全自动血液分析仪 SYSMEX XE2100Word文件下载.docx
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然后将该样品送入流动池中。
这种鞘流装置改进了细胞计数的准确性和重现性。
同时,由于血细胞颗粒成行通过该流动池的中心,故而防止产生异常血液脉冲并可减少流动池的污染。
一个半导体激光束通过该流动池照射到血细胞上。
前向散射光由光电二极管接收,侧向散射光和侧向荧光则由光电倍增管接收。
光信号被转化为电脉冲,从而可以得到有关血液细胞的信息。
前向散射光和侧向散射光当一束激光照射到血细胞颗粒上时,就产生光散射。
XE-2100检测前向散射光和侧向散射光,前向散射光的强度反映血液细胞体积大小。
侧向散射光的强度反映细胞内部(如细胞核的体积大小)的信息。
侧向荧光当光照射到经过荧光染色的血液细胞上时,就产生比入射光波长更长的光。
随着染色集团浓度的增加,荧光强度也增加。
通过测量荧光强度,可以得到有关血细胞染色的信息,XE-2100检测侧向荧光。
2.3SLS-血红蛋白测定法在稀释的血液中加入溶血素,红细胞中的血红蛋白被释放出来。
血红蛋白在月桂洗硫酸钠的作用下,二价铁转变成三价铁,并与月桂洗硫酸钠结合形成SLS-Hb,SLS-Hb进入血红蛋白检测系统。
测定SLS-Hb在555nm波长下的吸光度值,并通过与加入样品前稀释液的吸光度进行对比进行计算。
2.4计算(红细胞指数)红细胞指数(MCV、MCH和MCHC)通过RBC计数(RBC)、Hb浓度(HGB)和红细胞压积(HCT)的值计算出。
计算公式如下:
MCV(fl)=HCT×
1015RBC/LMCH(pg)=HGB(g/L)×
1012RBC/LMCHC(g/L)=HGB(g/L)HCT4.试剂4.1稀释液(CELLPACK)试剂品牌:
Sysmex代码:
PK-30L包装规格:
20L试剂成份:
氯化钠6.38g/L硼酸1.00g/L四硼酸纳0.20g/LEDTA-K20.20g/L储存条件:
须存储于干净的环境中,防止阳光直射,适宜温度为15~30℃。
使用期限:
在失效期前使用;
开封后的使用期限为60天。
安全事项:
在使用前确认是否有污染或颜色变化,一经发现,请速更换。
如出现冻结现象,将其解冻,混匀后使用。
注意事项:
注意防尘。
4.2鞘液(CELLSHEATH)试剂品牌:
SE-90L包装规格:
氯化钠7.1g/L氨丁三醇缓冲液2.0g/L乙二胺四乙酸二钾0.20g/L表面活性剂0.8g/L储存条件:
须存储于干净的环境中,防止阳光直射,适宜温度为5~30℃。
避免和眼睛、皮肤接触,一旦接触,用大量清水冲洗,并适当考虑必要的医疗措施。
若试剂有污染或颜色的变化,更换试剂。
如出现冻结现象,将其解冻、混匀后使用。
4.3嗜碱细胞溶血素(STROMATOLYSER-FB)试剂品牌:
FBA-200A包装规格:
5L试剂成份:
非离子表面活性剂0.4%储存条件:
须存储于干净的环境中,适宜温度为5~30℃。
3.5安全事项:
在试剂使用前须确认是否有污染或颜色的变化,一经发现,须速更换。
若试剂出现冻结现象,用前将其解冻充分混匀后使用。
4.4白细胞分类溶血素(STROMATOLYSER-4DL)试剂品牌:
FFD-200A包装规格:
非离子表面活性剂0.18%有机季铵盐0.08%储存条件:
4.5白细胞分类染液(STROMATOLYSER-4DS)试剂品牌:
FFS-800A包装规格:
42ml×
3袋试剂成份:
聚次甲基染料0.002%甲醇3.0%1,2-亚乙基二醇96.9%储存条件:
