桂芍散结丸质量标准研究Word格式.docx
- 文档编号:17800538
- 上传时间:2022-12-10
- 格式:DOCX
- 页数:9
- 大小:121.74KB
桂芍散结丸质量标准研究Word格式.docx
《桂芍散结丸质量标准研究Word格式.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《桂芍散结丸质量标准研究Word格式.docx(9页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
为了有效控制本制剂质量,保证临床疗效,笔者对方中的红花、黄柏进行了显微鉴别,对王不留行、赤芍、醋延胡索、黄柏药材进行了薄层色谱鉴别,并用高效液相法测定赤芍中芍药苷的含量。
1
仪器与试药
奥林巴斯BX53型生物显微镜;
GOODLOOK-1000薄层色谱成像系统;
岛津LC-20A高效液相色谱仪;
MS205DU梅特勒电子天平;
KS-500EI超声波清洗机;
真空脱气器;
DP-01无油真空泵。
芍药苷对照品(中国食品药品检定研究院,11);
王不留行对照药材(中国食品药品检定研究院,12);
延胡索乙素对照品(中国食品药品检定研究院,11);
盐酸小檗碱对照品(中国食品药品检定研究院,11);
桂芍散结丸供试品(批号141011、141111、141212)及其相应阴性样品均由淄博市中医医院提供;
硅胶G薄层板(Merck公司);
乙腈(天津科密欧,色谱纯);
甲醇(天津康科德,色谱纯);
磷酸(上海安谱科学仪器有限公司,色谱纯);
水为娃哈哈纯净水;
其他试剂均为分析纯。
2
方法与结果
2.1
显微鉴别
取本品粉末,置显微镜下观察:
黄柏纤维鲜黄色,直径16~38μm,周围细胞含草酸钙方晶,形成晶鞘纤维;
含晶细胞壁木化增厚
(1)。
红花花粉粒类圆形、椭圆形或橄榄形,直径约至60μm,具3个萌发孔,外壁有齿状突起
(2)。
结果见图1。
图1
黄柏、红花显微鉴别
2.2薄层色谱鉴别【1】
2.2.1
赤芍薄层色谱鉴别
取本品10g,加甲醇50ml,超声20分钟,过滤,滤液蒸干,残渣加水20ml溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次20ml,合并正丁醇液,再用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次30ml,弃去水液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇5ml使溶解,加在中性氧化铝柱(100-200目,5g,内径1cm)上,用甲醇50ml洗脱,收集洗脱液,水浴上蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液。
另取按处方比例和工艺制备不含赤芍的阴性对照样品,按上述供试品制备方法制得阴性对照溶液。
再取芍药苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。
照薄层色谱法((2015版药典通则0502))试验【2】,吸取上述三种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
阴性对照溶液色谱在相应位置没有斑点。
结果见图2。
图2赤芍薄层色谱图
2.2.2
王不留行薄层色谱鉴别
取本品10g,研细,加70%甲醇25ml,超声处理30分钟,放冷,滤过,滤液浓缩至约10ml,作为供试品溶液。
另取按处方比例和工艺制备不含王不留行的阴性对照样品,按上述供试品制备方法制得阴性对照溶液。
再取王不留行对照药材1.5g,同法制成对照药材溶液。
照薄层色谱法(2015版药典通则0502)试验,吸取上述三种溶液各2μl,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以甲醇-水(4∶6)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2%三氯化铝乙醇溶液,热风吹干,置紫外光灯(365nm)下检视。
供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光主斑点。
结果见图3。
图3王不留行薄层色谱图
2.2.3
醋延胡索薄层色谱鉴别
取本品10g,研细,加甲醇50ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水10ml使溶解,加浓氨试液调至碱性,用乙醚振摇提取3次,每次10ml,合并乙醚液,蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液。
另取按处方比例和工艺制备不含醋延胡索的阴性对照样品,按上述供试品制备方法制得阴性对照溶液。
再取延胡索乙素对照品,加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。
照薄层色谱法(2015版药典通则0502)试验,吸取上述三种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-丙酮(9∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,置碘缸中约3分钟后取出,挥尽板上吸附的碘后,置紫外光灯(365nm)下检视。
供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
结果见图4。
图4醋延胡索薄层色谱图
2.2.4
黄柏薄层色谱鉴别
取本品10g,研细,加浓氨试液2ml,甲醇30ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml作为供试品溶液。
另取按处方比例和工艺制备不含黄柏的阴性对照样品,按上述供试品制备方法制得阴性对照溶液。
再取盐酸小檗碱对照品,加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。
照薄层色谱法(2015版药典通则0502)试验【3】,吸取上述三种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)为展开剂,置氨蒸气饱和的展开缸内,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。
供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,阴性对照溶液色谱在相应位置没有斑点。
结果见图5。
图5黄柏薄层色谱图
2.3
赤芍中芍药苷的HPLC法含量测定
2.3.1
色谱条件与系统适用性试验
色谱柱:
岛津InertsilODS-SPC185um,150×
4.6mm;
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;
流动相:
乙腈-0.1%磷酸溶液(14:
86);
流速:
1.0ml/min;
检测波长:
230nm;
柱温:
30℃;
进样量:
10ul;
在此色谱条件下,供试品中芍药苷色谱峰的峰型较好,与其他组分峰能达到基线分离,芍药苷保留时间为10.475min。
理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000。
2.3.2
溶液制备
供试品溶液制备:
取本品适量,研细,约3.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入稀乙醇50ml,密塞,称定重量,超声处理(功率240W,频率40kHz)30分钟,取出,放冷,再称定重量,用稀乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
对照品溶液制备:
取芍药苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含136.9651ug的溶液,即得。
阴性对照品溶液制备:
按照桂芍散结丸的制备工艺,制备不含赤芍的样品,并按“2.3.2”项下“供试品溶液制备”方法制成阴性对照溶液。
2.3.3专属性试验
分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液以及阴性对照溶液各10ul,按“2.3.1”项下色谱条件进样检测。
供试品色谱中,在与对照品色谱保留时间相同的位置上,有相应色谱峰,阴性对照色谱在与芍药苷对照品色谱相同的保留时间处,无色谱峰干扰。
结果见图6.
