现代分子生物学试题及答案Word格式.docx
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17.就克隆一个基因(DNA片段)来说,最简单的质粒载体也必需包括三个部分:
__复制区:
含有复制起点;
选择标记:
主要是抗性基因;
克隆位点:
便于外源DNA的插入。
另外,一个理想的质粒载体必须具有低分子量。
18.一个带有质粒的细菌在有EB的培养液中培养一段时间后,一部分细胞中已测
不出质粒,这种现象叫质粒消除(或治愈)。
19.pBR322是一种改造型的质粒,它的复制子来源于pMBl,它的四环素抗性基因来自于pSCl01,它的氨苄青霉素抗性基因来自于pSF2124(R质粒)。
20.YAC的最大容载能力是1000kb,BAC载体的最大容载能力是300kb。
21.pSCl01是一种严紧复制的质粒。
22.pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。
pUC系列的载体是通过pBR322和M13
两种质粒改造而来。
它的复制子来自pMBl,Amp
抗性基因则是来自转座子。
23.噬菌体之所以被选为基因工程载体,主要有两方面的原因:
一是它在细菌中能够大量繁殖,这样有利于外源DNA的扩增;
二是对某些噬菌体(如噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚,其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽。
24.野生型的M13不适合用作基因工程载体,主要原因是没有合适的限制性内切核酸酶识别位点和选择标记。
25.黏粒(cosmid)是质粒—噬菌体杂合载体,它的复制子来自质粒、COS位点序列来自噬菌体,最大的克隆片段达到45kb。
26.野生型的噬菌体DNA不宜作为基因工程载体,原因是:
(1)分子量大,
(2)酶的多切点,(3)无选择标记
27.噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的,其中来自质粒的主要结构是复制区,而来自噬菌体的主要结构是IG区。
28.噬菌体载体由于受到包装的限制,插入外源DNA片段后,总的长度应在噬菌体基
因组的75%~105%的范围内。
29.在分离DNA时要使用金属离子螯合剂,如EDTA和柠檬酸钠等,其目的是
螯合Mg2+离子,抑制核酸酶的活性。
30.用乙醇沉淀DNA时,通常要在DNA溶液中加人单价的阳离子,如NaCl和NaAc,
其目的是中和DNA分子的负电荷,增加DNA分子间的凝聚力。
31.引物在基因工程中至少有4个方面的用途:
(1)合成探针;
(2)合成cDNA;
(3)用于PCR反应;
(4)进行序列分析
32.Clark发现用TaqDNA聚合酶得到的PCR反应产物不是平末端,而是有一个突出
碱基末端的双链DNA分子。
根据这一发现设计了克隆PCR产物的T—载体。
33.在cDNA的合成中要用到S1核酸酶,其作用是切除在第二链合成时形成的发夹环
34.乙醇沉淀DNA的原理是乙醇使DNA分子脱水。
35.假定克隆一个编码某种蛋白质的基因,必须考虑其表达的三个基本条件:
(1)保持正确的可读框
(2)能够使其转录的启动子(3)具有翻译的起始和终止信号
36.受体细胞的感受态是接受外源DNA的生理状态_。
37.DNA重组连接的方法大致分为四种:
(1)黏性末端连接;
(2)平末端连接;
(3)同聚物接尾连接;
(4)接头连接法。
38.将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个基因组DNA克隆_,各种此类质粒的集合体称之为构建了一个基因组DNA文库。
39.将含有一个mRNA的DNA拷贝的克隆称作一个_cDNA克隆,源于同一批RNA制备物的克隆群则构建了一个_cDNA文库_。
40.只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成,用_聚合酶链式反应(PCR)可以将这段DNA进行百万倍的扩增。
41.人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为0C时吸附DNA,42C_时摄人DNA。
42.目前,在重组体的筛选中,已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。
大致可以分为:
(1)遗传学方法;
(2)物理筛选法;
(3)核酸杂交法;
(4)表达产物分析法等。
43.PCR扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法,它适合于_插入外源片段的种类较多,大小又极为相似的重组体的筛选。
44.核酸杂交探针可分为两大类:
DNA探针和RNA探针。
其中DNA探针又分为___基因组DNA探针和cDNA探针。
45.如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生5’突出的黏性末端,则可以用_Klenow酶填补的方法_进行3’末端标记。
