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甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应,无CuOH生成。
4.试管放在盛有50-650C温水的大烧杯中,加热约2分钟,观察到溶液颜色:
浅蓝色→棕色→砖红色(沉淀)
最好用试管夹夹住试管上部,使试管底部不触及烧杯底部,试管口不朝向实验者。
也可用酒精灯对试管直接加热。
防止试管内的溶液冲出试管,造成烫伤;
缩短实验时间。
二、脂肪的鉴定
花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片,将薄片放在载玻片的水滴中,用吸水纸吸去装片中的水。
干种子要浸泡3~4小时,新花生的浸泡时间可缩短。
因为浸泡时间短,不易切片;
浸泡时间过长,组织较软,切片不易成形。
切片要尽可能薄些,便于观察。
在子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液,染色1分钟。
染色时间不宜过长。
用吸水纸吸去薄片周围染液,用50%酒精洗去浮色,吸去酒精。
酒精用于洗去浮色,不洗去浮色,会影响对橘黄色脂肪滴的观察。
同时,酒精是脂溶性溶剂,可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。
用吸水纸吸去薄片周围酒精,滴上1~2滴蒸馏水,盖上盖玻片。
滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。
低倍镜下找到花生子叶薄片的最薄处,可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒。
装片不宜久放。
时间一长,油滴会溶解在乙醇中。
三、蛋白质的鉴定
制备组织样液。
(浸泡、去皮研磨、过滤。
)
黄豆浸泡1至2天,容易研磨成浆,也可购新鲜豆浆以节约实验时间。
鉴定。
加样液约2ml于试管中,加入双缩脲试剂A,摇匀;
再加入双缩脲试剂B液3~4滴,摇匀,溶液变紫色。
A液和B液也要分开配制,储存。
鉴定时先加A液后加B液。
CuSO4溶液不能多加。
先加NaOH溶液,为Cu2+与蛋白质反应提供一个碱性的环境。
A、B液混装或同时加入,会导致Cu2+变成Cu(OH)2沉淀,而失效。
否则CuSO4的蓝色会遮盖反应的真实颜色。
可用蛋清代替豆浆。
蛋清要先稀释。
如果稀释不够,在实验中蛋清粘在试管壁,与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上,使反应不容易彻底,并且试管也不易洗干净。
附:
淀粉的检测和观察
用试管取2ml待测组织样液,向试管内滴加2滴碘液,观察颜色变化。
碘液不要滴太多
以免影响颜色观察
七、考点提示:
1、常见还原性糖与非还原性糖有哪些?
答:
葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖;
淀粉、蔗糖、纤维素都是非还原性糖。
2、还原性糖植物组织取材条件?
含糖量较高、颜色为白色或近于白色,如:
苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。
3、研磨中为何要加石英砂?
不加石英砂对实验有何影响?
加石英砂是为了使研磨更充分。
不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少,使鉴定时溶液颜色变化不明显。
4、斐林试剂甲、乙两液的使用方法?
混合的目的?
为何要现混现用?
混合后使用;
产生氢氧化铜;
氢氧化铜不稳定。
5、还原性糖中加入斐林试剂后,溶液颜色变化的顺序为?
浅蓝色棕色砖红色。
6、花生种子切片为何要薄?
只有很薄的切片,才能透光,而用于显微镜的观察。
7、转动细准焦螺旋时,若花生切片的细胞总有一部分清晰,另一部分模糊,其原因一般是什么?
切片的厚薄不均匀。
8、脂肪鉴定中乙醇作用?
洗去浮色。
9、双缩脲试剂A、B两液是否混合后用?
先加A液的目的怎样通过对比看颜色变化?
