HPLC验证方案剖析Word格式.docx
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3.1成员组成:
部门
姓名
职务
3.2分工
(1)由QC负责制订本验证方案。
(2)由QA负责确认本验证方案。
(3)由QC负责进行本验证方案的具体执行。
(4)由QC负责编写验证报告。
3.3.职责划分:
(1)验证小组负责本验证方案的设计、批准及实施。
(2)QC负责按本验证方案对受试仪器进行验证,并及时报告验证结果,提供验证原始数据。
(3)验证小组组长全面协调各项验证工作,负责报告验证结果、审核验证的评价与建议以及相应的结论,并在验证过程中提供相关的技术支持。
4.偏差解决
偏差指的是任何的测试失败,偏离规格,缺失文件,或重大偏离已建立的程序而导致潜在的GMP符合性影响。
对于一个偏差事件,偏差必须被审核并评估确定导致偏差的根源。
另外,根据设备的状态对偏差的影响进行分析。
如必要,必须进行偏差原因的调查,将调查结果包括在“偏差和解决报告”中,偏差的解决(如需要采取的纠正措施,或不采取任何纠正措施但接受该偏差)和说明也包括在“偏差和解决报告”中,如需要纠正措施将会影响部分确认,这些部分的确认测试将延迟至改正措施完成。
偏差还需要完整的记录在“偏差记录”中并在最终总结报告中讨论。
所有的偏差报告和相关的文件必须包括在最终的确认文件中。
5.变更控制
所有的变更和修正将根据相应的变更程序进行。
如果需要进行变更,应对其作单独评估以决定是否有必要进行再确认。
6.验证内容
6.1安装确认
6.1.1仪器基本情况:
设备名称
液相色谱仪
设备编号
R211-JY-04
型号
Waters515+UV2487
生产厂家
美国waters公司
操作软件
浙江智达N2000
安装位置
精密仪器室
检查人:
日期:
复核人:
6.1.2安装确认所需文件资料
工程部在设备开箱验收后建立设备档案,整理使用手册等技术资料,归档保存。
资料档案:
资料档案
数量
存放处
Waters515泵使用说明书
1
工程部
UV2487使用说明书
AT-330柱温箱使用说明书
浙江智达N2000工作站
质量部
合格证
6.1.3设备的外观检查
项目
结果
设备是否无损坏。
设备部件是否无缺失。
设备是否易于拆卸、清洗。
设备安装、固定是否牢靠。
设备工作环境是否符合说明书要求。
设备安装位置是否恰当,是否留有足够的空间。
电气接线连接是否正确,是否有可靠的接地保护。
电缆是否无损坏。
管路连接是否正确,管路和各连接处是否无泄露。
6.1.4高效液相色谱仪主要部件
名称
编号
液相色谱泵
Waters515
E04515795M
紫外检测器
Watersuv2487
E04487719M
柱温箱
AT-330
--------------
6.1.5备注/备件核实
备品/备件名称
型号
色谱柱
4.6mm*200mm*0.5μm
1支
大连依利特
氘灯
LH-36X2
1个
sonntek
针孔滤头
0.45μm*13mm*100个/包
8包
德国MEMBRANA公司
小系滤膜
0.45μm*50nm*50张/盒
6盒
6.1.6.设备安装环境检查
确认设备的安装环境和地点符合仪器说明书要求。
检查结果在下表记录。
确认项目
可接受标准
确认结果
项目结论
设备安装检查
1、电源:
●电压:
220±
10%
●频率,50/60HZ
可靠接地
电压:
频率:
接地:
□符合
□不符合
2、环境检查
●温度:
4~40℃,
●湿度:
20%—95%
结论:
6.2运行确认
6.2.1按《waters高效液相色谱仪操作规程》进行操作,进行控制旋钮的测试。
1.通电测试:
接通仪器电源,将电源开关按向上,则指示灯亮。
2.断电测试:
关闭仪器电源,则指示灯灭。
3.泵测试:
增加流速时,显示屏显示压力上升,直至稳定,并有废液流出;
降低流速速时,显示屏显示压力上升,直至稳定。
6.2.2测试结果,在下表记录。
结论
waters高效液相色谱仪操作规程
应通过审核、批准
□符合
通电测试
断电测试
泵测试
6.3性能确认
6.3.1验证项目和技术要求
检定项目
泵流量设定值误差
泵流量设定值误差Ss<
±
2%;
流量稳定性误差SR<
2%
定性测量重复性(5次定量进样)
RSD≤1.5%
.定量测量重复性(5次定量进样)
UV检测器波长准确性
示值误差〈±
3nm
基线漂移
.≤5X10-3(AU/h)
基线噪声
≤5X10-3(AU)
最小检测浓度(静态)
4X10-7g/ml(萘的甲醇溶液)
6.3.2确认使用的检定设备校正情况,结果在下表记录。
序号
仪器编号
规格
校准日期
有效期至
秒表
2
电子分析天平
3
容量瓶
4
温湿度表
6.3.3试剂D-盐酸氨基葡萄糖、重铬酸钾、甲醇、硫酸等。
6.4证方法及结果
6.4.1泵流量设定值误差Ss、流量稳定性误差SR的检定。
将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器连接好,以甲醇为流动相,按表1设定流量,待流速稳定后,在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相,同时用秒表计时,准确地收集10-25分钟,称量。
按下式计算Ss和SR。
表1
流量设定值ml/min
0.5
1.0
1.5
测量次数
收集流动相时间min
25
15
10
允许误差
Ss
3%
SR
计算公式:
Ss=(Fm-Fs)/Fs*100%
SR=(Fmax-Fmin)/F*100%
式中Ss为流量设定值误差(%)
Fm=(W2-W1)/ρ.t为流量实测值(ml/min);
W2容量瓶+流动相的重量(g);
W!