须存储于干净的环境中,避光,适宜温度为2~35℃。
若试剂有任何污损、浑浊、不稳定或颜色变化的迹象,须更换。
但避免冻结。
4.6有核红细胞染色液(STROMATOLYSER-NR)试剂品牌:
SNR-800包装规格:
12ml×
聚次甲基染料0.01%1,2-亚乙基二醇99.9%储存条件:
4.7血红蛋白溶血素(SULFOLYSER)试剂品牌:
SLS-220A包装规格:
月桂洗硫酸钠1.7g/L储存条件:
4.8幼稚细胞溶血素(STROMATOLYSER-IM)试剂品牌:
SIM-220A包装规格:
10L试剂成份:
氢氧化钠0.03%氯化钠0.41%非离子表面活性剂2.4%储存条件:
4.9清洁剂(CELLCLEAN)试剂品牌:
CL-50包装规格:
50ml试剂成份:
次氯酸钠(有效氯浓度为5%)储存条件:
须存储于干净的环境中,防止阳光直射,适宜温度为1~30℃。
在失效期前使用。
本品为强碱性洗涤剂,避免和眼睛、皮肤、衣物接触,一旦接触,用大量清水冲洗,并适当考虑必要的医疗措施。
若试剂发生凝固,须替换。
4.10有核红细胞溶血素(STROMATOLYSER-NR)试剂品牌:
Sysmex包装规格:
1L试剂成份:
乙二醇储存条件:
6.10.4.使用期限:
避免和眼睛、皮肤、衣物接触,一旦接触,用大量清水冲洗,并适当考虑必要的医疗措施。
4.11网织红细胞稀释液(RETSEARCH-IIDilution)试剂品牌:
1L试剂成分:
甲醇和乙二醇储存条件:
4.12网织红细胞染液(RETSEARCH-IIStain)试剂品牌:
12ml试剂成分:
聚次甲基染料。
储存条件:
试剂的使用:
以上所有试剂每瓶试剂开封后应注明启用日期、失效期(开瓶后2个月,或有效期内)并附签名。
5.授权操作人临检室×
×
,×
6.仪器的常规操作开机后先做质控,质控通过后进行样本检测。
标本验收合格,经接收标号打印XE-2100样本分配单,待检。
6.1标本检测:
为了验证手动与自动模式,每日随机取2份新鲜血标本进行close与open模式结果比对,以close为靶值(close-open)/close来计算偏移(CV%)符合比对要求,以上检测通过后进行病人样本检测。
手动模式进样器模式准备就绪(屏幕显示准备就绪(READY)信息,READYLED绿灯亮)按[手动(MANUAL)]键将样品管放在样品架上在数字键上输入标本号将样品架放在进样器中按[V]键,激活“模式选择(Mode)”按[进样器(Sampler)]键按[<
]和[>
]光标键选择[1.手动模式(Manual)]在数字键上输入标本号颠倒试管,彻底混匀样品取下盖子按[V]键,激活“样品架编号-管位置号(Rack-Tube)”将样品管放在取样针中在数字键上输入样品架号和管位置号按开始键按[Sampler]键当READYLED灯灭、连续两次发出短促的蜂鸣声,取下样品管仪器进行检测准备就绪(屏幕显示准备就绪(READY)信息,READYLED绿灯亮)准备下一个/批样品,重复以上步骤进行检测6.2在进样器模式进行急诊分析按[进样器(Sampler)]键终止进样器运行→屏幕显示“STATREADY”→按[手动(MANUAL)]键→在数字键上输入标本号→手工模式分析样本→分析完毕,屏幕显示“STATREADY”→按[进样器(Sampler)]键,恢复进样器操作。
操作中注意个人安全,如标本需打开盖子,应戴好防护镜口罩或在有机玻璃挡板后打开。
6.3质控品(4个):
6.3.1质控品品牌:
Sysmex(高、中2个水平e-CHECK)6.3.2储存条件:
