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(3)检测有毒物质,判断物质的毒性。
(4)用于生理、病理、药理等方面的研究。
三、动物体细胞核移植技术和克隆动物
1.理论基础
动物细胞核的全能性。
2.概念
将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体。
包括胚胎细胞核移植和体细胞核移植两类。
3.过程
4.应用前景
(1)加速家畜遗传改良进程,促进优良畜群繁育。
(2)增加濒危物种的存活数量。
(3)转基因动物可作为生物反应器生产医用蛋白。
(4)用于组织器官的移植。
(5)研究胚胎发育及衰老过程。
(6)追踪研究疾病的发展和治疗疾病。
5.存在问题
(1)成功率低。
(2)绝大多数克隆动物还存在健康问题。
(3)克隆动物食品的安全性问题存在争议。
一、动物组织培养
仔细阅读教材P44~46,观察分析图2-16,探讨下列问题:
1.为什么选择动物胚胎或幼龄动物的器官或组织进行动物细胞培养?
提示:
幼龄动物的组织细胞分化程度低、分裂能力强,比老年动物的组织细胞易于培养。
2.进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞,说明细胞间的物质主要成分是什么?
用胃蛋白酶行吗?
蛋白质。
不行,因为培养动物细胞的pH不适合胃蛋白酶发挥作用。
3.动物胚胎或幼龄动物的器官剪碎后用胰蛋白酶处理的目的是什么?
不定期用胰蛋白酶把培养细胞从瓶壁上脱离的目的是什么?
动物胚胎或幼龄动物的器官剪碎后用胰蛋白酶分解组织细胞间质中的胶原蛋白,从而使组织分散成单个细胞。
在进行培养时使细胞与培养液充分接触。
细胞在培养瓶中贴壁生长,随着细胞的生长和繁殖,培养瓶中的细胞越来越多,当贴壁生长的细胞分裂生长到表面相互接触时就停止增殖,这种现象叫做接触抑制。
需要定期用胰蛋白酶处理,使细胞从瓶壁上脱离下来,进行传代培养。
4.多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中。
你认为体外培养细胞时需要提供哪些物质和什么样的环境条件?
充足的营养供给、适宜的温度、适宜的pH和气体环境以及无菌、无毒的环境。
5.培养动物细胞的培养基是液体培养基还是固体培养基?
培养基中为什么要加入动物血清?
液体培养基。
为了保证细胞培养时营养物质和生长因子的供给,培养基中需添加一定量的动物血清等天然成分,可以补充合成培养基中缺乏的物质。
6.动物细胞的培养过程是怎样的?
提示
:
二、动物体细胞核移植技术和克隆动物
阅读教材P47~49,观察分析图2-21、2-22,探讨下列问题:
1.为什么动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植?
因为胚胎细胞分化程度低,恢复其全能性相对容易,而动物体细胞分化程度高,恢复其全能性十分困难。
2.动物体细胞核移植时选用卵母细胞作受体细胞的原因是什么?
因为卵母细胞体积大,易操作,而且含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。
3.试分析克隆动物遗传性状与其体内遗传物质构成具有怎样的关系?
动物体细胞核移植产生的新个体的亲本有三个:
体细胞核供体、卵母细胞细胞质供体、代孕母体。
新个体细胞核基因型与体细胞核供体完全一样,因此新个体性状与体细胞核供体基本相同。
卵母细胞的细胞质中也有少量的DNA,故新个体性状与卵母细胞细胞质供体有一些地方相同。
代孕母体没有为新个体提供遗传物质,新个体性状与代孕母体基本没有联系。
下列关于动物细胞培养的叙述,正确的是( )
A.培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞
B.克隆培养法培养过程中多数细胞的基因型会发生改变
C.二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的
D.恶性细胞系的细胞可进行传代培养
[解析] 由于接触抑制,动物细胞培养时只能形成单层细胞;
克隆培养法在培养时,由于所有子代细胞来自于一个亲代细胞,所以基因型一般都相同;
二倍体细胞的传代培养次数通常是有限的,只有少数细胞遗传物质发生改变,才能无限增殖;
恶性细胞系的细胞具有癌变的特点,可进行传代培养。
[答案] D
随着科学技术的发展,人们可以根据需求来改造生物的性状。