不能混合;
先加A液的目的是使溶液呈碱性;
先留出一些大豆组织样液做对比。
实验三:
观察DNA和RNA在细胞中的分布
一、实验原理:
1、真核细胞的DNA主要分布在细胞核内,RNA主要分布在细胞质中。
2、甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同,甲基绿对DNA亲和力强,使DNA显现出绿色,而吡罗红对RNA的亲和力强,使RNA呈现出红色。
用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色,可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。
3、盐酸的作用
①盐酸能改变细胞膜的通透性,加速染色剂的跨膜运输;
②盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离,便于DNA与染色剂的结合
二、实验材料:
人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞
三、实验用具:
大小烧杯、温度计、滴管、消毒牙签、载玻片、盖玻片、铁架台、
石棉网、火柴、酒精灯、吸水纸、显微镜
四、方法步骤:
1、取材
①滴:
在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液;
②刮:
用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下;
③涂:
将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中;
④烘:
将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火焰上烘干。
2、水解
①解:
将烘干的载玻片放入装有30ml质量分数为8%的盐酸的小烧杯中,进行材料的水解;
②保:
将小烧杯放入装有30℃温水的大烧杯中保温5分钟。
3、冲洗涂片
①冲:
用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片10秒钟;
②吸:
用吸水纸吸去载玻片上的水分。
4、染色
①染:
用2滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴在载玻片上,染色5分钟;
吸去多余染色剂;
③盖:
盖上盖玻片。
5、观察
①低:
在低倍物镜下,寻找染色均匀,色泽浅的区域,移至视野中央,将物像调节清晰;
②高:
转到高倍物镜,调节细准焦螺旋,观察细胞核和细胞质的染色情况。
五、考点提示:
1、取口腔上皮细胞之前,应先漱口,以避免装片中出现太多的杂质;
2、取洋葱表皮细胞时,尽量避免材料上带有叶肉组织细胞;
3、冲洗载玻片时水的流速要尽量慢,切忌直接用水龙头冲洗;
4、用酒精灯烘烤载玻片时,不要只集中于材料处,而应将载玻片在火焰上来回移动,使载玻片均匀受热,以免破裂;
5、烘烤后的载玻片不要马上放入盛有稀盐酸的烧杯中,最好先自然冷却1分钟。
实验四:
体验制备细胞膜的方法
细胞膜的流动性和半透性
猪(或牛、羊、人)的新鲜的红细胞稀释液(血液加适量的生理盐水)
蒸馏水、试管、吸水纸、载玻片、盖玻片、显微镜
1、用试管吸取少量红细胞稀释液,滴一小滴在载玻片上,盖上盖玻片,制成临时装片
2、在高倍镜下观察,待观察清晰时,在盖玻片的一侧滴一滴蒸馏水,同时在另一侧用吸水纸小心吸引,注意不要把细胞吸跑。
上述操作均在载物台上进行,并持续观察细胞的变化。