2℃~8℃(每日须复核一次冰箱温度)。
6.3.3使用期限:
临检中心质控开瓶后XX天;
Sysmexe-CHECK质控开瓶后14天。
质控品开启后应注明开启日期,失效期并签名。
6.3.4质控频率:
每天开机后在标本检测前进行一次质控品的分析(4个质控品均做)。
质控频度验证每年一次,由岗位操作员完成。
6.3.5质控操作:
从冰箱中取出e-CHECK,使用前检查有效期及状况(如极度溶血或失效,应及时更换),在室温环境下(18~30℃)静置15分钟。
保持瓶子直立状态在双掌中轻轻滚动20次,将其颠倒再滚动20次,再将质控品上下颠倒20次混匀至红细胞完全混合,在质控模式下进行检测。
6.3.6质控期望值:
至少满足2个e-CHECK在靶值±
极限值内,记录质控结果后开始做标本。
失控时应采取的措施:
质控结果超出期望值时,需查找原因,检查质控品是否在有效期内,过期或近过期需更换新的质控品,检查试剂情况,是否需更换。
再检查仪器的各项参数是否在控,如各项检查操作后质控仍失控则联系工程师,责任人需通知组长。
与此同时联系急症病人相关医生,如为急诊标本及时送往门急诊化验室检测。
直至质控通过,开始做标本。
每次失控必须分析原因,记录处理过程并签名。
失控记录夹入指定的文件夹内保存,保存期为二年。
6.3.7更换批号后靶值设定:
取开始10次QC结果,计算均值,为靶值,靶值应落在厂商提供的范围内,以累计6个月CV%均值(或近两个月CV%较大值),
通过均值乘以CV%=1SD,质控范围设定为2.7SD。
由组长或组长指定人员负责计算。
6.3.8定期打印质控曲线,曲线上注明使用质控品的批号和效期,并签上责任人姓名。
所有室内质控打印及记录夹入指定的文件夹内保存,保存期为二年。
每日由操作员记录质控状况与X-barm记录于记录本。
7.仪器保养7.1每日保养:
正常开机、压缩机防逆流瓶液体检查、背景检测通过、温度报警、工作时间(h)、使用情况、关机正常记录在XE-2100使用维护记录。
关机程序:
分析完毕,屏幕显示“Ready”字样,READYLED绿灯亮时,按[Shutdown]键。
将CELLCLEAN放入手动移液针上,按START开关。
在READYLED灯灭,且蜂鸣声停止时,移开CELLCLEAN。
7.2月保养或需要时进行的维护(由工程师进行):
清洗选旋转阀托盘。
清洗冲洗块。
清洗穿刺取样器托盘。
清洗IMI检测器空。
清洗RBC检测器孔。
去除光检测器盒中流动池内的空泡。
清洗光检测器盒中的流动池。
激光单元外观检查。
8.参考资料1.叶应妩,王毓三.全国临床检验操作规程[M].第二版.江苏:
东南大学出版社,1997.5-7.2.SysmexXE-2100中文操作手册。
全自动血液分析仪SYSMEXXE2100,
红血球天生功能评价:
方法学的进展——全自动血液分析仪SYSMEXXE2100
G.d‘OnofrioG.MistrettaG.GiordanoG.Zini
血液学自动分析方法临床评价和发展研究中心(ReCAMH)
---罗马CattoliadelSacroCuore大学血液学系
关键词:
红细胞,网织红细胞,有核红细胞,成红血球细胞,血细胞自动计数
摘要
近年来血细胞自动计数技术发展在很大程度上进步了红细胞测定的精确性和正确性。
同时,创新的自动检测装置和丈量新参数,如未成熟网织红细胞指数(IRF)和有核红细胞数(NRBC),也进步了全血细胞计数的临床诊断价值。
目前已有很多文献报道有关此新丈量技术在诊断和血液病随访以及在确定诊断标准化和一致性方面的运用。
新型血液细胞分析仪XE-2100就是一个将创新技术应用到常规红细胞分析中的范例。