如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生的是3’突出的黏性末端,可以用__T4DNA聚合酶进行3’末端标记。
46.单链DNA探针的标记可以采用下列方法:
(1)用M13噬菌体载体合成单链DNA探针;
(2)从mRNA反转录合成单链cDNA探针;
(3)用不对称PCR合成单链DNA探针。
47.根据Northern杂交的结果可以说明:
外源基因是否进行了转录_。
48.差示杂交(differentialhybridization)技术需要__两种不同的细胞群体能够表达不同的基因,即在一个群体中能够表达一些基因,而在另一个细胞群体中不能表达这些基因。
49.RNA分子经凝胶电泳后按大小不同分开,然后被转移到一张硝酸纤维素膜(尼龙膜)
上,同一放射DNA探针杂交的技术称__Northern印迹_。
50.在__Southern印迹_技术中,DNA限制性片段经凝胶电泳分离后,被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上,然后与放射性的DNA探针杂交。
51.可用T4DNA聚合酶进行平末端的DNA标记,因为这种酶具有__5’3’合成酶_和_3’5’外切核酸酶_的活性。
52.根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体,必需考虑三种因素:
(1)克隆的是完整的基因;
(2)使用的是表达载体;
(3)不含内含子。
53.Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别:
(1)印迹的对象不同:
Northern是RNA,Southern是DNA;
(2)电泳条件不同,前者是变性条件,后者是非变性条件。
54.放射免疫筛选的原理基于以下三点:
(1)抗体能够被吸附到固体支持物上;
(2)同一个抗原可以同几种抗体结合;
(3)抗体能够被标记
二、选择题(单选或多选)
1.因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是()
(a)A.Kornberg(b)W.Gilbert(c)P.Berg(d)B.McClintock
2.第一个作为重组DNA载体的质粒是()
(a)pBR322(b)ColEl(c)pSCl01(d)pUCl8
3.关于宿主控制的限制修饰现象的本质,下列描述中只有()不太恰当。
(a)由作用于同一DNA序列的两种酶构成
(b)这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶
(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰
(d)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统
4.Ⅱ型限制性内切核酸酶:
()
(a)有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列
(b)仅有内切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一种酶提供
(c)限制性识别非甲基化的核苷酸序列(d)有外切核酸酶和甲基化酶活性
(e)仅有外切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一种酶提供
5.下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?
()
(a)限制酶是外切酶而不是内切酶
(b)限制酶在特异序列(识别位点)对DNA进行切割
(c)同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的
(d)一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA,产生黏末端
(e)一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链DNA,产生平末端
6.第一个被分离的Ⅱ类酶是:
()
(a)EcoK(b)HindⅢ(c)HindⅡ(d)EcoB
7.在下列进行DNA部分酶切的条件中,控制那一项最好?
(a)反应时间(b)酶量(c)反应体积(d)酶反应的温度
8.在下列试剂中,那一种可以螯合Ca2+离子?
(a)EDTA(b)柠檬酸钠(c)SDS(d)EGTA
9.在下列工具酶中,那一种可以被EGTA抑制活性?
(a)S1单链核酸酶(b)末端转移酶(c)碱性磷酸酶(d)Bal31核酸酶
10.限制性内切核酸酶可以特异性地识别:
(a)双链DNA的特定碱基对(b)双链DNA的特定碱基序列
(c)特定的三联密码(d)以上都正确
11.下列关于限制性内切核酸酶的表示方法中,正确一项的是()。
(a)Sau3AI(b)E.coRI(c)hindIII(d)Sau3A1
12.限制性内切核酸酶的星号活性是指:
(a)在非常规条件下,识别和切割序列发生变化的活性。
(b)活性大大提高
(c)切割速度大大加快(d)识别序列与原来的完全不同
13.下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?