A
B
C
图6专属性色谱图
A.芍药苷对照品
B.供试品
C.阴性对照
2.3.4线性关系考察
精密称取芍药苷对照品(批号:
11)17.76mg(芍药苷含量96.4%),置50ml容量瓶中,加稀乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得浓度为342.4128ug/ml的对照品溶液,作为贮备液。
从贮备液中分别精密量取2ml、1ml、1ml、2ml、5ml,分别置25ml、10ml、5ml、5ml、10ml的量瓶中,加稀乙醇稀释至刻度,摇匀,即得到浓度为27.3930ug/ml、34.2413ug/ml、68.4826ug/ml、136.9651ug/ml、171.2064ug/ml的对照品溶液。
分别精密吸取上述芍药苷对照品溶液各10ul,按“2.3.1”项下色谱条件进样测定。
以芍药苷对照品的进样量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线,求得回归方程为Y=1445469.47X-35220.60(R=0.9999)。
结果表明,芍药苷进样量在0.2739~3.4241μg范围内与其峰面积呈良好的线性关系。
2.3.5
仪器精密度试验
精密吸取芍药苷对照品溶液(136.9651ug/ml)10ul,按“2.3.1”项下色谱条件进样测定,连续进样6次。
结果,RSD=0.225%(n=6),显示仪器精密度良好。
2.3.6
稳定性试验
取同一供试品溶液适量(批号:
141212),按“2.3.1”项下色谱条件进样测定,每隔1小时进样一次,连续考察6小时。
结果,RSD=0.382%(n=6),表明供试品溶液在6小时内稳定。
2.3.7
重复性试验
取同一批的本制剂(批号:
141212)6份,照“2.3.2”项下供试品溶液的制备方法制成供试品溶液,按“2.3.1”项下色谱条件进样测定。
结果,样品平均含量为1.6652mg/g,RSD=0.40%(n=6),表明方法重复性良好。
2.3.8
加样回收试验
取已测知含量的本制剂适量(批号:
141212,芍药苷含量为1.6652mg/g),研细,取约1.2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入“2.3.5”项下芍药苷对照品储备液(浓度为342.4128ug/ml)7ml及稀乙醇共计50ml,密塞,称定重量,超声处理(功率240W,频率40kHz)30分钟,取出,放冷,再称定重量,用稀乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
平行制备6份。
分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl,按“2.3.1”项下色谱条件进样测定,计算加样回收率。
试验结果表明,本方法加样回收率良好。
见表1。
表1加样回收率试验结果(n=6)
取样量
(g)
样品中含量(mg)
对照品加入量(mg)
测得量
(mg)
回收率(%)
平均
(%)
RSD
1.2015
2.0007
2.3969
4.2552
94.06
95.62
1.11
1.2012
2.0002
4.2642
94.46
4.3052
96.16
1.2009
1.9997
4.3058
96.21
1.2005
1.9991
4.3087
96.36
1.2001
1.9984
4.3099
96.44
2.3.9样品含量测定
取3批桂芍散结丸样品(批号141212、141111、141011),按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液,按“2.3.1”项下色谱条件进行测定,计算样品含量,每批测定2次。
结果,3批样品中芍药苷含量分别为1.6639mg/g、1.4216mg/g、1.4188mg/g。
见表2。
表2样品含量测定结果
批号
含量1(mg/g)
含量2(mg/g)
平均含量(mg/g)
141212
1.6636
1.6642
1.6639
141111
1.4229
1.4204
1.4216
141011
1.4193
1.4183
1.4188
3
讨论
桂芍散结丸所含的药味较多,除本实验已经鉴别的药味外,还进行了其他药味的薄层色谱鉴别研究。
穿山甲在本制剂处方组成中占量较少,薄层色谱鉴别时供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点但不清晰,未列入质量标准。
红花薄层色谱鉴别,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,但是斑点色泽不鲜明,故未作为质量标准。
含量测定试验中对不同取样量(2g、3g、4g)进行了考察,结果分别为1.6554mg/g、1.6632mg/g、1.6713mg/g,显示三种取样量结果差异不大,确定取样量为3g。
对不同提取方法(超声30min、加热回流30min、加热回流1h)进行了比较研究,结果显示芍药苷超声提取30min即可提取完全并且快速、简便、节约能源。
桂芍散结丸是由中药饮片粉碎后的细粉经加工制成的水丸,在1000g的桂芍散结丸中含赤芍生药90g。
根据2015年版一部“赤芍”项下规定,芍药苷的含量限度为“不得少于1.5%”,由此计算理论含量应为1.35mg/g,参考生粉入药其有效成分的转移率为90%这一原则,结合三批样品的含量测定结果,暂定本品每g含赤芍以芍药苷(C23H28O11)计,不得少于1.20mg。
参考文献
【1】国家药典委员会.中华人民共和国药典(四部)
【S】.北京:
中国医药科技出版社,2015.
【2】韩德世,鲁建武.祛风消痛颗粒的薄层色谱鉴别【J】.中国医院药学杂志,2007,27(10):
1472-1473
【3】杨立新,王锦玉.牛黄上清微丸定性及定量分析【J】.中国实验方剂学杂志,2010,16(16):
69-70
作者简介
杜毅,男,山东淄博人,副主管药师,研究方向:
中药鉴定、中药制剂、中药质量控制。
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 散结 质量标准 研究