如图是利用奶牛乳汁生产人类血清白蛋白的图解,据图回答问题:
(1)在此过程中涉及到的细胞水平现代生物技术手段主要有________________________________________________________________________。
(2)在基因工程中,我们称②为______________,在②进入③之前要用______________等工具来构建基因表达载体,能实现②进入③的常用方法是___________________________。
(3)图中①一般经______________处理可以得到③,从③到④的过程中一般利用去核后未受精的卵细胞作为受体,而不用普通的体细胞,原因是_________________________________
________________________________________________________________________。
(4)⑦是⑥的后代,那么⑦的遗传性状和____________最相似,原因是______________
如果②的数量太少,常用__________来扩增。
要实现⑦批量生产人类血清白蛋白,则要求③的性染色体是________,利用该方法得到的动物叫做_____________________________。
[研析] 本题综合考查基因工程的基本原理和动物细胞工程中动物细胞培养的条件、核移植过程等相关知识。
具体解题过程如下:
[审]——提取信息
信息a:
由图示文字信息“分散处理培养”可知此生物技术为动物细胞培养。
信息b:
设问(3)文字信息“用去核后未受精的卵细胞作为受体,而不用普通的体细
胞”可推断一个重要原因在于前者的分化程度比后者低。
信息c:
由图示①提供几乎全部遗传物质可知⑦的遗传性状和荷斯坦奶牛最相似。
信息d:
由图示文字信息“乳汁中提取人类血清白蛋白”可知③的性染色体应为XX。
[联]——联系基础
设问
(1)可联系:
基因工程为分子水平上的操作,动物细胞培养和核移植技术为细胞
水平上的操作。
设问
(2)可联系:
构建基因表达载体需要限制酶、DNA连接酶和载体等工具,目的
基因导入受体细胞的方法视受体细胞的类型而定,若为动物细胞,常用方法为显微
注射法。
设问(3)可联系:
同一生物体内细胞全能性大小的比较:
卵细胞>体细胞。
设问(4)可联系:
克隆动物的性状表现主要与具有优良遗传性状的供体动物有关。
[答]——解题规范
设问
(1):
有一个关键词为细胞水平,答“基因工程”(其为分子水平)不给分。
设问
(2):
构建基因表达载体时需要的工具酶有两种即限制酶和DNA连接酶,只答其中一种不给分,把DNA连接酶答成连接酶也不给分。
设问(3):
在表述第二个空涉及的内容时应呈现“卵细胞的分化程度低且为体细胞核表达提供细胞质”等词语,否则酌情扣分。
设问(4):
在作答第一个空时,应通过识图确定⑥为代孕母牛,不能误认为子代是其有性生殖的产物。
[答案]
(1)核移植、动物细胞培养
(2)目的基因 限制酶、DNA连接酶和载体 显微注射法 (3)胰蛋白酶 卵细胞大、易操作、分化程度低,体细胞的细胞核在卵细胞质中才能表现出全能性 (4)荷斯坦奶牛 因为个体⑦的核遗传物质大部分来自荷斯坦奶牛,⑥只是为胚胎发育提供营养和场所,⑦并没有获得⑥的遗传信息 PCR技术 XX 转基因克隆动物
———————————————[课堂归纳]——————————————————
[网络构建]
填充:
①胰蛋白酶 ②胶原蛋白酶 ③细胞悬液 ④原代
⑤传代 ⑥营养 ⑦pH ⑧去核的卵母细胞
⑨动物细胞核的全能性
[关键语句]
1.动物细胞培养的原理是细胞增殖。
2.细胞在培养过程中会出现细胞贴壁(生长)和细胞接触抑制现象。
3.动物细胞的培养分为原代培养和传代培养。
4.动物细胞培养的条件包括:
无菌、无毒的环境,适宜的营养、温度和pH及气体环境。
5.动物细胞核移植的原理是动物细胞核的全能性。
6.哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植。
7.在动物细胞培养中CO2的作用是维持培养液的pH。
1.不能作为组织培养、细胞培养或克隆的生物材料的是( )
A.花粉 B.幼叶
C.卵细胞D.人血中的红细胞
解析:
选D 人血中的红细胞是成熟的红细胞,没有细胞核,不能作为组织培养、细胞培养或克隆的生物材料。
2.进行动物细胞培养时,最好选用的培养材料是( )
A.衰老退化的动物组织细胞
B.成熟动物个体的体细胞
C.动物的受精卵细胞
