常用pH缓冲液配置方法及注意事项范文.docx

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常用pH缓冲液配置方法及注意事项范文

常用pH缓冲液配置方法及注意事项

常见pH缓冲溶液的配制和pH值

序号

溶液名称

配制方法

pH值

1

氯化钾-盐酸

13.0ml0.2mol/LHCl与25.0ml0.2mol/LKCl混合均匀后，加水稀释至100ml

1.7

2

氨基乙酸-盐酸

在500ml水中溶解氨基乙酸150g，加480ml浓盐酸，再加水稀释至1L

2.3

3

一氯乙酸-氢氧化钠

在200ml水中溶解2g一氯乙酸后，加40gNaOH，溶解完全后再加水稀释至1L

2.8

4

邻苯二甲酸氢钾-盐酸

把25.0ml0.2mol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与6.0ml0.1mol/LHCl混合均匀，加水稀释至100ml

3.6

5

邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠

把25.0ml0.2mol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与17.5ml0.1mol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml

4.8

6

六亚甲基四胺-盐酸

在200ml水中溶解六亚甲基四胺40g，加浓HCl10ml，再加水稀释至1L

5.4

7

磷酸二氢钾-氢氧化钠

把25.0ml0.2mol/L的磷酸二氢钾与23.6ml0.1mol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml

6.8

8

硼酸-氯化钾-氢氧化钠

把25.0ml0.2mol/L的硼酸-氯化钾与4.0ml0.1mol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml

8.0

9

氯化铵-氨水

把0.1mol/L氯化铵与0.1mol/L氨水以2：

1比例混合均匀

9.1

10

硼酸-氯化钾-氢氧化钠

把25.0ml0.2mol/L的硼酸-氯化钾与43.9ml0.1mol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml

10.0

11

氨基乙酸-氯化钠-氢氧化钠

把49.0ml0.1mol/L氨基乙酸-氯化钠与51.0ml0.1mol/LNaOH混合均匀

11.6

12

磷酸氢二钠-氢氧化钠

把50.0ml0.05mol/LNa2HPO4与26.9ml0.1mol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml

12.0

13

氯化钾-氢氧化钠

把25.0ml0.2mol/LKCl与66.0ml0.2mol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml

13.0

一、常见溶液的配制

（一）溶液配制注意事项

1．药品要有较好的质量试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteedreagent，G．R．）、分析试剂（Antalyticalreagent，A．R．）化学纯（Chemicalpure，C．P．）和实验试剂（Laboratoryreagent，L．R．）等等。

工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。

2．药品称量要精确。

3．配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.5~7.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。

４．配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。

（二）0.067（1/15）Mol/L磷酸缓冲液

1．1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：

称取磷酸二氢钾（KH2PO4，A．R．）9.08g，用蒸馏水溶解后，倾入1000ml容量瓶内，再稀释至刻度（1000ml）。

2．1/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：

称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，A.R.）9.47g（或者Na2HPO4·2H2O11.87g）用蒸馏水溶解后，放入1000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1000ml）。