可以看到近水的部分红细胞发生变化;
凹陷消失,细胞体积增大,很快细胞破裂,内容物流出。
1、选择动物细胞进行实验的原因:
动物细胞无细胞壁。
2、选择哺乳动物成熟红细胞进行实验的原因:
人和其他哺乳动物成熟红细胞无细胞核和众多的细胞器(膜),可以得到较纯净的细胞膜。
3、细胞破裂后,用什么方法获得较纯的细胞膜:
将涨破的细胞溶液,经过离心分离得到细胞膜。
4、如何获得植物细胞膜:
先用纤维素酶和果胶酶将植物细胞壁水解得到原生质体;
再将原生质体放入清水中,水自由扩散进入,原生质体涨破;
最后经过离心分离得到植物细胞膜。
5、稀释及稀释的时候用生理盐水的原因:
稀释后,可以减少血液中的血浆蛋白等杂物。
用生理盐水是为了保持渗透压,防止在稀释的时候就发生细胞破裂。
实验五:
用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体
1、叶肉细胞中的叶绿体,呈绿色、扁平的椭球形或球形,散布于细胞质中,可以在高倍显微镜下观察它的形态。
2、线粒体普遍存在于动物细胞和植物细胞中,健那绿染液能使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色。
通过染色,可以在高倍显微镜下观察到处于生活状态的线粒体的形态有短棒状、圆球状、线形、哑铃形等。
新鲜的藓类的叶、人的口腔上皮细胞、新配制的质量分数为1%的健那绿染液(将0.5g健那绿溶解于50mL生理盐水中,加温到30-40摄氏度,使其充分溶解)
显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子、消毒牙签
1、观察叶绿体
低倍镜下找到叶片细胞→低倍镜下找到叶片细胞→高倍镜下观察。
2、观察线粒体
染色→制片→低倍镜下找到口腔上皮细胞→高倍镜下观察。
1、观察叶绿体时选择藓类叶的原因:
藓类属于低等植物,叶片是绿色的单层细胞,不需加工即可进行观察。
2、临时装片中的材料要随时保持有水状态的原因:
保证细胞器的正常形态并能悬浮在细胞质基质中,否则,细胞失水收缩,将影响细胞器形态的观察。
实验六:
植物细胞的吸水和失水
一、实验目的:
1、学会使用显微镜观察植物细胞质壁分离和复原。
(与前面的知识:
显微镜的使用联系)
2、观察不同浓度的溶液对细胞吸水失水的影响,掌握此种方法的具体应用。
3、通过观察植物细胞的吸水和失水,明确渗透系统的组成以及具体应用。
二、实验原理:
1、成熟的植物细胞放到一定浓度的溶液中构成一个渗透系统。
当细胞大量失水时原生质层与细胞壁的伸缩程度不同,导致原生质层和细胞壁分离。
2、当外界溶液浓度大于细胞液浓度时,根据扩散作用原理,水分会由细胞液中渗出到外界溶液中,通过渗透作用失水;
由于细胞壁和原生质层的伸缩性不同,细胞壁伸缩性较小,而原生质层性较大,从而使二者分开;
反之,外界溶液浓度大于细胞液浓度,则细胞通过渗透作用吸水,分离后的质和壁又复原。
三、实验材料:
紫色特别深的洋葱外表皮、质量浓度为0.3g/ml的蔗糖溶液、清水
显微镜、镊子、刀片、载玻片、盖玻片、滴管、吸水纸
五、方法步骤:
1、用刀片在洋葱鳞片叶的外表面划一个小方块,用镊子撕取这一小块洋葱表皮,在洋葱的外表皮上,用刀片划一些方块,用镊子轻轻撕取一小块(撕取的仅仅是外表皮,不要撕得太厚,仍然作为一个问题留给学生)。
在取标本时,可以将洋葱的内表皮朝外,外表皮朝里进行对折,不要太用力,然后取其外表皮作为材料,将它平展地放在载玻片中央的清水滴中,并盖上盖玻片。
2、用低倍镜观察洋葱表皮细胞中紫色的中央液泡大小,以及原生质层的位置。