(a)甘油含量过高(b)反应体系中含有有机溶剂
(c)含有非Mg2+的二价阳离子(d)酶切反应时酶浓度过低
14.关于宿主控制的限制修饰现象的本质,下列描述中只有()不太恰当
15.在长模板链的指导下引物延伸合成长的DNA互补链时应选用()
(a)T4DNA聚合酶(b)Klenow酶.
(c)大肠杆菌DNA聚合酶I(d)T7DNA聚合酶
16.末端转移酶是合成酶类,()
(a)作用时不需要模板
(b)在Ca2+的存在下,可以在突出的3,末端延长DNA链
(c)在Ca2+的存在下,可以在隐蔽的3,末端延长DNA链
(d)上述说法有两种是正确的
17.在基因工程中,可用碱性磷酸酶()
(a)防止DNA的自身环化(b)同多核苷酸激酶一起进行DNA的5,末端标记
(c)制备突出的3,末端(d)上述说法都正确
18.下列酶中,除()外都具有磷酸酶的活性
(a)λ核酸外切酶(b)外切酶Ⅲ(c)单核苷酸激酶(d)碱性磷酸酶
19.下列哪一种酶作用时需要引物?
(a)限制酶(b)末端转移酶(c)反转录酶(d)DNA连接酶
20.S1核酸酶的功能是()
(a)切割双链的DNA(b)切割单链的RNA(c)切割发夹环(d)以上有两项是正确的
21.Klenow酶与DNA聚合酶相比,前者丧失了()的活性。
(a)5,--3,合成酶,(b)3,--5,外切酶(c)5,---3,外切酶(d)转移酶
22.下面关于松弛型质粒(relaxedplasmid)性质的描述中,()是不正确的
(a)质粒的复制只受本身的遗传结构的控制,而不受染色体复制机制的制约,
因而有较多的拷贝数
(b)可以在氯霉素作用下进行扩增(c)通常带有抗药性标记
(d)同严紧型质粒融合后,杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子
23.基因工程中所用的质粒载体大多是改造过的,真正的天然质粒载体很少,在下列载
体中只有()被视为用作基因工程载体的天然质粒载体
(a)pBR322(b)pSCl01(c)pUBll0(d)pUCl8
24.下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大?
(a)质粒(b)黏粒(c)酵母人工染色体(YAC)(d)噬菌体(e)cDNA表达载体
25.松弛型质粒:
(a)在寄主细胞中拷贝数较多(b)可用氯霉素扩增
(c)一般没有选择标记(d)上述(a)、(b)两项正确
26.ColEl是惟一用作基因工程载体的自然质粒,这种质粒:
(a)是松弛复制型(b)具有,四环素抗性
(c)能被氯霉素扩增(d)能产生肠杆菌素
27.同一种质粒DNA,以三种不同的形式存在,电泳时,它们的迁移速率是:
(a)OCDNA>
SCDNA>
LDNA(b)SCDNA>
LDNA>
OCDNA
(c)LDNA>
OCDNA>
SCDNA(d)SCDNA>
LDNA
28.pBR322是一种改造型的质粒,含有两个抗性基因,其中四环素抗性基因来自:
(a)ColEl(b)Ri质粒(c)pSCl01(d)pUCl8
29.关于穿梭质粒载体,下面哪一种说法最正确?