血红蛋白浓度应用于红细胞增生情况的定量评估,同时结合均匀红细胞体积(MCV)和红细胞体积分布宽度(RDW)用于贫血分类。
带有未成熟网织红细胞指数的流式网织红细胞仪计数在新的领域有了非常出色的应用,诸如监测造血前体细胞移植中前体细胞的增殖;
监测因贫血而接受人重组促红细胞天生素治疗后红系增生的情况或体育运动方面滥用人重组促红细胞天生素的监控等。
运用XE-2100进行NRBC计数具有如下特点:
精确,正确,灵敏度和特异度高。
它在实验室检测中的应用将降低涂片复检次数,也将为新生儿学和血液病学提供有价值的诊断信息。
先容
从1934年Moldavan和1953年CroslandTaylor初步实验后,人红细胞(RBCs)自动分析开始有了很大的发展:
表现为脉冲高度分析和均匀红细胞体积(MCV)自动检测的Coulter方法。
红细胞分析技术的持续发展也促进了持续流式光学系统,多通道血液学分析仪,激光血液学分析仪,以及多参数血液学自动计数的发展。
此类新技术不仅提供了更快,更可靠及更正确的检测手段,而且也为RBC在诊断血液病(包括红血球天生)的运用方面引进了新参数。
本文意在回顾一些与红细胞天生功能和贫血诊断相关的现代红细胞分析特点,以最新的综合性的分析装置之一,血液细胞分析仪为例。
传统的红细胞定性定量分析---基本用途
所有的现代血细胞计数仪对红细胞计数都是和血小板计数一起在一精密分析通道中完成。
除小部分例外,多数自动丈量方法与其他仪器一致,XE-2100对红细胞计数采用电阻抗原理。
这些检测方法的精确度高,所有RBC参数的变异系数小于0.5%。
在颗粒计数上的技术题目,例如非轴性的活动,活动中的外形改变,颗粒回流进计数敏感区,以及由于重叠造成的计数减少等已经被新的方法大大的克服了,例如小鞘液聚焦技术的引进。
小型化仪器提供可靠的分布曲线和计数结果。
但是,RBC计数不能很好反映贫血或红细胞增多症,比如由于珠蛋白合成障碍性贫血或巨幼红细胞症所至的细胞大小改变。
血红蛋白(HGB)浓度是评估血液运输氧气最有效的量化指标并能有效的,固然是间接的,反映实际红细胞循环数目。
传统的HGB浓度测定运用了氰化高铁血红蛋白法(540nm)。
随着新技术发展出现了无氰化物血红蛋白分析法例如在Sysmex血液分析仪运用的十二烷基磺酸钠法(SLS)。
HGB是最可靠的,正确度高,标准化且同一的血液指标,由于它是唯逐一项有血红蛋白氰化物参考品以及基于HICN-HGB的参考方法的血液学参数。
另一方面,红细胞压积(HCT)或压紧的红细胞体积(PCV)则是细胞通过自动血液分析仪敏感装置时产生的电脉冲而获得。
最简单情况是通过RBC与MCV乘积计算得来,而Sysmex系统则是通过脉冲大小的累加换算得来。
任何情况下,通过电子测定HCT似乎是多余的参数,很轻易被忽略。
手工测定的HCT由于血浆丢失和细胞皱缩等情况而与自动测定的HCT有明显的差异。
与手工测定相比,自动测定(通过脉冲均匀值或大小总和及RBC计数)系统性低估了HCT(和MCV),而均匀红细胞血红蛋白浓度(MCHC)则被高估,并且灵敏度降低。
但是,自动测定明显进步了最有用Wintrobe指标的精确性和正确性,如MCV,并且为临床医生提供诊断红血球大小不等症的新定量指标,如红细胞分布宽度(RDW),根据分布图计算红细胞大小标准误差或变异系数。
这些反映RBC特性的定性指标在很多临床方面非常有用。
例如,均匀红细胞体积(MCV)高范围及RDW增加可早期反映酒精中毒,肝病,B12/叶酸亚缺乏,产业污染(有机溶剂),骨髓细胞发育异常(化疗后),以及AZT和羟基脲治疗依靠性。