3、从盖玻片的一侧滴入0.3g/ml的蔗糖溶液,在盖玻片的另一侧用吸水纸吸引。
这样重复几次,洋葱表皮细胞就侵润在蔗糖溶液中。
注意重复3-4次。
4、再用低倍镜观察洋葱表皮细胞中紫色的中央液泡大小,以及原生质层的位置。
5、从盖玻片的一侧滴入清水,在盖玻片的另一侧用吸水纸吸引,这样重复几次,洋葱表皮细胞就侵润在清水中。
6、还用低倍镜观察洋葱表皮细胞中紫色的中央液泡大小,以及原生质层的位置。
六、实验结论:
当外界溶液浓度大于细胞液浓度时,水分会由细胞液中渗出到外界溶液中,通过渗透作用失水;
反之,当外界溶液浓度低于细胞液浓度时,则细胞通过渗透作用吸水,分离后的质和细胞壁又复原。
实验七:
比较过氧化氢在不同条件下的分解
通过比较过氧化氢在不同条件下分解的快慢,了解过氧化氢酶的作用和意义
新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶,根据酶的专一性,可知其可以催化过氧化氢分解成水和氧。
质量分数为20%的猪肝研磨液,新配制的体积分数为3%的过氧化氢溶液,质量分数为3.5%的FeCl3溶液
量筒,试管,滴管,试管夹,试管架,卫生香,火柴,酒精灯,大烧杯,石棉网,温度计
1、取4支洁净试管,分别编号1,2,3,4,向试管内分别加入2ml过氧化氢溶液。
2、将2号试管放在90℃左右的水浴中加热,观察气泡情况,并与1号试管作比较。
3、向3号试管内滴入2滴FeCl3溶液,向4号试管内滴入2滴肝脏研磨液,观察哪支试管产生的气泡多。
4、2至3min后,将点燃的卫生香分别放在3、4号试管内液面的上方,观察哪支试管中的卫生香燃烧更猛烈。
1、加热能促进H2O2的分解,提高反应速率;
2、酶有催化作用,与无机催化剂相比,酶具有高效性。
实验八:
影响酶活性的条件
1、初步学会探索影响酶活性条件的方法。
2、探索过氧化氢酶在不同温度和PH下催化过氧化氢水解的情况。
淀粉遇碘后,形成紫蓝色的复合物。
麦芽糖和葡萄糖遇碘后,不形成紫蓝色的复合物,但能
与斐林试剂发生氧化还原反应,生成砖红色的氧化亚铜沉淀。
质量分数为2%的新配置的淀粉酶溶液,新鲜的质量分数为20%的猪肝研磨液,
质量分数为3%的可溶性淀粉溶液,新配制的体积分数为3%的过氧化氢溶液,
质量分数为5%的盐酸,质量分数为5%的氢氧化钠溶液,蒸馏水,冰水,热水,
碘液,斐林试剂
量筒,试管,滴管,试管夹,三脚架,火柴,酒精灯,小烧杯,大烧杯,石棉网,温度计,
一、温度对酶活性的影响
1、取三支洁净的试管,编上号1,2,3,并分别注入2ml可溶性淀粉液。
2、分别向1,2,3号三支试管中各注入1ml新鲜的淀粉酶溶液,摇匀,依次放入沸水,37℃左右的热水,冰水中,维持各自的温度5分钟。
3、分别向1,2,3号三支试管中各滴入一滴碘液,然后摇匀。
观察并记录这三只试管中,溶液颜色的变化情况。
二、pH对酶活性的影响
1、取三支洁净的试管,编上号1,2,3,并分别注入1ml的新鲜的淀粉酶溶液。
2、依次向1号,2号,3号试管中注入蒸馏水,氢氧化钠溶液,稀盐酸各1ml并摇匀。
3、分别向1号,2号,3号试管中各注入2ml可溶性淀粉溶液,震荡摇匀。
4、将三支试管的下半部浸到37℃左右的温水中,保温5分钟。
5、向三支试管中各加入2ml斐林试剂,震荡摇匀。
六、实验现象:
1号试管中的液体未变蓝,2号和3号试管中的液体变蓝,且2号试管蓝色比3号试管深。
2号和3号试管中的液体未变蓝,1号试管中的液体变蓝。
七、实验结论:
1、在最适宜的温度和最适宜的ph条件下,酶的活性最高。
2、温度和ph偏高或偏低,酶的活性明显下降。
实验九:
叶绿体中色素的提取和分离
1、初步掌握提取和分离叶绿体中色素的方法。