(a)在不同的宿主中具有不同的复制机制
(b)在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点
(c)在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶
(d)在不同的宿主细胞中具有不同的复制速率
30.能够用来克隆32kb以下大小的外源片段的质粒载体是()
(a)charomid(b)plasmid(C)cosmid(d)phagemid
31.第一个作为重组DNA载体的质粒是()
32.Ti质粒:
(a)可从农杆菌转到植物细胞中(b)作为双链DNA被转移
(c)在植物中导致肿瘤(d)介导冠瘿碱的合成,作为细菌的营养物和植物的生长激素
(e)需要细菌的vir基因帮助转移(f)在植物细胞中作为染色体外质粒
33.黏粒(cosmid)是一种人工建造的载体,()
(a)它具有COS位点,因而可进行体外包装(b)它具有质粒DNA的复制特性
(c)进入受体细胞后,可引起裂解反应(d)进入受体细胞后,可引起溶源化反应
34.有两种确定核酸中核苷酸序列的方法:
化学序列分析法(Maxam-Glbert)和酶学序列分析法(Sanger)。
酶学测序法的基本原理/优点是:
(a)碱基与特殊染料间不同的相互作用
(b)一个合成引物的延伸和DNA修复合成的可靠终止
(c)限制性位点与DNA末端标记的相关性
(d)可同时对DNA双螺旋的两条链进行测序
(e)反应是DNA特异的,RNA不会带来干扰。
这样既减少纯化步骤,也节约了开支。
35.关于cDNA的最正确的说法是:
(a)同mRNA互补的单链DNA(b)同mRNA互补的双链DNA
(c)以mRNA为模板合成的双链DNA(d)以上都正确
36.用碱法分离质粒DNA时,染色体DNA之所以可以被除去,是因为:
(a)染色体DNA断成了碎片(b)染色体DNA分子量大,而不能释放
(c)染色体变性后来不及复性(d)染色体未同蛋白质分开而沉淀
37.关于碱解法分离质粒DNA,下面哪一种说法不正确?
(a)溶液I的作用是悬浮菌体(b)溶液Ⅱ的作用是使DNA变性
(c)溶液Ⅲ的作用是使DNA复性
(d)质粒DNA分子小,所以没有变性,染色体变性后不能复性
38.Clark做了一个有趣的实验,发现TaqDNA聚合酶可以不需要模板,在双链DNA的
末端加一个碱基,主要是加().
(a)dGTP(b)dATP(c)dCTP(d)dTTP
39.根据构建方法的不同,基因文库分为基因组文库、cDNA文库等。
在下列文库中,
()属cDNA文库
(a)YAC文库(b)MAC文库(c)扣减文库(d)BAC文库
40.下面关于多克隆位点(multipleclonesite,MCS)的描述,不正确的—句是()
(a)仅位于质粒载体中(b)具有多种酶的识别序列
(c)不同酶的识别序列可以有重叠(d)一般是人工合成后添加到载体中
41.在cDNA技术中,所形成的发夹环可用()
(a)限制性内切核酸酶切除(b)用3¹
外切核酸酶切除
(c)用S1核酸酶切除(d)用5¹
42.在DNA的酶切反应系统中,通常:
(a)用SSC缓冲液(b)加入Mg2+作辅助因子
(c)加入BSA等保护剂(d)上述说法中,有两项是正确的
43.黏性末端连接法,不仅操作方便,而且()
(a)产生新切点(b)易于回收外源片段(c)载体不易环化(d)影响外源基因的表达
44.在下列表型中,()是基因工程上理想的受体菌表型
(a)r+m+rec*(b)r-m-rec-(C)r-m-rec+(d)r+m+rec-
45.关于DNA接头在基因工程中的作用,下列说法中哪一项不正确?
(a)给外源DNA添加适当的切点(b)人工构建载体
(c)调整外源基因的可读框(d)增加调控元件
46.cDNA文库包括该种生物的()
(a)某些蛋白质的结构基因(b)所有蛋白质的结构基因
(c)所有结构基因(d)内含子和调控区
47.下列关于建立cDNA文库的叙述中,哪一项是错误的?
(a)从特定组织或细胞中提取DNA或RNA
(b)用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA
(c)以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA
(d)新合成的双链DNA甲基化
48.下列对黏性末端连接法的评价中,哪一项是不正确的?
(a)操作方便(b)易于回收片段
(c)易于定向重组(d)载体易于自身环化,降低重组率
49.关于感受态细胞性质的描述,下面哪一种说法不正确?