D.健康动物胚胎或幼龄动物个体的体细胞
选D 健康动物胚胎或幼龄动物个体的体细胞分裂能力强,而衰老退化的动物组织细胞、成熟动物个体的体细胞分裂能力差,一般不用。
3.用于核移植的受体细胞一般都选用( )
A.受精卵B.MⅠ期卵母细胞
C.MⅡ期卵母细胞D.红细胞
选C 由于MⅡ期卵母细胞已停止分裂,为受精前的状态,即已成熟,可作为细胞核移植的受体。
4.用动植物成体的体细胞进行离体培养,下列叙述正确的是( )
A.都需用CO2培养箱
B.都需用液体培养基
C.都要在无菌条件下进行
D.都可体现细胞的全能性
选C 用动植物成体的体细胞进行离体培养都必须在无菌条件下进行。
用植物成体的体细胞进行离体培养获得新个体体现的是细胞的全能性,而动物体细胞离体培养主要是获得细胞的代谢产物。
5.如图为某哺乳动物的生殖过程图,正确的叙述是( )
A.动物个体2为克隆动物,c为高度分化的体细胞
B.动物个体2的遗传性状与提供b细胞的母羊完全不同
C.产生动物个体2的生殖方式为有性生殖
D.e细胞为已完成减数分裂的卵细胞
选A 通过克隆技术培育的动物称为克隆动物,提供细胞核的是高度分化的体细胞;
B项未考虑细胞质基因,应该是“有相同之处”;
动物的克隆实际上是无性生殖过程;
e细胞是处于减数第二次分裂中期的卵母细胞,并没有完全完成减数分裂。
6.如图表示动物细胞培养程序图,请据图回答下列问题:
(1)过程②表示________________。
(2)过程③和⑥用________处理组织或贴壁细胞分散成单个细胞,这样做的目的是________________________________________________。
(3)④和⑥的过程都要把分散的细胞制成_____________________________________。
(4)过程⑤进行的细胞培养是________,细胞适于________生长增殖。
(5)过程⑦进行的细胞培养是________,一般传至________代后就不易传下去了,传至________继续培养时,增殖会逐渐缓慢,以至于完全停止,部分细胞的________会发生改变。
继续培养时,少部分细胞发生了________,朝着等同于________的方向发展。
进行动物细胞培养时,首先将组织块剪碎,用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理,使其分散成许多单个细胞,然后,用培养液将分散的细胞稀释制成细胞悬液,再将细胞悬液放入培养瓶内,置于适宜环境中培养。
悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。
以后,细胞进行有丝分裂,数目不断增多。
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。
人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。
贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理,然后分别继续培养,让细胞继续增殖,这样的培养过程通常被称为传代培养。
答案:
(1)剪碎组织
(2)胰蛋白酶 解除由于接触对细胞生长和繁殖的抑制 (3)细胞悬液 (4)原代培养 贴壁 (5)传代培养 10 10~50代 细胞核型 突变 癌细胞
(时间:
25分钟;
满分:
50分)
一、选择题(每小题2分,共20分)
1.下列关于动物细胞培养过程的叙述,错误的是( )
A.制作细胞悬液时可以使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理
B.悬液中分散的细胞很快贴附在细胞壁上,细胞贴壁体现了细胞的适应性
C.细胞进行有丝分裂,数量增加到相互接触时可以使用胃蛋白酶处理后分瓶培养
D.10代以内的细胞保持细胞正常的二倍体核型
选C 胃蛋白酶在pH=7时就会变性失活,而细胞培养的pH一般是7.2~7.4。
2.核移植的受体细胞是MⅡ期卵母细胞,下列有关说法错误的是( )
A.MⅡ期卵母细胞质中含有促进细胞核全能性表达的物质
B.MⅡ期卵母细胞体积比较大,操作起来相对容易
C.可以把供体细胞直接注入去核的卵母细胞中
D.MⅡ期卵母细胞对克隆动物的遗传特性没有任何影响
选D 直接把供体细胞注入去核的卵母细胞中也是可以的,并且这样可以减少对细胞核的损伤,更有利于重组细胞的分裂。
MⅡ期卵母细胞提供了线粒体,所含的基因仍然能够控制一些性状,所以克隆动物并不是100%的供体动物的复制。
