2g
先将盐类和糖溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化,然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121℃高压灭菌15min,放成斜面.
用接种针轻轻触及培养物的表面,在盐水管内做成极稀的悬液,肉眼观察不见混浊,以每一接种环内含菌数在20~100之间为宜.将接种环灭菌后挑取菌液接种,同时再以同法接种普通斜面一支作为对照.于36±
1℃培养24h.阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长;
阴性者不生长,但在对照培养基上生长良好.如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果.
容器使用前应用清洁液浸泡.再用清水,蒸馏水冲洗干净,并用新棉花做成棉塞,干热灭菌后使用.如果操作时不注意,有杂质污染时,易造成假阳性的结果.
蛋白胨2g
磷酸氢二钾0.3g
琼脂4g
葡萄糖10g
pH7.2
将蛋白胨和盐类加水溶解后,校正pH至7.2.加入葡萄糖,琼脂煮沸,溶化琼脂,然后加入指示剂.混匀后,分装试管,121℃高压灭菌15min,直立凝固备用.
从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种,同时接种两支培养基,其中一支于接种后滴加溶化的1%琼脂液于表面,高度约1cm,于36±
1℃培养.
马尿酸钠1g
肉浸液100mL
将马尿酸钠溶解于肉浸液内,分装于小试管内,并于管壁画一横线.以标志管内液面高度,高压灭菌121℃20min.
试剂:
三氯化铁(FeCl3·
6H2O)12g,溶于2%盐酸溶液100mL中即成.
用纯培养物接种,于42℃培养48h,观察培养液是否到达试管壁上记号处,如不足时,用蒸馏水补足至原量.经离心沉淀,吸取上清液0.8mL,加入三氯化铁试剂0.2mL,立即混合均匀,经10~15min,观察结果.
结果:
出现恒久之沉淀物为阳性.
蛋白胨5g
牛肉膏3g
明胶120g
pH6.8~7.0
加热溶解,校正至pH7.4~7.6,分装小管,121℃高压灭菌10min,取出后迅速冷却,使其凝固.复查最终pH应为6.8~7.0.
用琼脂培养物穿刺接种,放在22~25℃培养,每天观察结果,记录液化时间.或放在36士1℃培养,每天取出,放冰箱内30min后再观察结果.
酵母浸膏3g
DI-苯丙氨酸(或L-苯丙氨酸1g)2g
磷酸氢二钠1g
琼脂12g
加热溶解后分装试管,121℃高压灭菌15min,使成斜面.
自琼脂斜面上挑取大量培养物,移种于苯丙氨酸琼脂,在36±
1℃培养4h或18~24h.滴加10%三氯化铁溶液2~3滴,自斜面培养物上流下,苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色.
葡萄糖1g
1.6%滇甲酚紫-乙醇溶液1mL
L-氨基酸或DL-氨基酸0.5或1g/100mL
除氨基酸以外的成分加热溶解后,分装每瓶100mL,分别加入各种氨基酸:
赖氨酸,精氨酸和鸟氨酸.L-氨基酸按0.5%加入,DL-氨基酸按1%加入.再行校正pH至6.8.对照培养基不加氨基酸.分装于灭菌的小试管内,每管0.5mL,上面滴加一层液体石蜡,115℃高压灭菌10min.
从琼脂斜面上挑取培养物接种,于36±
1℃培养18~24h,观察结果.氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱,培养基应呈紫色.阴性者无碱性产物,但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色.对照管应为黄色.
蛋白胨(或胰蛋白胨)20g
按上述成分配制,分装小试管,121℃高压灭菌15min.
靛基质试剂
柯凡克试剂:
将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中.然后缓慢加入浓盐酸25mL.
欧-波试剂:
将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内.然后缓慢加入浓盐酸20mL.
挑取小量培养物接种,在36±
1℃培养1~2d,必要时可培养4~5d.加入柯凡克试剂约0.5mL,轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色;
或加入欧-波试剂约0.5mL,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色.
蛋白胨中应含有丰富的色氨酸.每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用.
硫酸亚铁0.2g
硫代硫酸钠0.3g
加热溶解,校正pH,分装试管,115℃高压灭菌15min,取出直立候其凝固.
挑取琼脂培养物,沿管壁穿刺,于36±
1℃培养1~2d,观察结果.产硫化氢者使培养基变为黑色.
肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生,应采用三糖铁琼脂或本培养基.
蛋白胨1g
磷酸二氢钾2g
0.4%酚红溶液3mL
20%尿素溶液100mL
pH7.2±
0.1
将除尿素和琼脂以外的成分配好,并校正pH,加入琼脂,加热溶化并分装烧瓶.121℃高压灭菌15min.冷至50~55℃,加入经除菌过滤的尿素溶液.尿素的最终浓度为2%,最终pH应为7.2±
0.1.分装于灭菌试管内,放成斜面备用.
挑取琼脂培养物接种,在36±
1℃培养24h,观察结果.尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色.
磷酸二氢钾0.225g
磷酸氢二钠5.64g
0.5%氰化钾溶液20mL
pH7.6
将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶,121℃高压灭菌15min.放在冰箱内使其充分冷却.每100mL培养基加入0.5%氰化钾溶液2.0mL(最后浓度为1:
10000),分装于12mm×
100mm灭菌试管,每管约4mL,立刻用灭菌橡皮塞塞紧,放在4℃冰箱内,至少可保存两个月.同时,将不加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装试管备用.
1%盐酸二甲基对苯二胺溶液:
少量新鲜配制,干冰箱内避光保存.
1%α-萘酚-乙醇溶液.
取白色洁净滤纸沾取菌落.加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴,阳性者呈现粉红色,并逐渐加深;
再加α-萘酚溶液一滴,阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色.阴性于两分钟内不变色.以毛细吸管吸取试剂,直接滴加于菌落上,其显色反应与以上相同.
硝酸钾0.2g
蛋白5g
溶解,校正pH,分装试管,每管约5mL,121℃高压灭菌15min.
硝酸盐还原试剂:
甲液:
将对氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中.
乙液:
将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中.
接种后在36±
1℃培养1~4d,加入甲液和乙液各一滴,观察结果.硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色.
本试验阴性的原因有三:
细菌不能还原硝酸盐;
亚硝酸盐继续分解,生成氨和氮;
培养基不适于细菌的生长.如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解,可再加入锌粉少许,可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色.
1%盐酸二甲基对苯二胺溶液.
取37℃(或低于37℃)培养20h的斜面培养物一支,将两种试剂各2~3滴,从斜面上端滴下,并将斜面略加倾斜,使试剂混合液流经斜面上的培养物.如系平板培养物,则可用试剂混合液滴在菌落上.
于2min内呈现蓝色者为阳性.阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应,2min以后出现微弱或可疑反应均作为阴性结果.
3%过氧化氢溶液:
临用时配制.
挑取固体培养基上菌落一接种环,置于洁净试管内,滴加3%过氧化氢溶液2mL,观察结果.
于半分钟内发生气泡者为阳性,不发生气泡者为阴性.
2%儿茶酚溶液.
3%过氧化氢溶液.
挑取固体培养基上菌落一接种环,置于洁净试管内,滴加2%儿茶酚溶液1mL及3%过氧化氢溶液1mL.静置于室温(20℃)中30~60min,观察结果.
阳性反应,细菌变为黑褐色;
阴性反应,细菌不变色.
过氧化物酶的作用可受氰化钾的抑制.
储存液
磷酸二氢钾34g
1mol/L氢氧化钠溶液175mL
蒸馏水825mL
pH7.2
先将磷酸盐溶解于500mL蒸馏水中,用1mol/L氢氧化钠溶液校正pH后,再用蒸馏水稀释至1000mL.
稀释液:
取储存液1.25mL,用蒸馏水稀释至1000mL.分装每瓶100mL或每管10mL,121℃高压灭菌15min.
明胶2g
磷酸氢二钠4g
pH6.2
加热溶解,校正pH,121℃高压灭菌15min.
苯酚10g
乳酸(比重1.21)10g
甘油20g
蒸馏水10mL
将苯酚在水中加热溶解,然后加入乳酸及甘油.
用途:
检验真菌形态时用.
绞碎牛肉500g
磷酸氢二钾2g
将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL,混合后放冰箱过夜,除去液面之浮油,隔水煮沸半小时,使肉渣完全凝结成块,用绒布过滤,并挤压收集全部滤液,加水补足原量.加入蛋白胨,氯化钠和磷酸盐,溶解后校正pH7.4~7.6煮沸并过滤,分装烧瓶,121℃高压灭菌30min.