2、探索叶绿体中有几种色素。
1、叶绿体中的色素能溶解在丙酮(有机溶剂,酒精、汽油、苯、石油醚等)中,所以用丙酮可提取叶绿体中色素。
2、色素在层析液中溶解度不同,溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得快,溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得慢,因而可用层析液将不同的色素分离。
新鲜的绿叶(如菠菜的绿叶),无水乙醇,层析液(由20份在60~90℃下分馏出来的石油醚、2份乙醇和1份苯混合而成。
93号汽油也可代用),二氧化硅和碳酸钙。
干燥的定性滤纸,试管,棉塞,试管架,研钵,玻璃漏斗,尼龙布,毛细吸管,剪刀,药勺,量筒(10ml),天平。
(1)称取5g绿色叶片并剪碎
提取色素研钵→研磨→漏斗过滤→
(2)加入少量SiO2、CaCO3和5ml丙酮收集到试管内并塞紧管口
(1)将干燥的滤纸剪成6cm长,1cm宽的纸条,剪去一端两角(使层析液同时到达滤液细线)
制滤纸条
(2)在距剪角一端1cm处用铅笔画线
(1)用毛细管吸少量的滤液沿铅笔线处小心均匀地划一条滤液细线
滤液划线
(2)干燥后重复划2-3次
(1)向烧杯中倒入3ml层析液(以层析液不没及滤液细线为准)
纸上层析
(2)将滤纸条尖端朝下略微斜靠烧杯内壁,轻轻插入层析液中
(3)用培养皿盖盖上烧杯
观察结果:
滤纸条上出现四条宽度、颜色不同的彩带(如下图)
最宽:
叶绿素a;
最窄:
叶绿素b;
相邻色素带最近:
叶绿素a和叶绿素b;
相邻色素带最远:
胡萝卜素和叶黄素。
六、考点提示:
1、二氧化硅:
为了使研磨充分;
碳酸钙:
保护色素免受破坏;
丙酮:
色素的溶剂。
2、扩散最快的是胡萝卜素(橙黄色),扩散最慢的是叶绿素b(黄绿色)。
3、滤纸上有四条色素带说明了绿叶中的色素有四种,它们在层析液中的溶解度不同,随层析液在滤纸上扩散的快慢也不一样。
4、裁取定性滤纸时,注意双手尽量不要接触纸面,以免手上的油脂或其他脏物污染滤纸。
5、制备滤纸条时,要将滤纸条的一端剪去两角,这样可以使色素在滤纸条上扩散均匀,便于观察实验结果。
6、根据烧杯的高度制备滤纸条,让滤纸条长度高出烧杯1cm,高出的部分做直角弯折。
7、滤纸上的滤液细线如果触到层析液,细线上的色素就会溶解到层析液中,就不会在滤纸上扩散开来,实验就会失败。
8、画滤液细线时,用力要均匀,速度要适中
9、研磨要迅速、充分。
a.因为丙酮容易挥发;
b.为了使叶绿体完全破裂.从而能提取较多的色素;
c.叶绿素极不稳定,能被活细胞中的叶绿素酶水解而被破坏。
实验十一:
观察根尖分生组织细胞的有丝分裂
1、制作洋葱根尖细胞有丝分裂装片。
2、观察植物细胞有丝分裂的过程,识别有丝分裂的不同时期,比较细胞周期不同时期的时间长短。
3、绘制植物细胞有丝分裂简图。
1、高等植物的分生组织有丝分裂较旺盛。
2、有丝分裂各个时期细胞内染色体的形态和行为变化不同,可用高倍显微镜根据各个时期内染色体的变化情况,识别该细胞处于那个时期。
3、细胞核内的染色体易被碱性染料(如龙胆紫)染成深色。
洋葱(可用葱.蒜代替),质量分数为15%的盐酸,体积分数为95%的酒精,质量浓度为0.01g/ml或0.02g/ml的龙胆紫溶液(将龙胆紫溶解在质量分数2%的醋酸溶液中配制而成)或醋酸洋红液,洋葱根尖细胞有丝分裂固定装片。
显微镜,载玻片,盖玻片,玻璃皿,剪子,镊子,滴管。
1、洋葱根尖的培养在上实验课之前的3-4天,取洋葱一个,放在广口瓶上。
瓶内装满清水,让洋葱的底部接触到瓶内的水面。
把这个装置放在温暖的地方培养。