3．按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液。

附表1磷酸盐缓冲液配制法（单位：

毫升）

pH

1/15Mol/LNa2HPO4

1/15Mol/LKH2PO4

pH

1/15Mol/LNa2HPO4

1/15Mol/LKH2PO4

5.8

8.0

92.0

7.1

66.6

23.4

5.9

9.9

90.1

7.2

72.0

28.0

6.0

12.2

87.8

7.3

76.8

23.2

6.1

15.3

84.7

7.3

80.8

19.2

6.2

18.6

81.4

7.5

84.1

15.9

6.3

22.4

77.6

7.6

87.0

13.0

6.4

26.7

73.3

7.7

89.4

10.6

6.5

31.8

68.2

7.8

91.5

8.5

6.6

37.5

62.5

7.9

93.2

6.8

6.7

43.5

56.5

8.8

94.7

5.3

6.8

49.6

50.4

8.1

95.8

4.2

6.9

55.4

44.6

8.2

97.0

3.0

7.0

61.1

38.9

8.4

98.0

2.0

（三）0.15Mol/LPB液

附表20.15Mol/LPB液配制法

pH

0.15Mol/LNa2HPO4（ml）

0.15Mol/LNaH2PO4（ml）

6.4

26.5

73.5

6.6

37.5

62.5

6.8

49.0

51.0

7.0

61.0

39.0

7.2

72.0

28.0

7.4

81.0

19.0

7.6

87.0

13.0

Na2HPO4·2H2O分子量=175.050.15Mol/L溶液含26.7g/L。

Na2HPO4·12H2O分子量=358.220.15Mol/L溶液含53.7g/L。

NaH2PO4·H2O分子量=138.000.15Mol/L溶液含20.7g/L。

NaH2PO4·2H2O分子量=156.030.15Mol/L溶液含23.4g/L。

（四）0.2Mol/LPB缓冲液

附表30.2mol/LPB缓冲液配制法

pH

0.2Mol/LNa2HPO4（ml）

0.2Mol/LNaH2PO4（ml）

5.8

8.0

92.0

6.0

12.3

87.7

6.2

18.5

81.5

6.4

26.5

73.5

6.6

37.5

62.5

6.8

49.0

51.0

7.0

61.0

39.0

7.2

72.0

28.0

7.4

81.0

19.0

7.6

87.0

13.0

7.8

91.5

8.5

8.0

94.7

5.3

0.2Mol/LNa2HPO4·2H2O溶液35.61g/L

Na2HPO4·12H2O溶液含71.64g/L

0.2Mol/LNaH2PO4·H2O溶液含27.60g/L

NaH2PO4·2H2O溶液含31.21g/L

欲配0.1Mol/LPB缓冲液则在0.2Mol/LPB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。

欲配制PBS液时，则在溶液中加0.85％的NaCl溶液即可。

（五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）

（0.15Mol/LPH7.2）

NaCl8.0g

KCl0.2g

Na2HPO41.15g

（如为Na2HPO4·12H2O，则为2.89g）

KH2PO40.2g

将上述试剂依次溶于1000ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌10min~15min，存在4℃冰箱中备用。

此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。

（六）硼酸盐缓冲液（Boratesalinebuffer）

1．硼酸（Ｈ3BO3）

0.2Mol/L硼酸：

硼酸12.37g加水至1000ml。

2．硼砂（Na2B4O7）

0.05Mol/L硼砂：

硼砂19.07g加水至1000ml。

附表4不同pH的0.2Mol/L硼酸缓冲液配制法

pH

0.05Mol/L硼砂（ml）

0.2Mol/L硼酸（ml）

pH

0.05Mol/L硼砂（ml）

0.2Mol/L硼酸（ml）

7.4

1.0

9.0

8.2

3.5

6.5

7.6

1.5

8.5

8.4

4.5

5.5

7.8

2.0

8.0

8.7

6.0

4.0

8.0

3.0

7.0

9.0

8.0

2.0

（七）巴比妥缓冲液

1．pH8.2离子强度0.05Mol/L巴比妥缓冲液

巴比妥钠47.6g

蒸馏水3000ml

1.17NHCl55.0ml

（1.17NHCl=193ml浓HCl加1807ml蒸馏水）

⑴将4.76g巴比妥钠溶于3000ml蒸馏水。

⑵加1.17NHCl55ml。

⑶用HCl调节pH到8.2，并加蒸馏水至4265ml。

2．pH8.40.06Mol/L巴比妥缓冲液

巴比妥1.84g

巴比妥钠10.30g

加蒸馏水至1000.00ml

3．pH8.60.06Mol/L巴比妥缓冲液

巴比妥1.66g

巴比妥钠12.76g

加蒸馏水1000.00ml

（八）0.2Mol/L醋酸盐缓冲液见表附表5

附表50.2Mol/L醋酸盐缓冲液配制法

pH

0.2Mol/L

Tris（ml）

0.1Mol/L

HCl（ml）

pH

0.2Mol/L

Tris（ml）

0.1Mol/L

HCl（ml）

23℃

37℃

23℃

37℃

9.10

8.95

25

5

8.06

7.90

25

27.5

8.92

8.76

25

7.5

7.96

7.82

25

30.0

8.75

8.60

25

10.5

7.87

7.73

25

32.5

8.62

8.48

25

12.5

7.77

7.63

25

35.0

8.50

8.37

25

15.5

7.66

7.52

25

37.5

8.40

8.27

25

17.5

7.54

7.40

25

40.0

8.32

8.18

25

20.0

7.36

7.22

25

42.5

（九）三羟甲基甲烷—盐酸缓冲液（Tris—HCl缓冲液）

不同pH，0.05Mol/L

25ml0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷加хml0.1NHCl，加水稀释至100ml（见下表）

附表6Tris—HCl缓冲液配制法

pH

0.2Mol/L

Tris（ml）

0.1NHCl

（ml）

pH

0.2Mol/L

Tris（ml）

0.1NHCl

（ml）

23℃

37℃

23℃

37℃

9.10

8.96

25

5

8.05

7.90

25

27.5

8.92

8.78

25

7.5

7.96

7.82

25

30.0

8.74

8.60

25

10.0

7.87

7.73

25

32.5

8.62

8.48

25

12.5

7.77

7.63

25

35.0

8.50

8.37

25

15.0

7.66

7.52

25

37.5

8.40

8.27

25

17.5

7.54

7.40

25

40.0