肉浸液肉汤(PH7.4)1000mL
琼脂17~20g
加热溶化琼脂,分装烧瓶或试管,121℃高压灭菌30min.根据需要,倾注平板或放成斜面.
绞碎牛肉(或牛心)1000g
15%氢氧化钠溶液27mL
胰蛋白酶40mL
三氯甲烷1mL
氯化钠10g
蒸馏水2000mL
1称取碎牛肉,加蒸馏水,隔水加热到80℃,维持15min.
2加氢氧化钠溶液,对pH试纸呈弱碱性,冷至40℃.
3加胰蛋白酶,氯仿,在36±
1℃放置4~5h,每小时摇动一二次.
44h后,吸取上层液5mL于试管中,加5%硫酸铜溶液0.1mL,4%氢氧化钠溶液5mL,混合之.若呈红色,则不须再消化,可由温箱取出.
5加入15%乙酸溶液45mL,对pH试纸呈酸性.
6煮沸15min,使胰蛋白酶破坏,冷后,放冰箱内一夜.
7次日吸取上层清液,加氯化钠10g,并加水补足原量,煮沸.
8校正pH7.4~7.6(加15%氢氧化钠溶液约10mL),加热,用滤纸过滤,分装烧瓶,121℃高压灭菌20min.
①此培养基可作为琼脂培养基的基础,不需加蛋白胨.
②胰蛋白酶之配制:
称取去脂绞碎的猪胰500g,加入乙醇500mL,蒸馏水1500mL,混合之,装人玻塞瓶内.每日摇匀三次.3d后,用绒布过滤挤出其汁,加盐酸至0.05%,放冰箱内保存备用.
绞碎猪胃100g
绞碎猪血块100g
浓盐酸10mL
1洗涤猪胃,除去油脂,保留胃粘膜,用绞肉机绞碎.
2用绞肉机将猪血块绞碎.
3将蒸馏水加热至55℃,加入猪胃,猪血块和盐酸,置55℃水浴中24h,时常加以摇动.
4从水浴内取出,加入1moL/L碳酸钠溶液5mL,煮沸10min,置于冰箱内一夜.
5吸取上层清液,加磷酸氢二钾1g,加热至75℃,加入1mol/L碳酸钠溶液45mL,煮沸,校正pH7.2~7.4.
6用滤纸过滤,分装烧瓶,121℃高压灭菌20min.
牛心消化汤(PH7.4~7.6)1000mL
黄豆粉浸液50mL
将琼脂加在牛心消化汤内,加热溶解,过滤.加入豌豆粉浸液,分装每瓶100mL,121℃高压灭菌15min.
豌豆粉浸液制法:
取豌豆粉5g,氯化钠10g,加入蒸馏水100mL.置100℃水浴内加热1h,放于冰箱中过夜.吸取上清液即为豌豆浸液.
pH7.4~7.6豆粉琼脂100mL
脱纤维羊血(或兔血)5~10mL
加热溶化琼脂,冷至50℃,以灭菌手续加入脱纤维羊血,摇匀,倾注平板.亦可分装灭菌试管,置成斜面.亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂.
牛肉膏3g
琼脂15~20g
将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内,加入15%氢氧化钠溶液约2mL,校正pH至7.2~7.4.加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化.分装烧瓶,121℃高压灭菌15min.
此培养基可供一般细菌培养之用,可倾注平板或制成斜面.如用于菌落计数,琼脂量为1.5%;
如作成平板或斜面,则应为2%.
蛋白陈10g
按上述成分混合,溶解后校正pH,分装烧瓶,每瓶225mL,121℃高压灭菌15min.
蛋白胨20g
猪胆盐(或牛,羊胆盐)5g
乳糖10g
0.04%滇甲酚紫水溶液25mL
将蛋白胨,胆盐及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,分装每管10mL,并放入一个小倒管,115℃高压灭菌15min.
双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍.
0.04%溴甲酚紫水溶液25mL
将蛋白胨及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,按检验要求分装30mL,10mL或3mL,并放入一个小倒管,115℃高压灭菌15min.
①双料乳糖发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍.
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