而均匀红细胞体积(MCV)低范围及RBC大小变异系数增加(RDW)则是典型的缺铁指标。
不同研究中RDW对缺铁有很高的敏感性,固然它的特异性较低。
另外,在珠蛋白合成障碍性贫血患者中,RDW值正常或仅有轻度增加。
红细胞增生的动态评价:
网织红细胞计数----进一步运用
过往二十年网织红细胞自动检测技术的发展从根本上改变了过往其在临床应用方面的限制性,这回根于其正确度和灵敏度的进步甚至是在正常与低水平范围方面。
这些进步开拓了其在新医学领域的更广泛应用,加快了综合性仪器和方法学的发展。
由此,标准化和一致性成为当今流式细胞仪网织红细胞计数的主要议题。
最新的网织红细胞计数进展是新一代多参数血液分析仪应用全自动分析方法的发展结果(图1)。
其中一些系统运用RNA荧光染色和激光测定网织红细胞和相关参数;
另一些则利用体外活体染色导致网状物质沉积和着色而被光吸收或分散测定。
首先介绍一下DIFF散点图中的两个坐标轴所对应的检测通道:
SSC轴,代表侧向散射光(SideSCatter,SSC)的信号强度
SFL轴,代表侧向荧光(SideFLuorescence,SFL)的信号强度
DIFF散点图中,利用侧向散射光SSC和荧光SFL将白细胞分成如下几个亚群:
中性粒细胞NEUT(neutrophilicgranulocyte)
单核细胞Mono(mononuclearleucocyte)
淋巴细胞Lymph(Lymphocyte)
嗜酸性粒细胞EO(eosinophilicleucocyte)
嗜碱性粒细胞BASO(basophilicleucocyte)
由于嗜酸性粒细胞BASO的比例很小,而且通常和中性粒细胞NEUT混在一起,很难区分。
通常采用另外一个专用的BASO通道进行检测。
所以DIFF通道通常提供白细胞的四种分类(中性NEUT、单核Mono、淋巴Lymph、嗜酸EO)。
侧向散射光SSC通常反映了细胞内部颗粒结构的复杂程度。
例如,嗜酸性粒细胞EO由于内部颗粒特征明显,其侧向散射光SSC信号最强,落在DIFF散点图的最右方。
由于荧光染料通常和细胞中的DNA/RNA核酸结合,所以侧向荧光信号SFL通常反映了核酸的含量的多少,反映了细胞发育的成熟程度。
DIFF散点图中,淋巴和单核细胞之间的间隔比较小。
可以通过调整SSC和SFL通道的增益进行微调,在调整过程中,需要注意对幼稚细胞报警和细胞碎片的影响。
下面将对DIFF散点图形态与未成熟粒细胞报警(IG)和血影碎片区(Ghost)进行讲解
高级讲解
2003年9月8日,Sysmex的新参数未成熟粒细胞(immaturegranulocyte,IG)通过了美国FDA的审批。
该参数作为XE2100的一个算法软件升级包被单独出售。
XE5000中则标配了该软件包,可以对IG细胞进行定量测量,并且由此宣称实现了白细胞的六分群(6-partDifferential)。
占白细胞最大比例的粒细胞完整的生长要历经原粒细胞(Myeloblast)、早幼粒细胞(Promyelocyte)、中幼粒细胞(Myelocyte)、晚幼粒细胞(Metamyelocyte)进而分化为成熟的杆状核和分叶核粒细胞。
在粒细胞的成熟过程中,其细胞中的核酸含量逐步减少。
实际上,IG检测只是利用了粒细胞成熟过程中的不同阶段核酸含量不同所导致的荧光信号强度变化,通过算法处理将未成熟粒细胞IG(包括早幼粒细胞Promelocyte,
中幼粒细胞Myelocyte,
晚幼粒细胞Metam
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