(功具有可诱导性(b)具有可转移性
(c)细菌生长的任何时期都可以出现(d)不同细菌出现感受态的比例是不同的
50.下面关于用T4多核苷酸激酶标记5'
端制备探针的描述中()是不正确的。
(a)既能标记DNA,又能标记RNA(b)既能标记双链DNA又能标记单链DNA
(c)只能标记突出的5'
端不能标记其他类型末端
(d)DNA或RNA必须有5'
-OH的存在
51.Southem印迹的DNA探针()杂交。
(a)只与完全相同的片段(b)可与任何含有相同序列的DNA片段
(c)可与任何含有互补序列的DNA片段’.
(d)可与用某些限制性内切核酸酶切成的DNA片段(e)以上都是
52.用下列方法进行重组体的筛选,只有()说明外源基因进行了表达。
(a)Southem印迹杂交(b)Northem印迹杂交
(c)Western印迹(d)原位菌落杂交
53.下列哪一个不是Southern印迹法的步骤?
(a)用限制酶消化DNA(a)DNA与载体的连接
(c)用凝胶电泳分离DNA片段(d)DNA片段转移至硝酸纤维素膜上
(e)用一个标记的探针与膜杂交
54.报告基因()
(a)以其易于分析的编码序列代替感兴趣基因的编码序列
(b)以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动子区
(c)能用于检测启动子的活性(d)能用于确定启动子何时何处有活性
55.在利用lacZ失活的显色反应筛选法中,IPTG的作用是()
(a)诱导宿主的α肽的合成(b)诱导宿主的ω肽的合成
(c)作为酶的作用底物(d)作为显色反应的指示剂
56.切口移位是指在()作用下,使()带上放射性标记。
(a)DNA聚合酶I,RNA(b)DNA聚合酶I,DNA
(c)DNA聚合酶Ⅲ,RNA(d)DNA聚合酶Ⅲ,DNA
57.用于核酸分子杂交的探针可以是放射性标记的()
(a)DNA(b)RNA(c)抗体(d)抗原
58.Southern印迹是用DNA探针检测DNA片段,而Northern印迹则是:
(a)用RNA探针检测DNA片段(b)用RNA探针检测RNA片段
(c)用DNA探针检测RNA片段(d)用DNA探针检测蛋白质片段
59.用免疫化学法筛选重组体的原理是()
(a)根据外源基因的表达(b)根据载体基因的表达
(c)根据mRNA同DNA的杂交(d)根据DNA同DNA的杂交
60.随机引物标记探针,下列各项中哪一项是不正确的?
(a)双链DNA、单链DNA、RNA都是可以标记的(b)不需要用DnaseI预处理
(c)反应时可用Klenow酶(d)反应时可用DNA聚合酶1
61.在切口移位标记DNA探针时只能使用()
(a)Klenow酶(b)DNA聚合酶I(c)DNA聚合酶Ⅱ(d)DNA聚合酶Ⅲ
62.要对一双链的DNA分子进行3¹
末端标记,可用()
(a)Klenow酶(b)DNA聚合酶I(c)T4DNA聚合酶(d)T7DNA聚合酶
答案
1.c;
2.c;
3.b;
4.b5.b,C,d,e;
6.c;
7.b;
8.d;
9.d;
10.B;
11.d;
12.a;
13.d;
14.b15.d;
16.c;
17.a,b;
18.a;
19.c;
20.d;
21.c;
22.C;
23.b;
24.C;
25.d;
26.a,C,d;
27.b;
28.c;
29.b;
30.a;
31.c;
32.a,c,d,e,33.a,b,c;
34.b;
35.c;
36.c;
37.d;
38.b;
39.c;
40.a;
41.c;
42.a,b,c;
43.b;
44.b;
45.d;
46.a;
47.a;
48.c;
49.c;
50.b;
51.c;
52.c;
53.b;
54.a,c,d;
55.a;
56.b;
57.a,b;
58.c;
59.a;
60.d;
61.b;
62.c;
三、简答题
1.说明Sanger
- 配套讲稿:
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