3.利用下列细胞工程技术培育出的新个体中,只具有一个亲本遗传性状的是( )
①组织培养②细胞融合
③动物胚胎移植④克隆羊技术(多利)
A.①②B.②③
C.①D.①④
选C 组织培养是由同一种生物的细胞分裂分化形成新个体,属于无性生殖,因而新个体只有一个亲本的遗传性状。
细胞融合是由两个细胞融合在一起,融合后的细胞同时具有原来两个细胞的遗传物质。
动物胚胎移植本质仍是有性生殖,只不过当受精卵卵裂到一定阶段后找一个代孕场所,同样具有两个亲本的遗传性状。
克隆羊技术中,多利的产生是通过把一乳腺细胞的细胞核分离出来移植到另一个去核的卵细胞中,发育形成的,它的基因主要来自乳腺细胞的细胞核,也有少数基因来自卵细胞线粒体中的DNA。
4.下列有关植物组织培养和动物细胞培养的比较中,叙述错误的是( )
A.所用的培养基的成分基本相同
B.植物组织培养的结果是培育成植株,动物细胞培养的结果是培育成细胞系
C.植物组织培养的目的是为了快速繁殖和获得无病毒的植株,动物细胞培养的目的是为了获得细胞产物或细胞
D.植物组织培养的原理是细胞的全能性,动物细胞培养的原理是细胞的增殖
选A 动植物细胞培养时培养基的成分差别较大,动物培养基需加入血清,植物培养基需加入激素和琼脂。
5.动物细胞培养的特点是( )
①细胞贴壁 ②有丝分裂 ③分散生长
④接触抑制 ⑤减数分裂
A.①②④B.②④⑤
C.①③④D.③④⑤
选A 动物细胞培养的过程是细胞有丝分裂的过程,在动物细胞培养的过程中存在细胞贴壁、接触抑制等特点。
6.动物细胞培养技术的用途有( )
①生产有价值的生物制品,如病毒疫苗、干扰素等
②生产基因工程技术中所用的受体细胞
③可以用于检测有毒物质
④培养的各种细胞可直接用于生理、病理、药理等方面的研究
A.①②B.①②③
C.②③④D.①②③④
选D 动物细胞培养技术有许多用途,题干中所列内容均属于细胞培养技术的用途范围。
7.下列关于克隆的说法不正确的是( )
A.由一个受精卵发育为一个完整的个体叫做克隆
B.基因克隆是指某目的基因复制的过程
C.动物体细胞克隆要通过细胞核移植形成重组细胞
D.动物克隆的技术基础是动物细胞的培养
选A 克隆是无性繁殖的过程,而受精卵是有性繁殖的产物,因而由一个受精卵发育为一个完整的个体不能叫克隆。
8.细胞工程中,选择合适的生物材料是成功的关键,下列选择不合理的是( )
A.选择高度分化的动物体细胞进行培养有利于获得大量细胞
B.选择胚胎细胞作为核供体进行核移植可提高克隆动物的成功率
C.选择一定大小的植物茎尖进行组织培养可获得脱毒苗
D.选择植物的愈伤组织进行诱变处理可获得优质的突变体
选A 高度分化的动物体细胞的分裂增殖能力很低,因此很难培养获得大量细胞。
胚胎细胞分化程度低,恢复全能性相对容易,因此选择胚胎细胞作为核供体进行核移植可提高克隆动物的成功率。
9.(浙江高考)实验小鼠皮肤细胞培养(非克隆培养)的基本过程如图所示,下列叙述错误的是( )
A.甲过程需要对实验小鼠进行消毒
B.乙过程对皮肤组织可用胰蛋白酶消化
C.丙过程得到的细胞大多具有异倍体核型
D.丁过程得到的细胞具有异质性
选C 图示甲过程是进行动物细胞培养的第一步——获取动物组织,为了避免杂菌污染,应进行消毒处理,A正确;
乙过程为获取单个动物细胞,可用胰蛋白酶消化,B正确;
丙过程得到的细胞系通常为有限细胞系,遗传物质和染色体数未发生变化,大多数不具有异倍体核型,C错误;
未经克隆化的细胞系具有异质性,D正确。
10.如图为克隆羊“多利”的培育过程示意图,下列表述不正确的是( )
A.由于细胞核基因完全来自甲羊,所以克隆羊“多利”的性状与甲羊完全一致
B.克隆羊“多利”的培育过程中采用的生物技术有核移植
C.乙羊的去核卵细胞为重组细胞基因表达提供了细胞内的环境条件
D.此过程说明高度分化的动物细胞核也具有全能性
选A 生物的性状是由细胞核基因和细胞质基因共同控制的,还要受环境的影响。
题中“多利”的细胞核基因来自甲羊,而细胞质基因主要来自乙羊,所以“多利”羊的性状应与甲羊基本相同,同时受乙羊和环境的影响。
二、非选择题(共30分)
11.(9分)现有A和B两个肉牛品种,A品种牛的细胞组成可表示为A细胞核、A细胞质;
B品种牛则为B细胞核、B细胞质。
(1)如果要获得一头克隆牛,使其细胞由A细胞核和B细胞质组成,基本步骤是:
从A品种牛体内取出体细胞,进行体外培养。
然后再从培养细胞中取出________注入B品种牛的________卵母细胞,经过某种刺激和培养后,可形成胚胎,该胚胎被称为________,将该胚胎移入代孕母牛的________中,通过培育可达到目的。