待根长约5cm,取生长健壮的根尖制成临时装片观察。
2、装片的制作
制作流程为:
解离—漂洗—染色—制片
过程
方法
时间
目的
解离
上午10时至下午2时,剪去洋葱根尖2-3mm,立即放入盛入有盐酸和酒精混合液(1:
1)的玻璃皿中,在温室下解离。
3-5min
用药液使组织中的细胞相互分离开来
漂洗
待根尖酥软后,用镊子取出,放入盛入清水的玻璃皿中漂洗。
约10min
洗去药液,防止解离过度
染色
把根尖放进盛有质量浓度为0.01g/ml或0.02g/ml的龙胆紫溶液(或醋酸洋红液)的玻璃皿中染色。
染料能使染色体着色。
制片
用镊子将这段根尖取出来,放在载玻片上,加一滴清水,并用镊子尖把根尖能碎,盖上盖玻片,在盖玻片上再加一片载玻片。
然后,用拇指轻轻的按压载玻片。
使细胞分散开来,有利于观察
3、观察
a低倍镜观察:
找到分生区细胞,其特点是细胞呈正方形,排列紧密,有的细胞正在分裂
b高倍镜观察:
在低倍镜观察的基础上换高倍镜,直到看清细胞的物象为止
c仔细观察:
先到中期,再找其余各期,注意染色体的特点
d移动观察:
慢慢移动装片,完整地观察各个时期(如果自制装片效果不太理想,可以观察洋葱根尖固定装片)
4、绘图
5、记录
前期:
①出现染色体②核膜核仁消失③纺锤丝出现
中期:
①着丝粒位于赤道面②纺锤体明显
后期:
染色体分裂成两组子染色体向相反两极运动
末期:
①纺锤体出现②核膜核仁出现
实验十三:
观察蝗虫精母细胞减数分裂固定装片
通过观察蝗虫精母细胞减数分裂固定装片,识别减数分裂不同阶段的染色体的形态、位置和数目,加深对减数分裂过程的理解。
二、实验用具:
蝗虫精母细胞减数分裂固定装片,显微镜。
三、方法步骤:
1、在低倍镜下观察蝗虫精母细胞减数分裂固定装片,识别初级精母细胞、次级精母细胞和精细胞。
2、先在低倍镜下依次找到减数第一次分裂中期、后期和减数第二次分裂中期、后期的细胞,再在高倍镜下仔细观察染色体的形态、位置和数目。
3、根据观察结果,尽可能多地绘制减数分裂不同时期的细胞简图
实验十四:
低温诱导植物染色体数目的变化
1、学习低温诱导植物染色体数目变化的方法
2、理解低温诱导植物细胞染色体数目变化的作用机制
1、进行正常有丝分裂的植物分生组织细胞,在有丝分裂后期,染色体的着丝点分裂,子染色体在纺缍丝的作用下分别移向两极,最终被平均分配到两个子细胞中去。
2、用低温处理植物组织细胞,使纺缍体的形成受到抑制,以致影响染色体被拉向两极,细胞也不能分裂成两个子细胞,于是,植物细胞染色体数目发生变化。
洋葱或大葱、蒜、卡诺氏固定液,盐酸酒精解离液,质量浓度为10mg/mL的龙胆紫溶液。
冰箱、显微镜、载玻片、盖玻片、培养皿、剪刀、镊子、吸水纸、滴管、小烧杯。
1、把洋葱放在盛满水的广口瓶上,让它的底部接触瓶内的水面。
待洋葱根长到lcm时,放入冰箱内4℃低温下培养,诱导培养36小时
2、剪取根尖约0.5—1cm,放人卡诺氏固定液中固定30min,然后用体积分数95%酒精洗两次,用体积分数70%酒精保存于低温处,贴好标签。
3、取固定好的根尖,进行解离、漂洗、染色和制片4个步骤,具体操作方法与实验“观察植物细胞的有丝分裂”相同。
4、先用低倍镜寻找染色体形态较好的分裂相,再换上高倍镜并调节细准焦螺旋和反光镜,使物像清晰,仔细观察,辨认哪些细胞发生染色体数目变化,找出处于细胞分裂中期的细
胞,进行染色体计数。
实验十六:
探究生长素类似物促进插条生根的最适浓度
一、目的要求:
1、进一步学会探究性实验的一般方法和
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