容量瓶的重量(g);
Fs流量设定值(ml/min);
ρ实验温度下流动相的密度(g/cm2);
t收集流动相的时间(min);
SR流量稳定性误差(%);
Fmax同一组测量中流量最大值(ml/min);
Fmin同一组测量中流量最小值(ml/min);
F同一组测量的算术平均值(ml/min);
泵流量设定值误差Ss、流量稳定性误差SR的检定
流量设定值(ml/min)
0.5
1.0
1.5
流量实测值
(ml/min)
①
②
③
平均值
流量设定值误差
SS(%)
流量稳定性误差(%)
检定人:
6.4.2定性、定量测量重复性的验证
将仪器联接好,使之处于正常工作状态,用进样阀的定量管注入稳定的待分析样品溶液(D-盐酸氨基葡萄糖),记录保留时间和峰面积,连续测量5次,计算相对标准偏差RSD。
色谱条件与系统适用性试验:
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以流动相A:
流动相B(90/10)为流动相(流动相A为磷酸:
辛烷磺酸钠:
水=0.08ml:
0.12g:
99.8ml;
流动相B为乙腈),检测波长为195nm。
测定法:
取D-盐酸氨基葡萄糖对照品适量,精密称定,加蒸馏水溶解并定量稀释制成每1ml中约含5mg的溶液;
摇匀,取20μl注入液相色谱仪,记录色谱图。
定性、定量测量重复性的检定
进样次数
保留时间
峰面积
平均峰面积
标准偏差
RSD%
标准
规定
5
6.4.3紫外检测器性能
6.4.3.1UV检测器波长准确性
方法:
已知苯在233.9nm、238.9nm、243.3nm、248.5nm、254.5nm、260.6nm有特征吸收,故配置100mg/ml苯的乙醇溶液运行“Samplescan”程序。
波长误差均应小于3nm。
波长准确性
实测
误差
233.9nm
248.5nm
238.9nm
254.5nm
243.3nm
260.6nm
6.4.3.2基线漂移和基线噪声的测定
将仪器的各部分连接好,紫外检测器波长调到254nm,流动相为100%甲醇,流速为1.0ml/min,纸速为5mm/min,吸收度范围选择最灵敏档,开机,待基线稳定后,记录基线30~40分钟,计算基线漂移和噪声。
基线漂移应≤5×
10-3(AU/h),基线噪声应≤5×
10-4(AU)。
基线漂移和基线噪声的测定
指标
基线噪声(RIU)
≤±
5×
10-4
基线漂移(RIU/h)
≤5×
10-3(RIU/h)
6.4.3.3最小检测浓度检定
在静态条件下,用注射器注入4×
10-7g/ml萘的甲醇溶液,样品峰高应大于或等于两倍基线燥声峰高,按下式计算最小检测浓度。
Ct=2·
HN·
C/H
式中:
Ct:
最小检测浓度(g/ml)
HN:
噪声峰高(记录仪格数或实测高度cm)
C:
样品浓度(g/ml)
H:
样品峰高(记录仪格数或实测高度cm)
7.验证结果汇总及评价
验证条件
验证项目
认可标准
结果
环境温度:
℃,相对湿度;
输液系统
泵流量设定值误差Ss<
2%;
流量稳定性误差SR<
定性测重复性误差(5次定量管进样)RSD≤1.5%
定量测重复性误差(5次定量管进样)RSD≤1.5%
UV检测器性能
基线漂移≤5×
10-3(RIU/h);
基线噪声≤±
10-4(RIU)
检测器波长准确性<
最小检测浓度4×
10-8g/ml
8.验证周期
液相色谱仪的验证周期为两年,当更换部件或对仪器性能有怀疑时,应随时验证,并记录
验证结果。
9.设备验证总结报告
10.附件
11.方案完成后审核/批准
设备验证总结报告
设备
执行总结:
测试描述
通过/失败
有无偏差?
安装确认
文件核实
□通过□失败
□有□无
主要部件核实
设备的外观检查
备件/改换部件核实
运行及性能确认
SOP的核实
关键仪表校验的核实
仪器运行及性能测试的核实。
偏差总结:
后续措施和负责人:
结论:
□PASS通过□FAIL未通过
报告人
日期
审核人
1.偏差记录
记录偏差报告号码并给出简短描述。
当偏差解决后,在偏差结束栏签名并注日期。
偏差编号
偏差描述
偏差完成人/日期
2.偏差和解决报告
系统/设备:
偏差号:
发生日期:
偏差说明:
报告人:
日期:
根源及影响评估:
改正措施(如必要):
措施制备人:
QA措施批准人:
措施(如需要)完成人:
意见:
:
接受:
□是□否
批准人:
如需要,可复印该页(第____页共_____页)。
3.附录文件清单如下表所列。
附录号
文件描述
对应的测试#
总页数
偏差记录
偏差解决
偏差和解决报告
谱图
定性、定量测量重复性的验证
图谱
6
最小检测浓度
方案完成后审核/批准
审阅
审阅和批准
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