(2)克隆牛的产生说明________具有全能性。
克隆牛的性状主要表现________品种牛的特征。
由A、B两品种杂交得到的牛与克隆牛相比,杂交牛细胞核的遗传物质来自________个亲本,细胞质几乎完全来自________性亲本,克隆牛和杂交牛的遗传物质组成________(选填“相同”或“不同”)。
动物细胞的全能性表达受到抑制,但克隆牛(羊)等动物的过程可以证明其细胞核仍具有全能性。
克隆牛的性状主要由核基因控制,因此主要表现为供核牛的性状。
杂交牛中细胞核的遗传物质来自公牛和母牛两个亲本,而细胞质基因几乎完全来自母牛亲本,所以杂交牛和克隆牛的遗传物质不同。
(1)细胞核 去核 重组胚胎 子宫
(2)动物体细胞核 A 两 雌 不同
12.(13分)回答下列有关动物细胞培养的问题:
(1)在动物细胞培养过程中,当贴壁细胞分裂生长到细胞表面__________时,细胞会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的__________。
此时,瓶壁上形成的细胞层数是________。
要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来,需要用酶处理,可用的酶是________。
(2)随着细胞传代次数的增多,绝大部分细胞分裂停止,进而出现________________的现象;
但极少数细胞可以连续增殖,其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成__________细胞,该种细胞的黏着性________,细胞膜表面蛋白质(糖蛋白)的量________。
(3)现用某种大分子染料,对细胞进行染色时,观察到死细胞被染色,而活细胞不染色,原因是________________________________________________________________________
(4)检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目,最好选用细胞分裂到________期的细胞用显微镜进行观察。
(5)在细胞培养过程中,通常在________条件下保存细胞。
因为在这种条件下,细胞中________的活性降低,细胞__________的速率降低。
(6)给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后,发生了排斥现象,这是因为机体把移植的皮肤组织当作________进行攻击。
(1)在动物细胞培养时,当贴壁细胞分裂生长到相互接触时,就会停止生长繁殖,这种现象称为接触抑制。
瓶壁上形成的细胞成单层排列,要使贴壁生长的细胞从瓶壁上分离下来,需用胰蛋白酶处理,溶解细胞间的蛋白质。
(2)随着细胞传代次数增多,绝大部分细胞分裂停止,出现衰老或死亡现象,但极少数细胞因遗传物质发生改变,变成不死性(癌变)细胞,这种细胞的黏着性降低,细胞膜表面糖蛋白的量减少。
(3)用某种大分子染料,对细胞进行染色,活细胞具有生物活性(膜的选择透过性),大分子染料不能进入活细胞内,所以活细胞不着色,而死细胞的膜丧失了选择透过性,大分子染料可以进入细胞而着色。
(4)观察细胞染色体数目的最佳时期为处于有丝分裂中期的细胞,此时染色体形态稳定数目清晰。
(5)细胞最好在冷冻(超低温或液氮)条件下保存,温度低,细胞中酶的活性下降,代谢速率减慢,有机物损耗速率减慢,细胞存活时间延长。
(6)给患者移植组织器官时,由于不同人的组织相容性抗原不同,会引起机体的免疫反应。
这里移植的皮肤对于患者来说相当于抗原,患者的免疫系统会加以排斥。
(1)相互接触 接触抑制 单层(或一层) 胰蛋白酶
(2)衰老甚至死亡 不死性 降低 减少
(3)由于活细胞的膜具有选择透过性,大分子染料不能进入活细胞内,故活细胞不能着色(或由于死细胞的膜丧失了选择透过性,大分子染料能够进入死细胞内而着色) (4)中 (5)冷冻(或超低温、液氮) 酶 新陈代谢 (6)抗原
13.(8分)如图是利用现代生物工程技术治疗遗传性糖尿病的过程图解,请据图回答下列问题:
(1)图中①所示的结构名称是________________。
(2)图中③、④所示的生物技术名称分别是____
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